一种新型的杂交捕获方法及其装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供了一种新型的杂交捕获方法及其装置。揭示了一种新型杂交捕获装置，其包括相配合的反应池组件、膜组件和气控组件。所述反应池组件包括加样池，多列径向排列的反应池组及废液池；所述膜组件为具有延展性的膜；所述气控组件包括内圈气控通道和外圈气控通道。本发明专利技术也揭示了利用所述装置进行杂交捕获的方法。本发明专利技术的装置通过上中下层的巧妙组合、以及各个反应池的有序排列，高效便捷地进行多通量或高通量的杂交捕获实验，保持理想的灵敏度、特异性和准确性。本发明专利技术的方法将原本在酶标板、磁珠等载体上进行的杂交捕获技术转移到一体化装置中，实现了杂交捕获技术的小型化、自动化，且可以同时检测多种靶标核酸或多个样本。

【技术实现步骤摘要】
一种新型的杂交捕获方法及其装置
本专利技术属于检测装置领域，更具体地，本专利技术涉及一种新型的杂交捕获方法及其装置。
技术介绍
杂交捕获技术是一种利用抗体检测靶核酸的技术。其原理为靶DNA与RNA探针杂交(或靶RNA与DNA探针杂交)形成DNA-RNA杂合体，此杂合体作为抗原可被抗DNA-RNA杂合体抗体识别并捕获，进而进行检测。杂交捕获技术不涉及核酸的提取、逆转录和扩增等程序，无需昂贵的PCR扩增仪和单独的核酸扩增实验室，对操作人员的要求也相应的较低。通常，杂交捕获技术在酶标板、磁珠等经典的固相载体上实施。杂交捕获技术与酶联免疫吸附技术具有区别，比如其核酸变性和杂交的步骤涉及到温度的变化，实际操作中所需考虑的因素和可能面临的问题也不同。对于杂交捕获技术，目前面临的问题是通量上难以提高、操作便利性有待提高，因此本领域亟待进行此类的改进。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型的杂交捕获方法及其装置。在本专利技术的第一方面，提供一种高通量的杂交捕获方法，所述方法包括：(1)提供高通量杂交捕获的装置，其包括相配合的反应池组件、膜组件和气控组件；所述反应池组件包括：加样池，多列径向排列的反应池组及废液池，每列反应池组包括反应池一、反应池二、反应池三；加样池、反应池一及反应池二以连通槽串联连通；反应池二与反应池三之间、反应池三与废液池之间存在间隔区；所述膜组件为具有延展性(弹性)的膜，位于反应池组件与气控组件之间；所述气控组件包括内圈气控通道和外圈气控通道，该组件与膜组件接触后能形成与内圈气控通道和外圈气控通道相配合的气控阀区；每列径向排列的反应池组中，反应池二与反应池三之间的间隔区对应内圈气控通道相应的气控阀区，反应池三与废液池之间的间隔区对应外圈气控通道相应的气控阀区；通过控制气控阀区的膜组件形变而控制间隔区的液流，所述内圈气控通道或外圈气控通道充气后膜组件正向形变(膨胀)、抽气后膜组件负向形变(收缩)；(2)在所述反应池三中包被抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体；在所述反应池二中加入核酸探针，当待测样品为DNA时该核酸探针为RNA探针、当待测样品为RNA时该核酸探针为DNA探针；(3)将待测样品加入到加样池，从加样池引入到反应池一；所述待测样品为经核酸解链的样品，或在反应池一进行核酸解链；(4)将内圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变、反应池二与反应池三之间的间隔区封闭；将待测样品引入反应池二，核酸探针与样品中相应核酸进行杂交反应，形成DNA-RNA杂合体；(5)将内圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变、反应池二与反应池三之间的间隔区打开；将外圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变、反应池三与废液池之间的间隔区封闭；将杂交反应后的产物引入到反应池三中，以抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体捕获DNA-RNA杂合体；(6)将所述外圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变、反应池三和废液池之间的间隔区打开；将捕获反应后的废液排入废液池；(7)检测捕获的DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量。在一个优选例中，所述多列径向排列的反应池组为2～200组，具体如5、10、12、15、20、30、50、80、100、150组。在另一优选例中，(1)中，所述反应池组件还包括：独立于加样池的阳性质控反应池组和阴性质控反应池组；所述阳性质控反应池组包括以连通槽相互连通的阳性质控加样池和阳性反应池一，独立的阳性反应池二；阳性反应池一与阳性反应池二之间、阳性反应池二与废液池之间存在间隔区；所述阴性质控反应池组包括以连通槽相互连通的阴性质控加样池和阴性反应池一，独立的阴性反应池二；阴性反应池一与阴性反应池二之间、阴性反应池二与废液池之间存在间隔区；阳性反应池一与阳性反应池二之间、阴性反应池一与阴性反应池二之间的间隔区对应内圈气控通道相应的气控阀区，阳性反应池二与废液池之间、阴性反应池二与废液池之间的间隔区对应外圈气控通道相应的气控阀区；(2)中，还包括：分别在阳性反应池二和阴性反应池二中包被抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体；分别在阳性反应池一和阴性反应池一中加入核酸探针；(3)中，还包括：分别将阳性质控和阴性质控加入到阳性质控加样池和阴性质控加样池；所述阳性质控或阴性质控为经核酸解链的样品，或在阳性质控加样池或阴性质控加样池进行核酸解链；(4)中，内圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变后，阳性反应池一与阳性反应池二之间、阴性反应池一与阴性反应池二之间的间隔区封闭；分别将阳性质控和阴性质控引入阳性反应池一和阴性反应池一，进行杂交反应；(5)中，内圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变后，阳性反应池一与阳性反应池二之间、阴性反应池一与阴性反应池二之间的间隔区打开(液流可流通)；外圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变后，阳性反应池二与废液池之间、阴性反应池二与废液池之间的间隔区封闭(液流不流通)；分别将杂交反应后的产物引入到阳性反应池二和阴性反应池二中，以抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体捕获DNA-RNA杂合体；(6)中，所述外圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变后，阳性反应池二与废液池之间、阴性反应池二与废液池之间的间隔区打开；将捕获反应后的废液排入废液池；(7)中，检测捕获的DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量时，还包括与阳性质控和阴性质控的检测结果进行比较。在另一优选例中，所述反应池组件还包括：试剂池，其与所述径向排列的反应池组的反应池一、阳性质控反应池组的阳性反应池一和阴性质控反应池组的阴性反应池一相连通，用于输送反应试剂、缓冲液或洗涤试剂；较佳地，所述反应试剂包括(但不限于)：抗DNA-RNA杂合体的检测抗体；更佳地其携带可检测标记物。在另一优选例中，(2)中，将变性试剂加样于试剂池，输送至反应池一、阳性反应池一或阴性反应池一，进行核酸解链。在另一优选例中，(2)中，所述的核酸探针为冻干的探针。在另一优选例中，(6)与(7)之间，还包括步骤：将洗涤试剂加样于试剂池，输送至反应池三、阳性反应池二或阴性反应池二，去除未被捕获的样品。在另一优选例中，(7)中，检测捕获的DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量时，将抗DNA-RNA杂合体的检测抗体加样于试剂池，输送至反应池三、阳性反应池二或阴性反应池二，较佳地该检测抗体携带可检测标记物；更佳地进一步还包括：将检测所述可检测标记物的试剂(如所述可检测标记物的特定底物)加样于试剂池，输送至反应池三、阳性反应池二或阴性反应池二，根据标记物获得DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量。在另一优选例中，所述反应池组件位于装置的下层、所述膜组件位于装置的中层，所述气控组件位于装置的上层。在另一优选例中，反应池二与反应池三相靠近的池壁、反应池三与废液池相靠近的池壁、阳性反应池一与阳性反应池二相靠近的池壁、阴性反应池一与阴性反应池二相靠近的池壁、阳性反应池二与废液池相靠近的池壁、阴性反应池二与废液池相靠近的池壁，设置有彼此相对但不连通的槽。...

【技术保护点】
1.一种高通量的杂交捕获方法，其特征在于，所述方法包括：/n(1)提供高通量杂交捕获的装置，其包括相配合的反应池组件、膜组件和气控组件；/n所述反应池组件包括：加样池，多列径向排列的反应池组及废液池，每列反应池组包括反应池一、反应池二、反应池三；加样池、反应池一及反应池二以连通槽串联连通；反应池二与反应池三之间、反应池三与废液池之间存在间隔区；/n所述膜组件为具有延展性的膜，位于反应池组件与气控组件之间；/n所述气控组件包括内圈气控通道和外圈气控通道，该组件与膜组件接触后能形成与内圈气控通道和外圈气控通道相配合的气控阀区；/n每列径向排列的反应池组中，反应池二与反应池三之间的间隔区对应内圈气控通道相应的气控阀区，反应池三与废液池之间的间隔区对应外圈气控通道相应的气控阀区；通过控制气控阀区的膜组件形变而控制间隔区的液流，所述内圈气控通道或外圈气控通道充气后膜组件正向形变、抽气后膜组件负向形变；/n(2)在所述反应池三中包被抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体；在所述反应池二中加入核酸探针，当待测样品为DNA时该核酸探针为RNA探针、当待测样品为RNA时该核酸探针为DNA探针；/n(3)将待测样品加入到加样池，从加样池引入到反应池一；所述待测样品为经核酸解链的样品，或在反应池一进行核酸解链；/n(4)将内圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变、反应池二与反应池三之间的间隔区封闭；将待测样品引入反应池二，核酸探针与样品中相应核酸进行杂交反应，形成DNA-RNA杂合体；/n(5)将内圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变、反应池二与反应池三之间的间隔区打开；将外圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变、反应池三与废液池之间的间隔区封闭；将杂交反应后的产物引入到反应池三中，以抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体捕获DNA-RNA杂合体；/n(6)将所述外圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变、反应池三和废液池之间的间隔区打开；将捕获反应后的废液排入废液池；/n(7)检测捕获的DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种高通量的杂交捕获方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)提供高通量杂交捕获的装置，其包括相配合的反应池组件、膜组件和气控组件；
所述反应池组件包括：加样池，多列径向排列的反应池组及废液池，每列反应池组包括反应池一、反应池二、反应池三；加样池、反应池一及反应池二以连通槽串联连通；反应池二与反应池三之间、反应池三与废液池之间存在间隔区；
所述膜组件为具有延展性的膜，位于反应池组件与气控组件之间；
所述气控组件包括内圈气控通道和外圈气控通道，该组件与膜组件接触后能形成与内圈气控通道和外圈气控通道相配合的气控阀区；
每列径向排列的反应池组中，反应池二与反应池三之间的间隔区对应内圈气控通道相应的气控阀区，反应池三与废液池之间的间隔区对应外圈气控通道相应的气控阀区；通过控制气控阀区的膜组件形变而控制间隔区的液流，所述内圈气控通道或外圈气控通道充气后膜组件正向形变、抽气后膜组件负向形变；
(2)在所述反应池三中包被抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体；在所述反应池二中加入核酸探针，当待测样品为DNA时该核酸探针为RNA探针、当待测样品为RNA时该核酸探针为DNA探针；
(3)将待测样品加入到加样池，从加样池引入到反应池一；所述待测样品为经核酸解链的样品，或在反应池一进行核酸解链；
(4)将内圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变、反应池二与反应池三之间的间隔区封闭；将待测样品引入反应池二，核酸探针与样品中相应核酸进行杂交反应，形成DNA-RNA杂合体；
(5)将内圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变、反应池二与反应池三之间的间隔区打开；将外圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变、反应池三与废液池之间的间隔区封闭；将杂交反应后的产物引入到反应池三中，以抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体捕获DNA-RNA杂合体；
(6)将所述外圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变、反应池三和废液池之间的间隔区打开；将捕获反应后的废液排入废液池；
(7)检测捕获的DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，所述反应池组件还包括：独立于加样池的阳性质控反应池组和阴性质控反应池组；
所述阳性质控反应池组包括以连通槽相互连通的阳性质控加样池和阳性反应池一，独立的阳性反应池二；阳性反应池一与阳性反应池二之间、阳性反应池二与废液池之间存在间隔区；
所述阴性质控反应池组包括以连通槽相互连通的阴性质控加样池和阴性反应池一，独立的阴性反应池二；阴性反应池一与阴性反应池二之间、阴性反应池二与废液池之间存在间隔区；
阳性反应池一与阳性反应池二之间、阴性反应池一与阴性反应池二之间的间隔区对应内圈气控通道相应的气控阀区，阳性反应池二与废液池之间、阴性反应池二与废液池之间的间隔区对应外圈气控通道相应的气控阀区；
(2)中，还包括：分别在阳性反应池二和阴性反应池二中包被抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体；分别在阳性反应池一和阴性反应池一中加入核酸探针；
(3)中，还包括：分别将阳性质控和阴性质控加入到阳性质控加样池和阴性质控加样池；所述阳性质控或阴性质控为经核酸解链的样品，或在阳性质控加样池或阴性质控加样池进行核酸解链；
(4)中，内圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变后，阳性反应池一与阳性反应池二之间、阴性反应池一与阴性反应池二之间的间隔区封闭；分别将阳性质控和阴性质控引入阳性反应池一和阴性反应池一，进行杂交反应；
(5)中，内圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变后，阳性反应池一与阳性反应池二之间、阴性反应池一与阴性反应池二之间的间隔区打开；外圈气控通道充气、气控阀区膜组件正向形变后，阳性反应池二与废液池之间、阴性反应池二与废液池之间的间隔区封闭；分别将杂交反应后的产物引入到阳性反应池二和阴性反应池二中，以抗DNA-RNA杂合体的捕获抗体捕获DNA-RNA杂合体；
(6)中，所述外圈气控通道抽气、气控阀区膜组件负向形变后，阳性反应池二与废液池之间、阴性反应池二与废液池之间的间隔区打开；将捕获反应后的废液排入废液池；
(7)中，检测捕获的DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量时，还包括与阳性质控和阴性质控的检测结果进行比较。


3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述反应池组件还包括：试剂池，其与所述径向排列的反应池组的反应池一、阳性质控反应池组的阳性反应池一和阴性质控反应池组的阴性反应池一相连通，用于输送反应试剂、缓冲液或洗涤试剂；较佳地，所述反应试剂包括：抗DNA-RNA杂合体的检测抗体；更佳地其携带可检测标记物。


4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，(2)中，将变性试剂加样于试剂池，输送至反应池一、阳性反应池一或阴性反应池一，进行核酸解链；或
(2)中，所述的核酸探针为冻干的探针；或
(6)与(7)之间，还包括步骤：将洗涤试剂加样于试剂池，输送至反应池三、阳性反应池二或阴性反应池二，去除未被捕获的样品；或
(7)中，检测捕获的DNA-RNA杂合体的存在情况或存在量时，将抗DNA-RNA杂合体的检测抗体加样于试剂池，输送至反应池三、阳性反应池二或阴性反应池二，较佳地该检测抗体携带可检测标记物；更佳地进一步还包括：将检测所述可检测标记物的试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：金迪琼，李立威，岑博顿，韩斌，虞峰，葛婷婷，华绍炳，叶嘉明，
申请(专利权)人：杭州德同生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33