一种抗体-BSA复合物及其制备方法及其包被的磁性微粒技术

本发明专利技术属于体外诊断技术领域，涉及一种抗体

【技术实现步骤摘要】
一种抗体
‑
BSA复合物及其制备方法及其包被的磁性微粒


[0001]本专利技术属于体外诊断
，涉及一种抗体
‑
BSA复合物及其制备方法及其包被的磁性微粒。

技术介绍

[0002]体外诊断目前采用的方法主要有：酶联免疫法、胶乳比浊法、化学发光法及分子诊断等方法。胶乳比浊法和化学发光法中涉及用到微球标记蛋白。微球标记蛋白(抗原、抗体或亲和素)的方法主要是吸附法和共价偶联法，目的是将待测物质相对应的抗体或抗原包被在微球上，通过待测物质与包被了相应抗原或抗体的微球反应后的特性进行检测，提高试验的敏感性。常用的微球表面偶联有功能基团—羧基、氨基、甲苯磺酰基等。
[0003]目前为止，用于将蛋白质以及其它含氨基的分子偶联到羧基微球表面上最常见的反应策略是水溶性碳二亚胺(EDC，1
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乙基
‑
(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺)介导的方法。该方法可以通过两种模式来进行：一步法或者两步法。在一步法中，EDC直接加到蛋白质与微球混合液中，羧基微球颗粒被水溶性EDC激活而产生中间体酯，中间体酯可以直接与蛋白上的氨基发生反应。在两步法中，先用EDC激活羧基微球颗粒，再进一步加入N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)或N
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羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo
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NHS)来生成另一个二级中间体酯(NHS
‑
酯或Sulfo
‑
NHS酯)。和一步法的中间体酯相比，NHS
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酯或Sulfo
‑
NHS酯在结构上更加稳定，因此，两步法的产量通常更高。偶联过程中，由于大多数蛋白质上同时存在有很多氨基(如赖氨酸、精氨酸残基)和羧基(如丝氨酸、苏氨酸残基)，过量的EDC容易介导蛋白质之间发生自我聚合，两步法能够克服这种缺陷，但是由于步骤繁多，不仅增加了时间成本，企业还不得不编写更多的SOP文件(操作规程文件)、不得不引入更多的质量控制环节。显然，从现代化的大规模生产的角度而言，两步法不是一种经济有效的方式。
[0004]对氨基微球进行偶联的方法多采用同双官能团交联剂，如戊二醛法，由于同双官能团交联剂可以与两个相同基团偶联，所以偶联过程中需要过量的交联剂，且无法避免微球或蛋白各自之间的结合，从而导致聚集或偶联效率低等问题。
[0005]近些年被用于体外诊断的甲苯磺酰基磁珠，其表面覆有亲水聚合涂层，因在涂层中导入了甲苯磺酰基所以不需要羧和剂，仅通过简单的操作即可将含有氨基的抗体等分子以化学结合的方式固定在磁珠表面。随着化学结合的进行，甲苯磺酰基会逐渐脱离，粒子表面的亲水性会增强，从而能够维持磁珠表面偶联物的生物活性，并且可以有效抑制非特异反应，但由于蛋白质与微球之间相互作用非常复杂性，离子键和疏水作用力都会发挥作用。但个别蛋白质存在其本身的特征，有时候很难预测出相应的结果。由于不同项目抗体的效价、等电点均有不同，仅用通用流程无法满足所有项目偶联达到最优的效果。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对现有技术中的不足，提供一种抗体
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BSA复合物及其制备方法及其包被的磁性微粒。
[0007]本专利技术的一个目的通过以下技术方案来实现：
[0008]一种抗体
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BSA复合物，所述抗体
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BSA复合物为抗体与BSA通过抗体引入的巯基和BSA上引入的马来酰亚胺基团偶联形成。
[0009]本专利技术的另一个目的通过以下技术方案来实现：
[0010]一种抗体
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BAS复合物的制备方法，包括以下步骤：在抗体上引入巯基，用包含有马来酰亚胺基团的物质活化BSA，然后引入巯基的抗体和活化的BSA混合反应。
[0011]抗体上引入巯基，BSA上引入马来酰亚胺基团，巯基可与马来酰亚胺基团偶联结合，抗体和BSA通过巯基和马来酰亚胺基团偶联在一起，从而形成抗体
‑
BSA复合物。
[0012]作为优选，采用2
‑
亚氨基硫烷盐酸盐(2IT)与抗体反应，从而在抗体上引入巯基。2IT可以与带有氨基的物质(抗体)通过开环反应在抗体引入末端巯基，相对于二硫键还原法，这种引入巯基的方法可以较好地保持了抗体的二价结构。
[0013]作为优选，2
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亚氨基硫烷盐酸盐和抗体的质量比为1：10～1：100。
[0014]作为优选，2
‑
亚氨基硫烷盐酸盐和抗体在室温下反应10～50min。
[0015]作为优选，2
‑
亚氨基硫烷盐酸盐和抗体在室温下反应10～50min后，加入pH为7.0～7.5的甘氨酸溶液，室温下继续反应5～20min。
[0016]作为优选，包含有马来酰亚胺基团的物质为4
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(N
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马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)和/或其衍生物，如磺化后的衍生物sulfo
‑
SMCC。SMCC和/或其衍生物可以活化BSA，通过SMCC和/或其衍生物活化，BSA可以与带有巯基的抗体结合。
[0017]作为优选，包含有马来酰亚胺基团的物质与BSA的活化反应的质量比为1：10～1：100。
[0018]作为优选，包含有马来酰亚胺基团的物质和BSA在室温下活化反应10～50min。
[0019]作为优选，包含有马来酰亚胺基团的物质和BSA在室温下活化反应10～50min后，加入pH为7.0～7.5的甘氨酸溶液，室温下继续反应10～20min。
[0020]作为优选，引入巯基的抗体和活化的BSA在2～8℃反应8～20小时。
[0021]作为优选，引入巯基的抗体和活化的BSA的摩尔比为0.5：1～3：1。
[0022]本专利技术的另一个目的通过以下技术方案来实现：
[0023]一种抗体
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BSA复合物包被的磁性微粒，由上述抗体
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BSA复合物偶联磁性微粒形成。
[0024]上述抗体
‑
BSA复合物偶联到磁性微粒上，由于BSA的疏水性比抗体更强，所以BSA比抗体更易与磁性微粒结合，从而提高磁性微粒与抗体的偶联率，即相同抗体可以偶联更多的磁性微粒。此外，抗体
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BSA复合物与磁性微粒的偶联，使得抗体端暴露在外，降低了抗体和微球之间的空间位阻，更有利于抗体和抗原的特异性结合。
[0025]本专利技术的另一个目的通过以下技术方案来实现：
[0026]一种抗体
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BSA复合物包被的磁性微粒制备方法，包括以下步骤：将抗体
‑
BSA复合物和磁性微粒混合，然后加入反应促进剂反应，清洗、封闭后得到抗体
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BSA复合物包被的磁性微粒。
[0027]作为优选，所述反应促进剂包括但不限于硫酸铵溶液、硫酸钾溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体
‑
BSA复合物，其特征在于，所述抗体
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BSA复合物为抗体与BSA通过抗体引入的巯基和BSA上引入的马来酰亚胺基团偶联形成。2.一种如权利要求1所述的抗体
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BSA复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在抗体上引入巯基，用包含有马来酰亚胺基团的物质活化BSA，然后引入巯基的抗体和活化的BSA混合反应。3.根据权利要求2所述的抗体
‑
BSA复合物的制备方法，其特征在于，采用2
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亚氨基硫烷盐酸盐与抗体反应，从而在抗体上引入巯基。4.根据权利要求3所述的抗体
‑
BSA复合物的制备方法，其特征在于，2
‑
亚氨基硫烷盐酸盐和抗体的质量比为1：10～1：100；和/或，2
‑
亚氨基硫烷盐酸盐和抗体在室温下反应10～50min。5.根据权利要求2所述的抗体
‑
BSA复合物的制备方法，其特征在于，包含有马来酰亚胺基团的物质为4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯和/或其衍生物；和/或，包含有马来酰亚胺基团的物质与BSA的活化反应的质量比为1：10～1：100；和/或，包含有马来酰亚胺基团的物质和BSA在室温下活化反应10～50min。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宾，郭俊美，汪云峰，贺率，柳建敏，
申请(专利权)人：宁波海尔施智造有限公司，
类型：发明
国别省市：