本发明专利技术涉及结合到RSV的G蛋白并且能够中和RSV A和B亚型的分离的抗体和抗原结合片段，和其在诊断、预防、和/或治疗RSV感染中的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】结合到RSVG蛋白的人类抗体 专利
本专利技术设及医学。本专利技术尤其设及特异性结合到呼吸道合胞体病毒巧SV)的附着 糖蛋白（G蛋白）并且中和RSV的抗体和抗原结合片段。本专利技术还设及使用抗RSV抗体的 诊断、预防W及治疗方法。 阳00引专利技术背景 人类呼吸道合胞体病毒巧SV)是副粘病毒科（Paramyxoviridae)的一种负义单链 RNA病毒，该科还包括常见呼吸道病毒，如导致麻疹和腮腺炎的呼吸道病毒。存在两种原始 RSV亚型：亚型A和亚型B。RSV在上呼吸道中复制并且然后蔓延到下气道，导致细支气管 炎或肺炎。该病毒引起炎症、气道水肿、粘液产生增加W及呼吸上皮破裂。 估计全世界有6400万例呼吸道疾病和160, 000例死亡可归因于RSV诱发的疾病。 严重RSV感染最通常出现在儿童和婴儿中、尤其早产儿中。潜在健康问题（如慢性肺病或 先天性屯、脏病）可能会显著增加重病的风险。RSV感染还可能会在年老者、患有慢性肺病的 个体W及免疫功能不全的成人（如骨髓移植接受者）中引起重病。 阳0化]已经研究若干用W预防和治疗RSV感染的方法。从供体分离的静脉注射免疫球蛋 白巧SV-IGIV;Resp沿am⑧）和单克隆抗体帕利珠单抗（SYNA创沪'）已经得到批准用 于在高风险早产儿中进行RSV预防。然而，用于RSV的疫苗或可商购治疗仍不可获得。仅 利己韦林（一种RNA抑制剂）得到批准用于治疗RSV感染。为了有效用于治疗RSV感染， 高剂量、重复给药和/或大量的抗体产品（如帕利珠单抗）因低有效性而是所需的。 RSV具有两种主要表面糖蛋白，F和G。F蛋白介导融合，使得病毒进入到细胞 的细胞质中并且促进体外合胞体的形成。F蛋白序列在RSV株之中是充分（约90% ) 保守的（约翰逊（Johnson)和柯林斯（Collins),《普通病毒学杂志》（JGenVirol), (1988)69:2623-2628)。唯一市售的单克隆抗体帕利珠单抗针对RSV的F蛋白。 RSV的G蛋白是一种严重糖基化并且充当附着蛋白的表面蛋白。与F蛋白对比，G 蛋白在病毒株中除中央保守域（CCD)外相当可变，该中央保守域包含RSVA2株的G蛋白的 氨基酸残基153-184或其他病毒株中的相对应的氨基酸残基。中央保守域和相邻区（残基 145-193)W刚性和重0-糖基化粘蛋白样区为边界。中央保守域的N末端那一半含有一个 在多于700种病毒株之中保守的小区。C末端那一半含有4个W1-4、2-3布局连接的保守 半脫氨酸并且折叠为一个脫氨酸套索。 尽管使用针对G蛋白的抗体进行的被动免疫一般由于在病毒株中缺乏序列保 守性而被视为不切实际的，但中和结合到RSVG蛋白的单克隆抗体是已知的。安德森 L.J. (Anderson,L.J.)等人（《病毒学杂志》（J.Virol.) (1988)62:4232-4238)描述了F和 G鼠类单克隆抗体混合物的中和能力，运些抗体之一结合到RSVG蛋白（即131-2G)。运种 抗体的抗原位点后来由萨伦德（Sullender)定义（《病毒学》(Virol.) (1995)209:70-79)。 发现运种抗体结合代表RSV的主要病毒株的RSV组A和B。另外，WO2009/055711披露了 与RSVA2的G蛋白内的保守基元具有免疫反应性并且针对RSVA和B亚型具有中和活性 的抗体，如3D3和3G12。运些抗体已经显示识别中央保守域中的线性表位，但尚未在优选动 物模型（即棉花大鼠）中进行测试用于评估RSV抗体和疫苗。 鉴于特别是在幼儿和年老者中由RSV引起的呼吸道疾病的严重程度，持续需要用 W预防和治疗RSV感染的有效手段。 专利技术概述 本专利技术提供了特异性结合到RSVG蛋白并且能够中和RSV的分离的抗体和其抗原 结合片段。运些抗体和抗原结合片段优选地能够特异性结合到并且中和亚型A和B的RSV。 优选地，运些抗体是人类抗体。运些抗体结合到该RSVG蛋白的中央保守未糖基化区（也 称为中央保守域，CCD)中的表位。 运些抗体和抗原结合片段对于该G蛋白具有高亲和力并且具有有力的中和能力。 运些本专利技术的抗体和抗原结合片段单独和与其他诊断、预防和/或治疗剂组合可用作诊 断、预防和/或治疗剂。 本专利技术进一步提供了组合物，运些组合物包含一种或多种本专利技术的抗体和/或其 抗原结合片段。本专利技术还提供了使用运些抗RSV抗体的诊断、预防W及治疗方法。预防和 治疗方法包括将运些抗RSV抗体和/或其抗原结合片段给予人类受试者用于预防或治疗一 种RSV感染和RSV介导的疾病或病状和/或改善一种RSV感染的一种或多种症状。多种不 同抗RSV抗体和/或其抗原结合片段和/或与其他抗RSV抗体的组合可W用于组合疗法。 还提供了包含运些抗RSV抗体和/或其抗原结合片段与其他预防或治疗剂组合的组合物。 本专利技术还提供了编码运些抗体或其抗原结合片段的核酸分子。 运些本专利技术的抗体是独特的，在于至少在一种体外中和分析中，针对RSVA和B型 运些抗体比任何已知抗RSVG抗体、特别是比已知抗RSVG单克隆抗体3D3更有力。 运些本专利技术的抗体结合到该RSVG蛋白上的独特表位。 在某些实施例中，运些抗体包含一个在其氨基酸序列中包含一种CXXXXC基元的 重链CDR3。 在某些实施例中，运些抗体和其抗原结合片段是独特的，在于它们与抗RSVF抗体 叠加和/或协同地起作用。【附图说明】 凰I示出了针对RSVGa和RSV抓蛋白的结合特征曲线。在化ISA分析中测试 IgG结合到重组RSVGa和Gb蛋白的胞外域的能力。开口圈（虚线）表示结合到Ga巧SVA/ 长）并且闭口圈（实线）表示结合到Gb巧SVB/B1)。 图2示出了针对RSV-A和RSV-B株的中和特征曲线。在中和分析中测试IgG中和 RSV-A和RSV-B株的能力。开口圈（虚线）表示中和RSV-A巧SVA/A2)并且闭口圈（实线） 表示中和RSV-B巧SVB/18537)。 Ml示出了RSVG特异性单克隆抗体与RSVG肤的结合巧LISA)。跨越中央保守 域的短和长RSVG肤（表15)在一种化ISA中用于结合实验，其中RSVG特异性mAb的浓 度不同：CB003. 1 (闭口黑色圈，实线）、CB010. 7 (开口黑色圈，虚线），或无单克隆抗体（闭 口浅灰色圈）。 图4 :通过化DScan讲行的最小表仿定仿。RSVG蛋白特异性抗体与中央区巧SV-G A型和B型的残基145-201)的所有完全重叠5聚体（mer)、8聚体、10聚体、14聚体、18聚 体、25聚体W及32聚体肤的结合活性。与一种肤的结合活性W与化pScanELISA信号成比 例的垂直线形式示出。 图5 :通讨P巧Scan进行的CB003. 1和CB010. 7表位的完全取代分析。单克隆 抗体CB003. 1和CB010. 7对应地在100和30ng/mL下与一种肤的结合活性W与化pscan ELISA信号成比例的垂直线形式示出。具有20条线的每一组对应于针对初始14聚体肤 (FHFEVFNFVPCSIC)中的每个氨基酸位置设定的完全置换。在每一组的20条线内，取代是基 于单字母氨基酸代码按字母顺序的（ACDEFGHIKLMNPQRSTVWY)并且初始14聚体肤的反应本文档来自技高网...
【技术保护点】
能够特异性结合到呼吸道合胞体病毒(RSV)的G蛋白并且能够中和RSV A和B株的抗体，其中该抗体结合到该RSV G蛋白的中央保守域内的一种表位，并且其中所述表位包含RSV G蛋白RSV A2株的氨基酸161‑169、特别是氨基酸162‑168中的一个或多个氨基酸或其他病毒株中的相对应的氨基酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·瓦迪亚，R·A·威廉森，J·P·M·朗热戴克，G·帕斯夸尔，A·万特沃特，
申请(专利权)人：克鲁塞尔荷兰公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL
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