分枝杆菌细胞壁中分枝菌酸的检测方法技术

技术编号:6406936 阅读:553 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种分枝杆菌细胞壁中分枝菌酸的检测方法。属于微生物种类的测定。本发明专利技术采用高效液相色谱技术,以分枝杆菌细胞壁中分枝菌酸为对象,经分枝杆菌培养,样品皂化,分枝菌酸的提取、衍生,流动相超声脱气,色谱分离,信号采集,统计学分析,建立分枝菌酸分析方法,并构建50种分枝杆菌标准菌株分枝菌酸指纹谱库,实现对临床分枝杆菌感染菌株进行种间水平鉴定的检测方法,为现代结核病学临床与基础研究提供了一种新的指纹方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
1.一种分枝杆菌细胞壁中分枝菌酸的检测方法,其特征在于:采用分枝菌酸分析法建立50种分枝杆菌标准菌株分枝菌酸指纹谱库;对待鉴定的临床分离菌株经相同方法制备分枝菌酸指纹谱,将标准菌株分枝菌酸指纹谱与临床分离菌株分枝菌酸指纹谱的谱型比对,以撷取的每株分枝菌酸特征性指纹峰为依据,实现分枝杆菌种间水平鉴定,所述特征性指纹峰是单峰、双峰、三峰和不规则峰;其中的分枝菌酸分析法:①.取以下原料制备试剂:A液:250g/L KOH用甲醇水按1∶1比例作溶剂,B液:HCl与H2O按1∶1比例的溶液,C液:20g/L KHCO3用甲醇水按1∶1比例作溶剂,D液:称100mg 4-溴苯乙酰基溴溶于20ml氯仿中,E液:250ml B液与250ml甲醇混匀;F液:高分子内标C-100,称1mg溶于2ml氯仿中;②.分枝杆菌培养,分枝杆菌标准菌株培养物和临床分枝杆菌培养物分别转种到改良罗氏培基斜面上;③.MA样品的制备,取受试分枝杆菌培养物2个接种环,分别放入含2ml A液带盖的试管中皂化,高压蒸汽消毒后,加2ml B液,静置分层,提取底层液体至另一个试管内,在通风橱内85℃水浴中蒸发干燥,试管再冷却至室温,加2ml C液,85℃水浴中蒸发干燥,完成MA提取;试管冷却后,加1ml CHCl3,100μl D液,混匀,再加1ml E液,混匀,静置分层,吸取底层液体至另一个试管内,在85℃水浴中蒸发干燥;用200μlCH2Cl2溶解后,离心,吸取上清液,完成MA衍生,备用;色谱分离,信号采集。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王学谦赵凤毅王巨存
申请(专利权)人:天津市天津医院
类型:发明
国别省市:12[中国|天津]

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