本发明专利技术提供了特异性结合多肽的3D蛋白特异性单克隆免疫球蛋白A抗体及其组合物，其中所述多肽由选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2组中的一个共识序列表示。本发明专利技术也提供了组合物，包含至少一个第一3D蛋白特异性单克隆免疫球蛋白A抗体，特异性地结合到由共识序列SEQ ID NO：1所代表的第一多肽，至少一个第二3D蛋白特异性单克隆免疫球蛋白A抗体，特异性地结合到由共识序列SEQ ID NO：2所代表的第二多肽，以及药学上可接受的溶液。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术一般涉及对肠道病毒的预防和治疗试剂，并且更具体地涉及对肠道病毒的 3D蛋白特异性单克隆免疫球蛋白A(IgA)抗体，并进一步涉及预防或治疗组合物，包含3D 蛋白特异性单克隆免疫球蛋白A抗体。
技术介绍
肠道病毒被分为四个主要亚型A，B，C和D，每个亚型包含许多血清型。肠道病毒 引起不同的疾病。例如，手，足和口病（HFMD)中的主要病原体是属于小核糖核酸病毒家族 的肠道病毒71型（EV71)和柯萨奇病毒（CV)。手足口病日益严重的威胁到公众健康，特别 是对婴幼儿。EV71和CV感染导致严重的无菌性脑膜炎，脑炎，心肌炎，急性麻痹，肺水肿，导 致高死亡率。 作为小核糖核酸病毒家族内肠病毒属的成员，EV71具有典型正义单链RNA基因 组，含有单个开放阅读框，编码4个衣壳蛋白（VP1-4)和7个非结构蛋白（2A，2B，2C，3A，3B， 3C和3D)。3D(也称为3Dpci1)蛋白作为病毒RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp)，在病毒负链合 成和一些蛋白质的尿苷酰化（uridylylation)中起着主要作用。从EV71的晶体结构的研 究中发现，一个EV71病毒粒子包含由三个病毒结构蛋白VP1-VP3的60个拷贝形成的核衣 壳，衣壳的内表面附着60个拷贝的小蛋白VP4。 3D在所有肠道病毒中有着高度序列同源性，但与人类蛋白质具有低的同源性。 EV71的3D与小核糖核酸病毒家族的脊髓灰质炎病毒，柯萨奇病毒，鼻病毒和口蹄疫病毒聚 合酶的同源RdRps具有结构/序列相似性。 3D具有N-末端的活性部位。Kiener等用来自EV71C4菌株的重组3⑶蛋白作 为免疫原，分离了单克隆抗体4B12 (IgGl)，识别线性表位DFEQALFS(对应于3D的53-60位 置和EV71聚蛋白的1784-1791)，接近3D聚合酶的活性位点；4B12在变性点杂交法检测到 的所有肠道病毒 71 亚型（Kieneretal.Characterizationofamonoclonalantibody againstthe3Dpolymeraseofenterovirus71anditsuseforthedetectionof humanenterovirusAinfection.Jifedoofe. 2012; 180(1-2):75_83)。 4B12 能 够检测广泛亚型毒株，有力提示3D-特异性单克隆抗体对诊断感染可能是有用的，但没有 提及或建议预防或治疗使用4B12,更不用说一般的3D特异性抗体。 由于疫苗是控制传染病的最好策略，不同EV71的候选疫苗进行了研究，包括EV71 灭活全病毒疫苗，减毒活病毒疫苗，重组VPl疫苗，基于VPl的DNA疫苗，合成肽疫苗和病毒 样颗粒疫苗。福尔马林灭活EV71疫苗在小鼠和恒河猴引发令人满意的免疫保护和交叉反 应性中和抗体的；在中国，EV71灭活疫苗于2013年已完成三期临床试验。由于在感染过程 中外衣壳含有主要抗原位点，合成肽疫苗只含有核衣壳蛋白，包括VPl和VP2(Kungetal. Updateonthedevelopmentofenterovirus71vaccines.ExpertOpinBiolTher. 2014; 3:1-10)〇 因为EV71是一种RNA病毒，通过容易出错的RdRp对如肠病毒71型核衣壳基因 的复制可能会导致相当大的遗传和抗原多样性。Chen等人证明，通过抗VPl的一组单克 隆抗体，基因型不反映其抗原性，EV71病毒可分为不同的抗原组（Chenetal.Antigenic analysisofdivergentgenotypeshumanEnterovirus71virusesbyapanelof neutralizingmonoclonalantibodies:currentgenotypingofEV71doesnotreflect theirantigenicity, 2013; 31 (2) : 425-30)。所有这些表明，选择一个理想的毒 株来开发具有广泛有效性的疫苗是一个挑战。 由于目前没有疫苗和特效抗病毒药物，人类静脉内注射免疫球蛋白（IVIG)-直在 临床上用于治疗严重的EV71感染。然而，EV71感染中抗体依赖性增强作用（ADE)的发现， 显示抗体在控制EV71感染的复合作用。ADE是一种现象，其中先前存在的亚水平的中和 抗体增强病毒进入和复制。亚水平的中和抗体显示，加强EV71感染含有Fc受体的人单核 细胞，并加重EV71感染小鼠。此外，肠病毒抗体之间存在的广泛交叉反应性，也可能成为在 EV71感染中的ADE的潜在风险。Han等证明，低浓度（为50yg/ml)的抗EV71的中和抗体(免疫球蛋白）可增强 肠病毒 71 型感染单核细胞系（Hanetal.Antibodydependentenhancementinfection ofenterovirus71invitroandinvivo.VirolJ.2011; 8:106)。Cao等进一步 研究了各IgG亚类在中和及增强EV71感染中的作用，并发现人的免疫球蛋白的中和活性 主要是由IgGl亚类介导，IgG2亚类较低，IgG3部分没有中和活性，但提高了肠病毒71型 在体外的感染（Caoetal. ,HumanIgGsubclassesagainstenterovirusType71: neutralizationversusantibodydependentenhancementofinfection.PLoSOne. 2013; 8(5) :e64024)。因此，新型疫苗的设计应诱导产生抗体，具有强中和，但较弱的ADE 活性。 由于结构衣壳蛋白因突变而具有抗原多样性，因此难以找出对他们的通用抗体； 到目前为止，已知两个通用的IgG单克隆抗体，一个抗VPKLimetal.Characterization ofanisotype-dependentmonoclonalantibodyagainstlinearneutralizing epitopeeffectiveforprophylaxisofenterovirus71infection.PLoSOne. 2012; 7 (I) :e29751 )，另一个抗VP3(Kieneretal.Anoveluniversalneutralizing monoclonalantibodyagainstenterovirus71thattargetsthehighlyconserved "knob"regionofVP3protein.PLoSNeslTropPis.2014; 8 (5) :e2895)。然而，这些 通用抗体的ADE能力没有被研究。 Jia等人的研究对灭活EV71病毒疫苗的安全问题提出了严重关切（Jiaet al.Thecross-reactivityoftheenterovirus71tohumanbraintissueand identificationofthecross-reactivityrelatedfragments.VirolJ.2010; 7:47)。Jia等人证明在EV71感染的患者本文档来自技高网...
【技术保护点】
3D蛋白特异性单克隆免疫球蛋白A抗体， 其特征在于，所述3D蛋白特异性单克隆免疫球蛋白A抗体特异性地结合多肽，其中所述多肽由选自SEQ ID NO：1 和SEQ ID NO：2中的一个共识序列表示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：鄢慧民，李么明，周谛晗，赵巴利，
申请(专利权)人：鄢慧民，李么明，周谛晗，赵巴利，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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