牛疱疹病毒1型亚单位疫苗的基于含水溶剂的胶囊化制造技术

本文公开了得自牛疱疹病毒－１（ＢＨＶ－１）的微胶囊化的亚单位组分。本文也公开了利用该组分接种牛物种成员的疫苗、试剂盒和方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微胶囊化的疫苗。更具体地说，本专利技术涉及新的微胶囊，其具有胶囊化含水的或实质上含水的核的各向异性路易斯盐膜以及被该盐膜包裹的免疫原性组合物。所说的微胶囊通过含水介质中路易斯酸和碱壁-形成反应物的界面反应制备。更具体地说，本专利技术涉及如此胶囊化的牛疱疹病毒-1(BHV-1)的亚单位组分。微胶囊化是一种可以将比较薄的包衣运用于固体小微粒悬液或液体小滴的方法，其提供将液体转化成固体，改变胶体和表面性质，提供环境保护，并且控制所包覆的材料的释放特征或可利用度的一种手段。一些这样的性质可以用微包装技术达到；然而，微胶囊化作用的独特性在于所包覆微粒最小性和它们尔后的用途以及地各种剂量形式与产物应用的适应性。因此，在工业规模上用于产生微胶囊的已知的可行的方法经常包括利用有机溶剂。然而，对有机溶剂的利用可能存在环境和安全问题。此外，经常困难的是从微胶囊除去所有有机溶剂以去掉有机污染物。已经提出了利用微胶囊作为传送疫苗的一种手段。已研究了两种广泛类型的抗原送递系统提高免疫性的能力固体(或)多孔微胶囊和具有由物理上明显的壁包裹的核心区的微胶囊。固体微胶囊可以由各种方法制备，包括胶体凝聚(Kwok，K.K.等，1991，药物研究.8341-344)，物理方法(例如，物理分离)(Santiago，N.等，1993，药学研究.101243-1247)，或化学试剂(例如，酸氯化物)(Levy，M.C.等，1991，药学会杂志80578-585.)，或用聚酯薄膜包裹含水分散体的溶剂蒸发技术(Singh，M.等，1991，药学研究。8958-961)沉淀蛋白质。表现出对抗原送递有用的壁/核系统包括脂质体(Gerlier，D.等，1983，免疫学杂志.131490)，ISCOMS(Claassen，I.，和Osterhaus，A.，1992，免疫学研究.143531-541)和蛋白体(Gould-Fogerite，S.，和Mannino，R.，1992，脂质体技术，Vol.III，Gregoriadis，G.(编者)，CRC出版社，Boca Raton，FL.；Miller，M.D.等，1992，J..Exp.Med.1761739-1744)。或许充分研究的抗原送递系统是来源于乳酸和乙醇酸的线型聚合酯(即聚(DL-环二酯-共-glycol ide))(PLCG)的哪些(Edelman，R.等，1993，疫苗11-155-158；Eldridge，J.H.等，1989，Curr.Top.微生物学免疫学.14659-66；Eldridge，J.H.等，1990，控制释放杂志11205-214；Eldridge，J.H.等，1989，Adv.Exp.Med.Biol.251191-202；Eldridge，J.H.等，1991，分子免疫学28287-294；Eldridge，J.H.等，1991，感染免疫学.592978-2986；Marx，P.A.等，1993，科学2601323-1327；Moldoveanu，Z.等，1993，传染病学杂志.16784-90；O′Hagan，D.T.等，1993，疫苗11149-154；O′Hagan，D.T.等，1991，免疫学73239-242；Ray，R.等，1993，传染病学杂志.167752-755；Reid，R.等，1993，免疫学杂志.150323A；Reid，R.H.等，1993，疫苗，11159-167)。推定的抗原胶囊化进PLCG微胶囊提供一些益处。首先，微胶囊容易由水解降解形成乳酸和乙醇酸。第二，大小不到51μm的PLCG微胶囊在小鼠口头接种之后容易穿透Peyer′s片，肠系膜淋巴结以及脾。第三，用PLCG微胶囊化的抗原(包括流感病毒，副流感病毒，猿免疫缺损病毒，金黄色葡萄球菌肠毒素B类毒素以及卵白蛋白)口头，腹膜内，鼻内或皮下接种小鼠诱导出较在用相同剂量的病毒或蛋白质接种的动物中所诱导的免疫反应更强的免疫反应。此外，用灭活的病毒口头接种小鼠在粘膜表面诱导增强的抗原-特异性IgA反应。最后，PLCG微胶囊已口头施用于成年志愿者，没有副作用。PLCG微胶囊的主要缺点是需要使用有机溶剂。与有机溶剂的接触将灭活病毒和细菌病原体的感染性，此外，其可以改变对诱导体液或细胞免疫反应关键的表面蛋白质的免疫原性。事实上，大量的病毒蛋白质对用PLCG微胶囊诱导抗原-特异性免疫反应是需要的。在美国专利3,137,631；美国专利4,205,060；美国专利4,606,940；美国专利3,959,457和美国专利5,132,117中一般性地公开了微胶囊化技术。此外，在Lim的比利时专利882,476(1980)；美国专利4,744,933；和Dautzenberg等的英国专利申请2135954(1984)中也教导了微胶囊化技术。然而，这些技术存在弊端，包括使用有机溶剂或热，这些可能导致抗原的灭活或变性。更具体地说，用于以胶囊化的形式(例如，PtGA′s蜗形物，脂质体)制备免疫原(如疫苗)的大多数方法需要多个常常苛刻的加工步骤，例如，引入表面活性剂，由不同的表面能产生液/液界面，分散在反应性有机液态相中，在乳化和/或涡旋期间的机械剪切，为了除去一种或多种易挥发组分的加热。几个加工步骤的各个可以对用于胶囊化的免疫原起始量的部分或全部的功能完整性有不利的影响。在起始荷载的免疫原的某些组分的功能完整性上的这一降低由所形成的配方的降低的稳定性和免疫原性(与胶囊化所追求的所需的免疫反应增强相反)所证明。对低免疫原性的病原体而言，采用多个苛刻的加工步骤所付出的代价可以抵销由采用本领域已知的技术胶囊化所产生的任何益处。相反，国际出版物WO95/28227描述了利用所有含水系统的微胶囊化技术。这一技术基于形成可溶性差的聚阴离子微胶囊(胺)盐。利用这一技术，免疫原性组合物利用试剂的完全的含水系统在室温下胶囊化，而不需要高压。这一方法能够在十分温和的条件下产生均一大小的微粒，可以用于从用于疫苗的传染性病原体微胶囊化免疫原性组合物。利用以上描述的全含水系统胶囊化的特定兴趣传染性病原体是牛疱疹病毒-1(BHV-1)，也被称为传染性牛rhinotracheitis病毒。BHV-1是α疱疹病毒亚科亚族的成员，其在牛中引起各种临床形式的疾病，包括呼吸和生殖感染，结膜炎，脑炎以及流产。在控制BHV-1感染上，以前的尝试已利用疫苗，包括活的减毒的病毒(Gerber，J.D.等，1978，Am.J.Vet.Res.39753-760；MitcheIt，D.，1974，Can.Vet.Jour.15148-151)，灭活的病毒(Frerichs，G.N.等，1982，Vet.Rec.111116-122)和病毒亚单位，如三种主要BHV-1糖蛋白之一，本领域已将这些糖蛋白命名为gI，gIII和gIV(Babiuk，L.A.等，1987，病毒学15957-66；van Drunen，S.，ef al.，1993，疫苗1125-35)。此外，BEV-1重组的截短的形式(本领域命名为BHV-1 tgIV)诱导针对BHV-1的粘膜免疫性的能力已有阐述(van Drunen，S.等，1994，疫苗，121295-1302)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微胶囊，其含有胶囊化含水的或实质上含水的核的各向异性路易斯盐膜和被该盐膜包裹的免疫原性组合物，所说的微胶囊实质上是无非水污染物的，所说的盐膜包含从精胺和藻酸的界面反应或者从水溶性精胺中性盐和水溶性藻酸中性盐的界面反应所形成的沉淀，所说的免疫原性组合物包含在以微胶囊化的形式施用到牛物种成员上时能够诱导抗牛疱疹病毒－１（ＢＨＶ－１）的保护性反应的ＢＨＶ－１的亚单位组分。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M堪泊斯，P福兰奇克，F克拉克，P奥菲特，C莫瑟，T斯毕克，
申请(专利权)人：辉瑞大药厂，坦普尔大学，费城儿童医院，
类型：发明
国别省市：US[美国]