本发明专利技术涉及一种α-淀粉酶及其应用，所述的α-淀粉酶的核苷酸序列为SEQ?ID?NO：2，氨基酸序列为SEQ?ID?NO：1。本发明专利技术筛选出的α-淀粉酶在淀粉水解为麦芽糖和低聚寡糖及少量葡萄糖的过程中发挥了十分重要的作用，可以用来生产高麦芽糖浆、作为添加剂用于焙烤制品如面包的生产，以及在啤酒、黄酒和生料酒精行业等行业均有不同程度的应用，具有工业生产应用价值。而且筛选出的α-淀粉酶可以用来转化工程菌，从而获得具有表达α-淀粉酶的重组菌。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶基因工程
，具体涉及ー种α-淀粉酶及其应用。
技术介绍
真菌来源的α -淀粉酶可以粗略的按酶学性质或作用条件分为3种类型中性真菌α -淀粉酶、耐酸或耐热性真菌α -淀粉酶、具有生淀粉酶活力的真菌α-淀粉酶。α-淀粉酶是重要的エ业用酶，其被用于生产产品诸如高麦芽糖浆、焙烤制品。在啤酒酿制行业(提高麦芽汁的可发酵性)、黄酒酿制行业(改善酒质，提高出酒率)以及低聚异麦芽糖生产等行业均有不同程度的应用。已报道有多种真菌α -淀粉酶基因在不同宿主中得到表达，其中真菌α -淀粉酶 基因的异源表达主要集中在真核表达系统，尽管绝大多数报道中异源表达真菌α-淀粉酶的表达水平不高，但异源表达是实现真菌α-淀粉酶单ー酶活的最好途径。我国在真菌α -淀粉酶的研究方面虽然开展较晚，但研究成果对提升我国酶制剂エ业有积极意义。与其它淀粉水解酶系的研究水平相比，我国真菌α-淀粉酶的研究水平不高，所有研究几乎没有涉及基因的克隆与表达，发酵生产方式也未从固态发酵向液体发酵转变，发酵生产水平与国际先进水平也存在较大差距。酶制剂产品为多种α-淀粉酶、糖化酶和葡萄糖苷酶的混合产品，往往无法有效的进行目的产物的生成。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供ー种α -淀粉酶及其应用，即ー种具有エ业应用价值的新型α -淀粉酶，以弥补现有技术的不足。本专利技术ー个方面涉及ー种α-淀粉酶，包括有a)序列为 SEQ ID NO 1 的酶；b)在a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加ー个或几个氨基酸且具有a中所述酶的活性的，由a衍生的酶。编码上述α -淀粉酶的核苷酸，其ー种序列为SEQ ID NO :2。本专利技术还提供用于表达上述α -淀粉酶的重组表达质粒，是将序列为SEQ ID NO 2的核苷酸片段插入到原核表达载体中构建的。本专利技术还涉及携帯有表达上述α -淀粉酶的重组表达质粒的重组菌。本专利技术筛选出的α-淀粉酶在淀粉水解为麦芽糖和低聚寡糖及少量葡萄糖的过程中发挥了十分重要的作用，可以用来生产高麦芽糖浆、作为添加剂用于焙烤制品如面包的生产，以及在啤酒、黄酒和生料酒精行业等行业均有不同程度的应用，具有エ业生产应用价值。而且筛选出的α-淀粉酶可以用来转化工程菌，从而获得具有表达α-淀粉酶的重组菌。附图说明图I :用于表达本专利技术的α -淀粉酶的pGm-Pamy质粒图谱，图2 :本专利技术的α -淀粉酶的SDS-PAGE凝胶图；图3 :本专利技术的α -淀粉酶在黑曲霉宿主中的pH稳定性；图4 :本专利技术的α -淀粉酶在在黑曲霉宿主中的温度稳定性。具体实施例方式下面结合实例对本专利技术的方法做进一步说明。但实例仅限于说明，并不限于此。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按常规条件，如J.萨姆布鲁克(Sambrook)等编写的《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件运行。I、α -淀粉酶Pamy的合成 从绳状青霉(Penicillium Funiculosum)全基因组测序得到的蛋白序列中找到绳状青霉淀粉酶(Penicillium Funiculosum amylase)序列。将该序列在NCBI中blast,与已知序列 alpha-amylase, putative 的最高相似度为86%,将绳状青霉淀粉酶(Penicillium Funiculosum amylase)的蛋白序列进行密码子优化并翻译成相应的核酸序列Pamy,使Pamy不被Xho I和Xba I两个酶切位点切断,在Pamy核酸序列两端加Xho I和Xba I酶切位点，将文本序列送至生物公司(上海生工)合成，合成的Pamy被连接在载体PSG-TS上，插入位点为t_a克隆，受体菌为大肠杆菌DH5 α菌株。其中本专利技术的α -淀粉酶的核苷酸序列为SEQ ID NO :2，氨基酸序列为SEQ ID NO :1。2、α -淀粉酶Pamy基因重组载体的构建将连在PSG-TS载体上的Pamy基因用Xho I和Xba I双酶切，经琼脂糖凝胶电泳，切胶回收酶切产物片段。与同样用Xho I和Xba I双酶切并切胶回收的质粒pGm连接，转化感受态大肠杆菌(E. coli)DH5a后，涂于含有Amp的LB固体培养基上。37°C培养14-16小时，进行菌落PCR验证，有正确条带的，挑取单克隆转接到4ml LB液体培养基中进行培养(含Amp)，培养14-6小时后，提取质粒，将重组质粒pGm-Pamy转入表达宿主黑曲霉G1，含有该重组质粒的重组菌株命名为Gl-pGm-Pamy。其中的酶切及连接反应均参照表I。表I酶切体系及连接体系权利要求1.ー种α-淀粉酶，其特征在于，所述的α-淀粉酶包括有a)序列为SEQID NO 1的酶；b)在a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加ー个或几个氨基酸且具有a中所述酶的活性的，由a衍生的酶。2.一种核苷酸，其特征在于，所述的核苷酸用于编码权利要求I所述的α-淀粉酶。3.如权利要求2所述的核苷酸，其特征在于所述的核苷酸的序列为SEQID Ν0:2。4.一种用于表达权利要求I所述的α-淀粉酶的重组表达质粒，其特征在于，所述的重组表达质粒是将序列为SEQ ID NO :2的核苷酸片段插入到原核表达载体中构建的。5.ー种重组菌，其特征在于，所述的重组菌携带有权利要求4所述的重组表达质粒。6.权利要求I所述的α-淀粉酶作为面包添加剂的应用。全文摘要本专利技术涉及一种α-淀粉酶及其应用，所述的α-淀粉酶的核苷酸序列为SEQ ID NO2，氨基酸序列为SEQ ID NO1。本专利技术筛选出的α-淀粉酶在淀粉水解为麦芽糖和低聚寡糖及少量葡萄糖的过程中发挥了十分重要的作用，可以用来生产高麦芽糖浆、作为添加剂用于焙烤制品如面包的生产，以及在啤酒、黄酒和生料酒精行业等行业均有不同程度的应用，具有工业生产应用价值。而且筛选出的α-淀粉酶可以用来转化工程菌，从而获得具有表达α-淀粉酶的重组菌。文档编号C12N15/80GK102827816SQ20121028153公开日2012年12月19日 申请日期2012年8月8日 优先权日2012年8月8日专利技术者王华明, 林艳梅 申请人:天津工业生物技术研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种α？淀粉酶，其特征在于，所述的α？淀粉酶包括有：a）序列为SEQ？ID？NO：1的酶；b）在a）中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有a中所述酶的活性的，由a衍生的酶。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王华明，林艳梅，
申请(专利权)人：天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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