本发明专利技术公开了一种葡萄糖淀粉酶及其编码基因。该蛋白，是如下（ａ）或（ｂ）的蛋白质：（ａ）由序列表中序列２所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（ｂ）将序列表中序列２的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和／或缺失和／或添加且具有葡萄糖淀粉酶功能的由（ａ）衍生的蛋白质。本发明专利技术通过基因工程技术，从腾冲嗜热厌氧菌（菌种保藏号ＡＳ １．２４３０Ｔ＝ＪＣＭ １１００７Ｔ）中扩增得到葡萄糖淀粉酶编码基因，并将其转入大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，实验结果表明，本发明专利技术的葡萄糖淀粉酶具有较高的最适反应温度，比黑曲霉来源的葡萄糖淀粉酶的最适反应温度高１０℃，且热稳定性好，具有较好的工业应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种葡萄糖淀粉酶及其编码基因与应用。
技术介绍
葡萄糖淀粉酶(1，4_α-D-glucan glucohydrolases, EC 3. 2. 1. 3)，又称淀粉葡萄 糖苷酶(glucoamylase)或Y -淀粉酶(Y-amylase)，简称糖化酶。葡萄糖淀粉酶可以从寡 糖或多糖碳链的非还原端逐个水解α-1，4_糖苷键，生成β-D-葡萄糖。葡萄糖淀粉酶处 于淀粉降解的最后一步，在食品加工、生物乙醇生产和制酒业中具有重要的应用价值。工业上从淀粉制备葡萄糖分为液化和糖化两个连续的步骤，其中用到两种主要的 酶细菌来源的嗜热α淀粉酶和黑曲霉(Aspergillus niger)来源的葡萄糖淀粉酶(AMG)。 在第一步液化的过程中，淀粉在PH6和100°C左右的条件下被嗜热α淀粉酶液化成麦芽糊 精；随后的糖化步骤中，麦芽糊精被真菌来源的葡萄糖淀粉酶在ΡΗ4. 5和60°C下的条件下 进一步糖化生成葡萄糖。虽然黑曲霉来源的葡萄糖淀粉酶(AMG)的酶活力较高，但是其最 适反应温度远远低于细菌来源的嗜热α淀粉酶，因而导致在实际生产中降温步骤的成本 较高；另外黑曲霉来源的葡萄糖淀粉酶(AMG)的热稳定性不够好，高温下很快失活，使AMG 的催化效率降低，这些都导致了生产成本的增加。因此，迫切需要寻找一种在酸性PH和 80-90°C的高温条件下具有高活力的葡萄糖淀粉酶。近年来，来源于嗜热微生物的酶引起了人们极大的兴趣。这些酶能在高温条件下 发挥最大的活力，比中温酶更能适应工业生产的需要。因此，向嗜热微生物索取耐高温酶资 源，已成为工业生产中解决高温催化的重要手段。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种葡萄糖淀粉酶及其编码基因。本专利技术所提供的葡萄糖淀粉酶，来源于腾冲嗜热厌氧菌(菌种保藏号AS 1. 2430τ =JCM 11007τ)，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列2所示的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/ 或缺失和/或添加且具有葡萄糖淀粉酶功能的由(a)衍生的蛋白质。为了便于葡萄糖淀粉酶的纯化，可在由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的 蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1标签的序列权利要求一种蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有葡萄糖淀粉酶功能的由(a)衍生的蛋白质。2.权利要求1所述蛋白的编码基因。3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述编码基因为如下1)-4)中任一 所述的基因1)其编码序列是序列表中序列1的自5'末端第1-2046位脱氧核糖核苷酸；2)其核苷酸序列是序列表中的序列1；3)在严格条件下可与序列表中序列1限定的DNA序列杂交且编码权利要求1所述蛋白 的DNA分子；4)与1)或2)的基因具有90%以上的同源性且编码权利要求1所述蛋白的DNA分子。4.含有权利要求2或3所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于所述重组载体为在pET载体的多克 隆位点间插入权利要求2或3所述基因得到的重组载体；所述pET载体优选为载体pET42b 或载体pET28a。6.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于所述重组菌是将权利要求5所述 的重组载体导入到大肠杆菌 BL21 (DE3)、BL21-Gold(DE3)、BL21_Gold (DE3) pLysS 或 BL21-CodonPlus (DE3) -RIPL 中得到的重组菌。7.扩增权利要求2或3所述基因的全长或其任一片段的引物对。8.一种制备葡萄糖淀粉酶的方法，是发酵培养权利要求6所述的重组菌，得到葡萄糖 淀粉酶。全文摘要本专利技术公开了一种葡萄糖淀粉酶及其编码基因。该蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有葡萄糖淀粉酶功能的由(a)衍生的蛋白质。本专利技术通过基因工程技术，从腾冲嗜热厌氧菌(菌种保藏号AS 1.2430T＝JCM 11007T)中扩增得到葡萄糖淀粉酶编码基因，并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中，实验结果表明，本专利技术的葡萄糖淀粉酶具有较高的最适反应温度，比黑曲霉来源的葡萄糖淀粉酶的最适反应温度高10℃，且热稳定性好，具有较好的工业应用前景。文档编号C12N9/34GK101993863SQ200910091269公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月14日 优先权日2009年8月14日专利技术者薛燕芬, 郑迎迎, 马延和 申请人:中国科学院微生物研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蛋白，是如下（ａ）或（ｂ）的蛋白质：（ａ）由序列表中序列２所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（ｂ）将序列表中序列２的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和／或缺失和／或添加且具有葡萄糖淀粉酶功能的由（ａ）衍生的蛋白质。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马延和，郑迎迎，薛燕芬，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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