【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】测量组织样品中的肌营养不良蛋白的方法
[0001]本专利技术一般涉及细胞生物学、分子生物学和基因疗法。在特定方面，本专利技术涉及评估表达蛋白水平的方法，以及相关的组合物、方法和用途。
技术介绍
[0002]杜氏肌营养不良症(Duchenne Muscular Dystrophy，DMD)是一种致命的肌肉萎缩症，由DMD基因突变引起，导致肌营养不良蛋白的缺失或减少(Hoffman EP等人(1987)，Cell 51(6)：919
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928)。肌营养不良蛋白是一种大的427kDa蛋白，mRNA为14kb，由79个外显子组成(Koenig M等人(1987)Cell 50(3)：509
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517)。组织特异性启动子和聚
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A添加位点产生许多肌营养不良蛋白同种型。Dp427m是骨骼肌和心肌中表达的优势同种型，对于肌纤维的结构稳定性至关重要(Doorenweerd N等人(2017)，Sci Rep 7(1)：12575)。超过60％的已记载的DMD突变是一个或多个外显子的缺失(...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种测量从生物样品中分离的蛋白质样品中的肌营养不良蛋白量的方法，包括：(i)将所述蛋白质样品与第一蛋白酶接触，形成包含肌营养不良蛋白肽的蛋白质消化物；(ii)将所述蛋白质消化物应用于肌营养不良蛋白肽亲和试剂，其中所述蛋白质消化物中的所述肌营养不良蛋白肽与所述肌营养不良蛋白肽亲和试剂结合，并洗脱结合的肌营养不良蛋白肽，形成富含肌营养不良蛋白肽的样品，所述富含肌营养不良蛋白肽的样品包含内源性肌营养不良蛋白肽、工程化肌营养不良蛋白肽，或内源性肌营养不良蛋白肽和工程化肌营养不良蛋白肽；以及(iii)对所述富含肌营养不良蛋白肽的样品进行液相色谱
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质谱法(LC/MS)。2.如权利要求1所述的方法，其中所述生物样品来自患有杜氏肌营养不良症(DMD)的人类患者，且所述患有DMD的人类患者已经用编码工程化肌营养不良蛋白的基因疗法治疗。3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述内源性肌营养不良蛋白具有与SEQ ID NO：242的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。4.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中被测量的所述肌营养不良蛋白是工程化肌营养不良蛋白。5.如权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中所述工程化肌营养不良蛋白具有与选自由SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244或SEQ ID NO：245组成的组的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。6.如权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中所述工程化肌营养不良蛋白具有与SEQ ID NO：243的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。7.如权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中所述工程化肌营养不良蛋白具有与SEQ ID NO：243的氨基酸序列相同的氨基酸序列。8.如权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述蛋白质样品还包括加入到所述蛋白质样品中的代谢标记的外源性肌营养不良蛋白参比蛋白。9.如权利要求8所述的方法，其中所述外源性肌营养不良蛋白参比蛋白具有与所述工程化肌营养不良蛋白共享至少95％同一性的氨基酸序列。10.如权利要求1
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9中任一项所述的方法，其中通过所述第一蛋白酶消化所述内源性肌营养不良蛋白和所述工程化肌营养不良蛋白两者产生共用的肌营养不良蛋白肽，所述肌营养不良蛋白肽存在于内源性肌营养不良蛋白和工程化肌营养不良蛋白两者中。11.如权利要求10所述的方法，其中所述共用的肌营养不良蛋白肽具有SLEGSDDAVLLQR(SEQ ID NO：179)或LLQVAVEDR(SEQ ID NO：200)的氨基酸序列。12.如权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中所述工程化肌营养不良蛋白肽包含连续的氨基酸序列，所述连续的氨基酸序列存在于所述工程化肌营养不良蛋白中并且不存在于所述内源性肌营养不良蛋白中。13.如权利要求1
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12中任一项所述的方法，其中工程化肌营养不良蛋白特异性肽具有SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：238、SEQ ID NO：239、SEQ ID NO：240或SEQ ID NO：241的氨基酸序列。14.如权利要求1
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13中任一项所述的方法，其中工程化肌营养不良蛋白特异性肽具有LEMPSSLMLEVPTHR(SEQ ID NO：236)的氨基酸序列。
15.如权利要求1
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14中任一项所述的方法，其中所述生物样品在裂解缓冲液中匀浆化。16.如权利...
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