本发明专利技术公开了一种抗骨桥蛋白抗体，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的三个高变区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列分别为：GGSFSGYYW、IYYSGSTYYNPSLKS、HDYYDFWSGYYDAFDI，所述轻链可变区的三个高变区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列分别为：TGSSSDVGDYYYVS、DVNYRPS、SSYRDTQILG。本发明专利技术抗骨桥蛋白抗体特异性高，制备过程相对简单，成本低廉。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗体，尤其涉及一种抗骨桥蛋白抗体。
技术介绍
骨桥蛋白(osteopontin，0ΡΝ)是一种分泌型磷酸化糖蛋白，在多种腔上皮，如消化道黏膜中有少量表达，可参与细胞的信号转导，促进细胞黏附和迁移。Senger等于1979年首次在恶性转化的上皮细胞株中发现，称之为转化相关性磷酸蛋白。1986年，Franzen等从骨组织中分离出一种磷蛋白，其特性与Senger等发现的磷蛋白相似，正式将其命名为骨桥蛋白。 骨桥蛋白也是一种非常重要的致炎症细胞因子，由巨噬细胞、树突状细胞、角质化细胞与上皮细胞产生。它属于4-α-螺旋束细胞因子家族。骨桥蛋白能够活化多种免疫细胞、刺激它们增殖并延长其寿命。近年来对骨桥蛋白与肿瘤的关系的研究发现，骨桥蛋白的过度表达与人类多种肿瘤，如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤、食管癌、肝癌等肿瘤细胞生长、增殖和侵袭、转移密切相关。卵巢癌是妇科常见三大恶性肿瘤之一，其病死率位列妇科三大恶性肿瘤之首。因早期时缺乏典型症状，无创检查不易发现其早期病变，故多数病例发现时已属晚期。卵巢癌III期及IV期患者的5年生存率不到20%，而I期患者的5年生存率可90%。临床上普遍采用的糖类抗原CA125。然而，仅50%左右早期至I期和II期的卵巢癌病患血清中能检测到 CA125 的高表达(Coticchia 等，“Ovarian cancer biomarkers Current options andfuture promise. ”《J Natl Compr Cancer Network)) 2008 年第 6 卷 8 期)。骨桥蛋白不仅在卵巢癌及卵巢交界性恶性肿瘤组织中的表达高于在良性肿瘤和正常卵巢上皮组织，而且晚期卵巢癌组织中的表达也明显高于早期癌，在有癌转移的淋巴结中同样高表达。OPN的血清学检查不仅可以用于区别健康人群和卵巢癌患者，还可用于区分卵巢癌和卵巢良性肿瘤。OPN与其他肿瘤标志物联合检测时可以提高卵巢癌的检出率(Dutta 等，“Biomarkers for ovarian cancer detection and therapy·，，((Cancer Biol&Therapy)) 2010 年第 9 卷 9 期)。马哲和张虹(“骨桥蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义。”《现代诊断与治疗》2011年第22卷3期)采用免疫组化法检测35例上皮性卵巢癌组织、17例交界性卵巢肿瘤、15例卵巢良性肿瘤组织及6例正常卵巢组织标本中OPN的表达，分析其与临床病理特征的关系及相关性。结果发现OPN在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中阳性表达率分别为69%、65%、26%及0%。因此，OPN在卵巢癌组织中显著高表达；其表达和术前血CA125水平相关，足卵巢癌早期诊断、病情监测及评价预后的生物标志物之一。骨桥蛋白在肺癌病患血清中也有高表达，血清OPN检测在肺癌患者临床诊疗中同样有应用价值。董淑敏等(“肺癌患者外周血骨桥蛋白检测的临床意义”《现代中西医结合杂志》2008年24期)选择不同临床 Μ分期的肺癌患者120例作为肺癌组，同期肺炎性假瘤患者23例作为疾病对照组，49例门诊体检正常者作为健康对照组，应用酶联免疫吸附法(ELISA)进行血清骨桥蛋白水平检测。同时对其中67例临床治疗有效的肺癌患者行治疗前后(放化疗或手术前后)该肿瘤标志物血清水平比较。结果血清骨桥蛋白水平在I II期患者中为(73. 7±32. 9) μ g/L，在III期患者中为(144. 6±44. 7) yg/L，在IV期患者中则可达(395. 8±105. 2) μ g/L。说明骨桥蛋白血清水平是一个较好的评价肺癌进展程度的血清学指标，且有助于临床对肺癌临床疗效的评判。
技术实现思路
本专利技术提供了一种特异性高的抗骨桥蛋白抗体。一种抗骨桥蛋白抗体，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的三个高变区 CDRHl、CDRH2、CDRH3 的氨基酸序列分别为GGSFSGYYW、IYYSGSTYYNPSLKS、HDYYDFWSGYYDAFDI，所述轻链可变区的三个高变区⑶RL1、⑶RL2、⑶RL3的氨基酸序列分别为TGSSSDVGDYYYVS、DVNYRPS、SSYRDTQILG。所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO. I所示。 所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。所述抗骨桥蛋白抗体可以是全抗体、抗体片段或单链抗体。本专利技术还提供了编码所述抗骨桥蛋白抗体的基因。本专利技术还提供了所述抗骨桥蛋白抗体在在检测卵巢癌细胞和肺癌细胞中的应用。本专利技术抗骨桥蛋白抗体特异性高，制备过程相对简单，成本低廉。附图说明图I为本专利技术抗骨桥蛋白单链抗体的结构示意图；图2为实施例6诱导表达产物纯化前后的凝胶电泳图；其中，I为产物纯化前，2为产物纯化后；图3为实施例7本专利技术抗体浓度与OD45tl关系曲线图；图4为实施例8本专利技术抗体检测肿瘤细胞株(卵巢癌和肺癌细胞株)骨桥蛋白(OPN)表达的结果。OPN是包被纯化后的骨桥蛋白(lyg/ml)。具体实施例方式本专利技术采用专利申请01813639. 7公开的方法构建人单链抗体文库，并在人单链抗体文库中筛选OPN抗体，具体实施过程如下实施例I逆转录和扩增得到人抗体重链和轻链DNA以来自人骨髓、人胎肝、人脾和人外周血白细胞的poly A+RNA(购自Clontech)为模板，并使用从Clontech购得的逆向转录酶试剂盒，以oligo(dT)和随机引物(randomprimers)为引物，根据Clontech试剂盒所提供的方法指南，将polyA+RNA逆向转录成cDNA。以上述cDNA为模板，使用一系列识别人抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因的引物，应用PCR法扩增人抗体中所有的重链和轻链的可变区。一系列识别人抗体重链和轻链可变区基因的引物序列如下第一组人抗体重链可变区(VH)基因的5’ -端引物VHlb :5，-CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC CAG GTG CAG CTGCAG GAG TC(C/G)GVH2b :5’ -CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC CAG GTA CAG CTGCAG CAG TCAVH3b :5’ -CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC CAG GTG CAG CTACAG CAG TGG GVH4b:5’ -CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC GAG GTG CAG CTG(G/T)TG GAG(A/T)C(C/T)VH5b :5，-CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC CAG GTC CAGCT(G/T)GT(A/G)CAG TCTGGVH6b :5，-CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC CAG(A/G)TC ACCTTG AAG GAG TCT GVH7b :5’ -CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC CAG GTG CAG CTGGTG (C/G) A (A/G) TCTGG·第二组人抗体重链可变区(VH)基因的3’ -端引物VHlf :5’ -GCC GCC 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗骨桥蛋白抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于，所述重链可变区的三个高变区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列分别为：GGSFSGYYW、IYYSGSTYYNPSLKS、HDYYDFWSGYYDAFDI，所述轻链可变区的三个高变区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列分别为：TGSSSDVGDYYYVS、DVNYRPS、SSYRDTQILG。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：华绍炳，侯伟，
申请(专利权)人：杭州德同生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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