使用尿液生物标记诊断肾病（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）、监测肾病发展，与评估肾病治疗之功效。这些尿液生物标记包括白细胞相关免疫球蛋白样受体－２（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－２）、α－１酸性醣蛋白（ａｌｐｈａ－１ａｃｉｄ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、其片段与其组合。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肾病相关的生物标记相关申请本申请要求2009年1月28日提交的美国临时申请No. 61/147785的优先权，将其内容通过提述以其整体并入本文。
技术介绍
肾病(η印hropathy)，一般已知为糖尿病、高血压、药物毒性，与发炎所引起之肾损伤(kidney damage)。肾病通常藉由测定蛋白尿(proteinuria)(例如尿白蛋白(urine albumin)的水平)的水平或藉由检查肾功能指标-肾小球过滤率(glomerular filtration rate,GFR), 来进行诊断。但目前早期肾病无法显示症状供此两种方法侦测早期肾病。虽然可根据肾组织切片来侦测肾病，但此侵入式方法并非理想的诊断方式。研发侦测早期肾病的方法非常重要。达成此目标之关键点在于鉴定出与初期肾病相关的可靠生物标记。
技术实现思路
本专利技术为根据意想不到地发现白细胞相关免疫球蛋白样受 # -2 (leukocyte-associated Ig-Iike receptor-2) > α _1 酸 f生酉唐蛋白(alpha-lacid glycoprotein)和这两种蛋白质的片段在尿液内的水平，在肾病(η印hropathy)患者中显着高于无肾病的患者。这些蛋白质分子因而为早期肾病的诊断的可靠生物标记。因此，本专利技术特征之一为肾病诊断的方法。此方法至少包括下列步骤(a)自被怀疑具有肾病的个体取得尿液样本，(b)测定该尿液样本中生物标记的水平，与(c)根据该生物标记的水平评估是否该个体具有肾病。于先前所叙述的方法中使用的生物标记为下列之一 (i)白细胞相关免疫球蛋白样受体-2或其具有至少十个氨基酸的片段， 如DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(SEQ ID NO 1), (ii)具有至少十个氨基酸的α-l酸性醣蛋白的片段，如 GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGL S(SEQ ID NO 2), (iii)⑴与(ii) 的组合，或(iv)(i)与α-l酸性醣蛋白的组合。当四个生物标记之一的水平高于无肾病个体，则可指出该个体具有肾病。在一实施例中，生物标记水平透过质谱分析(例如， SM fli 1 #7 I % ^ M iH (Matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry, MALDI—MS)、液才目层析质i普(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS),与液才匿层析串联质 ill (liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS))来测定。在另一实施例中，透过免疫分析(例如，酶联免疫吸附分析(enzyme-link immunosorbent assay, ELISA)、Western 印迹(Westernblot)、放身寸免疫分析(radioimmunoassay, RIA)、焚光免疫分析(fluorescence immunoassay, FIA)与冷光免疫分析(luminescence immunoassay, LIA))来测定。上述肾病诊断方法可应用于人与实验动物两者，例如没有蛋白尿(proteinuria) 的那些。此使用之术语“实验动物”意指一般使用于动物测试的脊椎动物，例如，小鼠、大鼠、 兔、猫、狗、猪，与非人灵长类动物。本专利技术之另一特征为一种可于个体中监测肾病的发展的方法。此方法包括(a)自罹患肾病的个体(例如，人或实验动物)取得第一尿液样本，(b)测定于该第一尿液样本中上列四个生物标记之一的水平，(c)在取得该第一尿液样本后2周至12个月自该个体取得第二尿液样本，(d)测定于该第二尿液样本中该生物标记的水平，与(e)评估该个体中肾病的发展。该第二尿液样本中该生物标记的水平较该第一尿液样本中增加，可指出该个体中的肾病恶化。当个体为患有早期肾病的人，该第二尿液样本在该第一尿液样本后6至12个月取得。对于晚期肾病的人类个体，该第二尿液样本在该第一尿液样本后3至6个月取得。 当此方法应用于实验动物时，该第二尿液样本在该第一尿液样本后2至M周取得。于又另一特征中，本专利技术提供一种监测肾病患者中肾病治疗的功效的方法，包括 (a)测定在治疗前于来自该肾病患者的尿液样本中上列生物标记之一的水平，(b)测定在治疗后于来自该患者的尿液样本中该生物标记的水平，与(C)根据在治疗后该生物标记的水平的变化评估该治疗的功效。与治疗前之生物标记水平相较，当生物标记于治疗后之水平维持相同或下降时，判定该治疗为有效的。本专利技术也提供评估试剂的肾毒性的方法，包括(a)自以试剂治疗的个体于治疗中的不同时间点取得多个尿液样本，(b)测定各尿液样本中上述生物标记之一的水平，与(C) 根据该生物标记在治疗中的水平变化评估该试剂的肾毒性。在该治疗过程中该生物标记水平的增加指出该试剂具肾毒性。试剂可为化合物(例如，药物或药物候选物)、草药产品，与食物产品。本专利技术更进一步提供对于任何上述方法有用的试剂盒。该试剂盒包含特异性结合白细胞相关免疫球蛋白样受体-2的第一抗体与特异性结合α-l酸性醣蛋白的第二抗体。 两个抗体皆可为完整的免疫球蛋白分子。在一个实施例中，该试剂盒仅含有对于欲被侦测的抗原(如肾病的生物标记)特异性的抗体以供实施此处公开的方法之一。即，其实质上由此类抗体所组成。在本专利技术范围中也有一种分离的抗体，其特异性结合至 DFLELLVKGTVPGTEASGFDAP(SEQ ID NO 1)，或GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO :2)。此处使用的术语“分离的抗体”意指基本上无天然结合之分子的抗体。可更具体地说，当制备物中天然结合之分子占至多20%干重时，含此抗体的制备物被视为“分离的抗体”。纯度测量可藉由任何适合的方法，例如柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis)，与高效液才目层析(high-performance liquid chromatography, HPLC)。上述之任何抗体可用于制造对于实施本专利技术的任何方法有用的试剂盒。本专利技术之一或多个实施例于下面叙述中列出。本专利技术的其它特征或优点显示于下列数个实施例的详细叙述与所附的权利要求中。附图简述附图说明图1为一显示于健康对照与具有不同类型之肾病的患者中，白细胞相关免疫球蛋白样受体-2的片段与α-1酸性醣蛋白的片段的水平的经结合的箱线图(boxplots)。DN、 IgAN, CHN与MGN指糖尿病肾病、IgA肾病、中草药肾病，与膜状肾小球肾炎(membranous glomerulonephritis)肾病。箱型(boxes)的上限、下限及该箱型中的横线分别标示为 25%数值、75%数值及中位数值。上方虚线标示上围篱值(upper fence)以下的最大值，其为75%数值加1.5四分位距(interquartile range)，而下方虚线标示下围篱值(Iawer fence)以上的最小值，其为25%数值减1. 5四分位距。图2为一显示于健本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种于个体中诊断肾病的方法，包括：自被怀疑具有肾病之个体取得尿液样本；测定于该尿液样本中生物标记的水平，该生物标记选自下组：（ｉ）第一蛋白质分子，其为白细胞相关免疫球蛋白样受体－２或其具有至少十个氨基酸的片段，（ｉｉ）第二蛋白质分子，其为具有至少十个氨基酸的α－１酸性醣蛋白的片段，（ｉｉｉ）所述第一与第二蛋白质分子的组合，与（ｉｖ）所述第一蛋白质分子与α－１酸性醣蛋白的组合；以及根据该生物标记的水平评估该个体是否具有肾病，当与无肾病个体中该生物标记的水平相比较，该生物标记水平的增加可指出该个体具有肾病。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾锱翎，
申请(专利权)人：财团法人工业技术研究院，
类型：发明
国别省市：71
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。