一种半乳糖凝集素-3化学发光检测试剂盒及其制备和使用方法技术

本发明专利技术属于试剂盒技术领域，尤其涉及一种半乳糖凝集素

【技术实现步骤摘要】
一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒及其制备和使用方法


[0001]本专利技术属于试剂盒
，尤其涉及一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒及其制备和使用方法。

技术介绍

[0002]心力衰竭是一种复杂的临床症候群，为各种心脏疾病的严重阶段，是21世纪最严重的心血管疾病，目前正成为亟待解决的公共卫生问题。心室重构是心力衰竭发展的基础，与心力衰竭的进展和不良预后相关，是心力衰竭临床结局的重要决定因素。近年来，延缓或减慢心室重构成为心力衰竭治疗的主要方向。心脏结构和功能的变化往往早于患者出现相应的临床症状。通过血清学标记物早期识别和诊断心力衰竭，对于心力衰竭患者的近远期预后具有重要的临床价值。人们迫切需要寻找心力衰竭早期诊断的新生物标记物和治疗靶点，从而及时识别心力衰竭高危患者，积极给予心力衰竭患者监测及治疗，改善预后，减少病死率，最大限度降低心力衰竭患者对有限医疗资源的消耗。半乳糖凝集素
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3是近些年新发现的心力衰竭的标志物。联合检测NT
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proBNP与Galectin
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3对心力衰竭患者病死率和再住院率的预测价值高于各自单独预测的价值，是心力衰竭患者危险分层的最重要预测指标。
[0003]半乳糖凝集素
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3(Galectin
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3)：半乳糖苷结合蛋白的31kDa成员，是与细胞内糖蛋白、细胞表面分子和细胞外基质蛋白相互作用的凝集素。Galectin
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3在细胞内外均有表达。Galectin
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3由单个基因编码，位于染色体14q21
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22。它包括三个独特的结构区1、12个氨基酸组成的短NH2末端，控制定位，参与细胞内调节；2、一个含有多个氨基酸的胶原样物质，是基质金属蛋白酶的底物，与富含糖的细胞表面结合能发挥重要作用；3、COOH末端区是一个环绕着碳水化合物结合位点的球形结构，可与细胞外基质及糖蛋白相互作用。Galectin
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3广泛分布于肿瘤细胞、上皮细胞、成纤维细胞和巨噬细胞及其他炎性细胞，在心脏、肾脏、肝脏、大脑、胰腺中也均有少量表达，Galectin
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3在细胞质、细胞核和细胞表面均有表达，以细胞质为主。其生物学功能与细胞内定位有关。当细胞处于静息状态时它主要位于细胞浆，处于增殖状态时则主要分布于细胞核内。Galectin
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3的分泌不依赖内质网和高尔基器，通过一种类似细胞胞吐的非经典机制转移至细胞外，可溶性的Galectin
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3可进入全身循环。
[0004]近年来有关Galectin
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3与心力衰竭的大量临床研究同样发现，Galectin
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3在心室重构和心力衰竭的病理发展过程中具有重要作用，而且可作为一个潜在的心衰竭预后的生物标记物。多项研究显示，随着心力衰竭程度的加重，血浆Galectin
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3的表达水平呈逐步升高趋势，与健康对照组比较，差异具有统计学意义。心力衰竭组心功能Ⅲ级、Ⅳ级患者血浆Galectin
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3水平较健康对照组升高，提示Galectin
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3水平的升高可能提示心力衰竭失代偿，可能成为评价心功能分级的新的生物学标志物和治疗新靶点。
[0005]目前，检测半乳糖凝集素
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3(Gal
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3)的方法目前主要是酶联免疫技术(ELISA)，该方法是继放射免疫分析技术(RIA)之后出现的分析方法，因操作简单，无放射性污染，价格
较低，现在有一定的市场占有率，但灵敏度较低，重复性较差性能指标无法满足临床要求。胶体金免疫层析技术,该技术成本低廉，但干扰因素较多，操作复杂无法满足大量样本测试。
[0006]而且类风湿因子(rheumatoid，factor，RF)是干扰免疫检测结果的重要因素，他能和多种动物IgG的Fc片段结合。RF可在许多非类风湿关节炎病人中检出，如结核、麻风、肝炎等。在正常人群中的检出率也高达1％
‑
5％。如果血清样本中含有RF，它可充当成抗原成分，同时与包被抗体和酶标抗体结合，形成非特异性反应，表现出假阳性的反应，影响临床的结果判断。所以试剂盒对RF的抗干扰能力已被列为试剂重要的考核指标，并写入说明书中告知客户。通常试剂盒消除类风湿因子干扰的方法是加入阻断剂(HBR)，而市场上常用的阻断剂例如罗氏的MAB33系列、南京京达生物的HBR系列和菲鹏生物的HBR系列价格昂贵，且为了消除高浓度RF的影响通常试剂会加入高浓度的阻断剂，这样大大增加了试剂盒的成本。
[0007]中国专利申请文件(公开号：CN102942624A)公开了一种半乳糖凝集素3检测试剂盒及制备方法，试剂盒包括试剂I(生物缓冲液)、试剂II(包被半乳糖凝集素3抗体的胶乳颗粒)，该试剂盒采用了胶乳增强透射免疫比浊检测(PETIA)，导致该方法试剂盒灵敏度低，操作复杂。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提供一种线性范围宽、稳定性好、重复性好且成本较低的半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒。
[0009]本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒，试剂盒包括R1试剂、R2试剂；
[0010]所述R1试剂包括磁性颗粒包被的Galectin
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3抗体Fab片段；
[0011]所述R2试剂包括碱性磷酸酶标记的Galectin
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3抗体Fab片段。
[0012]在上述的一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒中，Galectin
‑
3抗体Fab片段通过质量比1：(15
‑
25)的木瓜蛋白酶与Galectin
‑
3抗体制备得到。
[0013]IgG分子的基本结构是由四肽链组成的，即由两条相同分子量较小的肽链称为轻链(分子量约为24KD)和两条相同的分子量较大的肽链称为重链(分子链约为55或75KD)组成的。轻链与重链是由二硫键连接形成一个四肽链分子称IgG分子单位。应用木瓜蛋白酶可将IgG重链间接近N段的二硫切断，获得两个相同的抗原结合片段(Fab)和1个可结晶片段(Fc)。每一Fab片段含有一条完整的轻链和部分重链。本专利技术Fab片段同时具备了抗原结合区和部分恒定区，不仅具备了单链抗体(scFv)一样的抗体
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抗原亲和力、且由于其没有Fc片段，不和类风湿因子反应，使得不用添加阻断剂也可消除RF的干扰，降低了试剂盒的成本，而且Fab片段分子量小，在偶联进行共价结合时，空间位阻更小，抗原结合位点也不容易被遮蔽，偶联的效率会大幅度提高，与完整的IgG相比，Fab片段偶联物，使用效价更高。
[0014]作为优选，Galectin
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒，其特征在于，试剂盒包括R1试剂、R2试剂；所述R1试剂包括磁性颗粒包被的Galectin
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3抗体Fab片段；所述R2试剂包括碱性磷酸酶标记的Galectin
‑
3抗体Fab片段。2.根据权利要求1所述的一种半乳糖凝集素
‑
3化学发光检测试剂盒，其特征在于，Galectin
‑
3抗体Fab片段通过质量比1：(15
‑
25)的木瓜蛋白酶与Galectin
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3抗体制备得到。3.根据权利要求1所述的一种半乳糖凝集素
‑
3化学发光检测试剂盒，其特征在于，R1试剂中磁性颗粒包被的Galectin
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3抗体Fab片段浓度为0.1
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0.5mg/ml。4.根据权利要求1所述的一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒，其特征在于，R2试剂中碱性磷酸酶标记的Galectin
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3抗体Fab片段浓度为0.1
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1.0ug/mL。5.根据权利要求1所述的一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒，其特征在于，磁性颗粒包被的Galectin
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3抗体Fab片段的制备方法包括如下步骤：S1、取磁珠颗粒经PBS缓冲液清洗，加入Galectin
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3抗体Fab片段均匀混合；S2、加入EDC溶液均匀混合，然后进行混悬反应；S3、加入封闭剂继续混悬反应，用PBS缓冲液稀释，最后用保存缓冲液稀释备用。6.根据权利要求5所述的一种半乳糖凝集素
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3化学发光检测试剂盒，其特征在于，磁性颗粒与Galectin
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3抗体Fab片段质量比为10：(0...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪云峰，郭俊美，周国超，柳建敏，
申请(专利权)人：宁波海尔施智造有限公司，
类型：发明
国别省市：