本发明专利技术提供了一种磷脂酰乙醇胺脂质体，它是作为抑制ＨＩＶ－１反式激活蛋白与反式激活应答序列ＲＮＡ结合用的抑制剂，该抑制剂也可以是磷脂酰乙醇胺与胆固醇的混合物脂质体，该磷脂酰乙醇胺脂质体是通过以下方法获得的：将脑磷脂储备液旋转蒸发，并用高纯Ｎ↓［２］将有机溶剂吹干后，在旋蒸发器壁上制得脑磷脂干膜，用二次蒸馏水溶解后，得到多室脂质体，将制得的多室脂质体再经超声处理，制得小的单室脂质体，然后再用微孔滤膜对其进行匀化处理。本抑制剂原料价格低廉，抑制效果好，对人体无害。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种作为抑制HIV-1反式激活蛋白(简称HIV-1 Tat)与反式激活应答序列RNA(简称TAR RNA)结合用的磷脂酰乙醇胺脂质体。
技术介绍
艾滋病或获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immunodeficiency Syndrome，简称AIDS)是1981年在美国首先发现的一种病毒性传染疾病，其病原是一种能对人免疫系统产生破坏力的逆转录病毒，1983年命名为人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus，简称HIV)。HIV感染人体后，病毒特异性地侵犯并损耗T淋巴细胞造成肌体细胞免疫损伤，临床初始表现为无症状病毒携带状态，继之发展为持续性全身淋巴结肿大综合症，最后并发各种严重机会性感染和恶性肿瘤，成为艾滋病，因无特效治疗，病死率极高，已成为人类健康的大敌。至今遍布全球五大洲报告的AIDS病例数已超过二百万，HIV感染者近五千万，而AIDS全球死亡人数累计达2200万。在我国，HIV感染人数已超过60万，且仍然呈上升趋势。艾滋病已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题。HIV属于慢病毒属(Lentivirus)逆转录病毒科，可分为HIV-1和HIV-2两种类型，其中HIV-1是引起全球艾滋病流行的主要病因，因此，目前关于HIV的防治研究主要是针对HIV-1进行的。人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的复制受反式激活蛋白(trans-activating protein，Tat)调节，Tat蛋白可以在转录起始及延伸水平反式激活HIV-1LTR的表达，使病毒mRNA水平升高上百倍。Tat蛋白的作用是通过与HIV-1病毒mRNA 5端的一段叫做反式激活反应区域(trans-activation-responsive region，TAR)的特异性结合来实现的。Tat蛋白是由86个氨基酸残基组成的小型蛋白(图1)，有两个主要功能区富半胱氨酸区和基本区，后者是Tat与TAR的特异识别区。TAR RNA可以形成茎环结构(图.2)，其中由三个核苷酸形成的凸出部位是与Tat蛋白亲和性和特异性结合的部位，环形区是活体转录时所需要的，但不是Tat的结合区。HIV Tat和TAR RNA的配合物对病毒复制起重要作用，因此抑制其相互作用成为设计和开发抗爱滋病新药的一个重要靶点。由于AIDS是由TAR RNA病毒引起的，因此那些与TAR RNA有特异性结合的化合物将是有效的抑制剂。而且这种抑制剂应当是对人体无毒和易于被吸收的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种作为抑制HIV-1反式激活蛋白与反式激活应答序列RNA结合用的磷脂酰乙醇胺脂质体，磷脂酰乙醇胺价廉，容易获得，抑制效果好，而且无毒。为达到上述目的本专利技术采用以下技术方案一种抑制HIV-1反式激活蛋白与反式激活应答序列RNA结合用的抑制剂为磷脂酰乙醇胺脂质体。所述的抑制剂也可以为磷脂酰乙醇胺与胆固醇的混合物脂质体。所述的磷脂酰乙醇胺也可以是DSPE或DPPE或DMPE或DHPE或它们的二种或二种以上的混合物，它们分子中烷烃碳原子数为10～18。所述的磷脂酰乙醇胺与胆固醇的摩尔比可以从0.3-0.7∶0.7-0.3。磷脂酰乙醇胺在脑组织中含量甚多，故又称脑磷脂。它的构造如图3所示。天然的脑磷脂是各种磷脂酰乙醇胺的混合物，经分离后得到不同R链长的磷脂酰乙醇胺。根据结构中R链长的不同，磷脂酰乙醇胺可分为1，2-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺disteroyl phosphatidylethanolamine(DSPE)，1，2-二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺dipalmitoyl phosphatidylethanolamine(DPPE)，1，2-二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺1，2-dimristoylphosphatidylethanolamine l(DMPE)，1，2二庚酰酰基磷脂酰乙醇胺1，2-diheptnoyl phosphatidylethanolamine(DHPE)等。磷脂酰乙醇胺脂质体是由磷脂酰乙醇胺形成的双层膜球状物，表面为氨基，带正电荷。它是一种对人体无害的物质。本专利技术中所用的脂质体可采用以下方法获得将脑磷脂储备液旋转蒸发，并用高纯N2将有机溶剂吹干后，可在旋转蒸发器壁上制得脑磷脂干膜。用二次蒸馏水溶解后，得到多室脂质体。将制得的多室脂质体在80℃水浴中超声1小时，以制备小的单室脂质体。然后再用0.1μm滤膜对其进行匀化处理。所得到的圆形脂质体可用电镜检验(见图4)。研究蛋白质与核酸相互作用的常用方法很多，本研究中使用石英晶体微天平(QCM)。这种方法将测定物固定在QCM的镀金面上，无需标记待测物，而且感量为纳克，灵敏度极高。可原位检测蛋白质HIV tat与TAR RNA的识别过程中微量的质量变化。[林琳，江龙.DNA分子识别及传感技术.化学通报，N0.5，261-267(2001).]本专利技术测定方法是利用生物素(biotin)与亲和素(avidin)结合速度快、结合稳定性高的特点，先用avidin或neutravidin(neutravidin是不含糖苷的亲和素，其活性与母体一致，与生物素的解离常数为KD＝10-15M)将TAR RNA固定到QCM镀金表面，再利用Tat(或脑磷脂脂质体)与TAR RNA的亲和性将Tat(或脑磷脂脂质体)固定到吸附有QCM镀金表面。其过程见图5图5中， 镀金表面， 不含糖苷亲和素，*生物素， TAR RNA， DPPE脂质体， HIVTat计算TAR与Tat或TAR与脑磷脂脂质体相互作用的方法是因为Tat或脑磷脂脂质体与TAR间的作用为特异性作用，所以Tat或脑磷脂脂质体在高浓度时可达到与TAR的最大结合比。因此，Tat-TAR与脑磷脂脂质体-TAR的结合常数可根据类似Langmuir吸附等温线方程算出，即Γ-Γ∞C(KD+C)---(1)]]>Γ是Tat或脑磷脂脂质体与TAR结合的物质的量(mol)，Γ∞是Tat或脑磷脂脂质体与TAR的最大结合量，KD是Tat-TAR或脑磷脂脂质体-TAR的解离常数，C是溶液中Tat或脑磷脂脂质体的浓度。(根据脑磷脂脂质体的平均直径可算出其面积。2倍的脑磷脂脂质体的面积除以单个脑磷脂的面积即为组成双层脑磷脂脂质体所需要的单个脑磷脂的大致数量，从而可近似算出脑磷脂脂质体的分子量)。将1/Γ与1/C作图，则斜率为KD/Γ∞，截矩为1/Γ∞，从而可计算出结合常数。[H.Zhao，J.R.Li，L.Jiang，HIV-1 TAR RNA-Tat peptide complexation using poly(acrylicacid)，BBRC，Vol 320/1 pp95-99(2004)]附图说明图1；HIV-1Tat的初级结构. 图2HIV-1TAR RNA的二级结构. 图3磷脂酰乙醇胺的构造图. 图4DPPE脂质体电镜5分子识别过程示意6QCM镀金表面的质量随分析物加入的改变7ATat与TAR RNA结合时QCM晶体表面物质的质量改变量与其浓度的关系图. 图7BDPPE脂质体与TAR RNA结合时QCM晶体表面物质的质量改变量其浓度的关系图. 具体实施例方式实施例1Tat(Gly本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抑制ＨＩＶ－１反式激活蛋白与反式激活应答序列ＲＮＡ结合用的抑制剂，其特征在于：所述的抑制剂为磷脂酰乙醇胺脂质体。
【技术特征摘要】
CN 2004-8-10 20041007060011.一种抑制HIV-1反式激活蛋白与反式激活应答序列RNA结合用的抑制剂，其特征在于所述的抑制剂为磷脂酰乙醇胺脂质体。2.如权利要求1所述的抑制HIV-1反式激活蛋白与反式激活应答序列RNA结合用的抑制剂，其特征在于所述的抑制剂为磷脂酰乙醇胺与胆固醇的混合物脂质体。3如权利要求1或2所述的抑制HIV-1反式激活蛋白与反式激活应答序列RNA结合用的抑制剂，其特征在于所述的磷脂酰乙醇胺为DSPE或DPPE或DMPE或DHPE或它们的二种或二种以上的混合物，它们分子中烷烃碳原子数为10～18...
【专利技术属性】
技术研发人员：江龙，赵红，李津如，
申请(专利权)人：中国科学院化学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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