人骨桥蛋白siRNA制造技术

本发明专利技术提供一种用于更特异且更强地抑制人骨桥蛋白表达的siRNA、含有该siRNA的组合物和药品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于抑制人骨桥蛋白(Osteopontin，0ΡΝ)表达的siRNA。
技术介绍
多细胞生物，是由细胞-组织-器官-个体进行阶段性地构成，通过最小单位的细 胞相互粘附或者与细胞外的物质进行粘附而形成。对于组织的构成，在细胞-细胞间的粘 附的同时，也有细胞-细胞外基质之间的粘附。在这种细胞间的粘附中，存在于细胞外基 质、膜中的细胞粘附分子以及细胞粘附分子的细胞内的作为结合物的细胞骨架起着重要的 作用。参与细胞一细胞外基质间粘附的细胞粘附分子，基于细胞外基质的结合，起到了细胞 分化、信号转导的作用。因此，通过分析细胞粘附分子与细胞外基质的粘附机构，解析各种 疾病中的机理，进而惠及治疗。作为一种细胞外基质的骨桥蛋白(OPN)，是分子量约为41kDa的分泌型酸性磷酸 化糖蛋白，分子中心部存在在与α ν等的整合蛋白(integrin)之间的粘附中起重要作用 的GRGDS序列，紧跟其后存在凝血酶裂解位点(R168S169)。此外，紧跟GRGDS序列后存在的 SVVYGLR序列，与参与炎症的称为α9β1、α4β1、α 4 β 7的整合蛋白相结合。关于OPN的报道有细胞粘附、细胞迁移、控制一氧化氮(NO)产生、参与免疫系统等 多种功能，已指出其参与了癌转移、风湿性关节炎和多发性硬化症等慢性炎症疾病、自身免 疫疾病等多种难治疾病的病状。特别是指出了其直接参与炎症性疾病。作为OPN的受体的α 9整合蛋白在嗜中性 粒细胞上进行表达，α 4整合蛋白在淋巴细胞上进行表达，因此考虑通过抑制OPN功能来抑 制包括嗜中性粒细胞的白细胞的迁移，以此期待有抗炎症作用。事实上，已有报道OPN缺陷小鼠对肿瘤、风湿性(rheumatism)关节炎、多发性硬化 症(EAE)、动脉硬化等疾病显示出抵抗性(非专利文献1 4)。此外，也有报道是采用相对 于OPN的中和抗体，对风湿性关节炎有缓解(非专利文献5)。因此，基于对OPN功能的抑制，认为能够期待其治疗效果，研究了在作为新型分子 特异性敲低(knock down)法的RNAi(RNA干扰RNA interference)法的治疗方面的应用。所谓RNAi法，是指采用小片段干扰性dsRNA(siRNA(小片段干扰性RNA small interfering RNA))，对特定基因的表达在基因水平上迅速进行表达抑制的技术(非专利文 献6和7)。从OPN的mRNA序列中，选择2个以上靶序列，合成该siRNA，通过使OPN敲低以 关联于对疾病的治愈。在专利文献1中，记载有编码骨桥蛋白部分的RNA在涉及IL-Ιβ的结缔组织疾病 的治疗中的应用。但是，对于作为siRNA的应用，没有任何公开。在专利文献2中记载，FGFR(成纤维细胞生长因子受体fibroblast growth factor receptors)的siRNA和FGFR使OPN基因的表达亢进。但是，对于OPN的siRNA，没 有任何公开和启示。此外，利用载体以离体方式形成双链RNA，并将其采用RNaseIII核酸分解酶家族之一的dicer来切割而得到的由siRNA的群体所构成的基因操作使用的试剂盒已在 市面上出售(SuperSilencing (注册商标)人(Human) SPPl siRNA 试剂盒(Secreted phosphoprotein 1 (分泌型磷蛋白质 1) (osteopontin(骨桥蛋白)，bone sialoprotein I (骨唾液酸蛋白I)，early T-Iymphocyte activation 1 (早期Τ-淋巴细胞活化1)))，非 专利文献8)。但是，该试剂盒是以研究基因表达为目标，用于采用siRNA抑制特定基因的表 达，而对于siRNA的医药用途并没有任何公开。此外，由上述制备方法所得到的siRNA，还含 有非分子特异性的短RNA片段，因此，存在所谓基因敲低特异性低的缺点。最近，作为有效用于处理由骨桥蛋白亢进引起的疾病的药品等的作为OPN的 siRNA,从小鼠、大鼠以及人的OPN的mRNA中得到siRNA (专利文献3)。现有技术文献专利文献1 日本特开平8-191693专利文献2 美国专利申请公开第2003/0143676A1号说明书专利文献3 日本特开2005-323591非专利文献 1 :Nemoto H,Rittling SR,Yoshitake H,Furuya K,Amagasa Τ,Tsuji K,Nifuji A,Denhardt DT,Noda Μ. Osteopontin deficiency reduces experimental tumor cell metastasis to bone and soft tissues. JBone Miner Res. 16 :652-9,2001.非专利文献2 =Yumoto K, Ishijima Μ, Rittling SR, Tsuji K, Tsuchiya Y, Kon S, Nifuji A, Uede Τ, Denhardt DT, Noda Μ. Osteopontin deficiency protects joints against destruction in anti-type II collagen antibody-induced arthritis in mice.Proc Natl Acad Sci U S A. 99 :4556-4561,2002.非专利文献3 :Chal3as D, Baranzini SE, Mitchell D, Bernard CC, Rittling SR, Denhardt DT,Sobel RA,Lock C,Karpuj M,Pedotti R,Heller R,Oksenberg JR,Steinman L. The influence of the proinflammatory cytokine, osteopontin, on autoimmune demyelinating disease. Science. 294 1731-5,2001.非专利文献4 =Matsui Y, Rittling SR, Okamoto H, Inobe Μ, Jia N, Shimizu Τ, Akino Μ, Sugawara Τ, Morimoto J, Kimura C, Kon S, Denhardt D, Kitabatake A, Uede Τ. Osteopontin Deficiency Attenuates Atherosclerosis in Female Apolipoprotein Ε-Deficient Mice.Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 :1029—34，2003.非专禾Ij文献 5 :Yamamoto N, Sakai F, Kon S, Morimoto J, Kimura C, Yamazaki H, OkazakiI, Seki N, Fujii T, Uede T.Essential role of the cryptic epitope SLAYGLR with本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＲＮＡ、ＲＮＡ的互补链或它们的衍生物，其中，ＲＮＡ由序列号３、４、５、６或７所示的序列构成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.RNA、RNA的互补链或它们的衍生物，其中，RNA由序列号3、4、5、6或7所示的序列构成。2.双链RNA或双链RNA的衍生物，其中，双链RNA由序列号3、4、5、6或7所示的序列构 成的RNA和它们各自的互补链构成。3.一种用于抑制骨桥蛋白的表达的医药组合物，其中，含有权利要求2所述的双链RNA 或双链RNA的衍生物。4.一种用于抑制骨桥蛋白的表达的药品，其中，作为有...

【专利技术属性】
技术研发人员：上出利光，
申请(专利权)人：株式会社遗传科技，
类型：发明
国别省市：JP