一种捕获法检测抗体的方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种捕获法检测抗体的方法和应用，所述方法以形成抗Ig抗体

【技术实现步骤摘要】
一种捕获法检测抗体的方法和应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，特别是涉及一种捕获法检测抗体的方法和应用。

技术介绍

[0002]免疫检测是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测，利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行显示，常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位。其中，捕获法是检测抗体的常用方法，该方法将抗Ig抗体连接在固相载体上，形成固相抗Ig抗体，然后加入样本和特异性抗原
‑
标记物，最终形成“抗Ig抗体
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待测Ig抗体
‑
特异性抗原
‑
标记物”的复合物，然后借助一定的手段检测标记信号，从而得出最终的判定结果。捕获法是很多免疫检测抗体的首选方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术基于捕获法，提供一种降低检测本底、提高检测灵敏度的检测方法。
[0004]一种捕获法检测抗体的方法，所述方法以形成抗Ig抗体
‑
待测抗体
‑
修饰抗原的形式完成检测，所述修饰抗原包括抗原及与所述抗原连接的修饰剂，所述修饰剂为甜菜碱类、氧化叔胺类或聚乙二醇类；
[0005]所述方法包括：
[0006]通过连接于固相载体的抗Ig抗体捕获样本中的待测抗体；
[0007]使待测抗体与所述修饰抗原结合；
[0008]所述修饰抗原与检测标记物直接和/或间接结合；
[0009]检测所述检测标记物。
[0010]本专利技术还提供了一种修饰抗原，包括抗原及与所述抗原连接的修饰剂，所述修饰剂为甜菜碱类、氧化叔胺类或聚乙二醇类。
[0011]本专利技术还提供了如上所述的修饰抗原在制备用于检测抗体的试剂盒中的应用。
[0012]本专利技术还提供了一种试剂盒，其包括抗Ig抗体、如上所述的修饰抗原和检测标记物。
附图说明
[0013]图1本专利技术一实施例的免疫检测方法的原理示意图。
具体实施方式
[0014]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0015]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具
体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0016]本专利技术一实施例的捕获法检测抗体的方法，该方法以形成抗Ig抗体
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待测抗体
‑
修饰抗原的形式完成检测，上述修饰抗原包括抗原及与该抗原连接的修饰剂，修饰剂为甜菜碱类、氧化叔胺类或聚乙二醇类；
[0017]所述方法包括：
[0018]通过连接于固相载体的抗Ig抗体捕获样本中的待测抗体；
[0019]使待测抗体与所述修饰抗原结合；
[0020]所述修饰抗原与检测标记物直接和/或间接结合；
[0021]检测所述检测标记物。
[0022]在一些实施方案中，所述修饰抗原与检测标记物直接结合，例如修饰抗原上直接标记有检测标记物，如直接标记有吖啶酯。
[0023]在一些实施方案中，所述修饰抗原与检测标记物间接结合。在一些实施方式中，所述修饰抗原通过第一桥连分子及第二桥连分子与检测标记物间接结合；和/或修饰抗原通过针对抗原的抗体与检测标记物间接结合。在一些实施方案中，上述第一桥连分子为生物素、碳水化合物或标签蛋白，第二桥连分子为亲和素、抗生物素抗体、凝集素或能够特异性结合所述标签蛋白的抗体。可以理解，第一桥连分子和第二桥连分子的具体种类不限于此，第一桥连分子和第二桥连分子构成一对桥连分子，可根据需要选择常见的具有亲和性能的一对桥连分子如受体
‑
配体、抗体
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抗原等。在一些实施方式中，第一桥连分子与抗原通过蛋白融合的方式连接；例如标签蛋白(如GST)与抗原融合。在一些实施方式中，第一桥连分子与抗原通过化学方式(如共价键，氢键等)连接。
[0024]在一些实施方式中，在一个反应体系内，所述修饰抗原直接结合检测标记物和间接结合检测标记物；例如在一个反应体系内，所述修饰抗原直接结合吖啶酯，并且所述修饰抗原间接结合吖啶酯。
[0025]在一些实施方式中，在一个反应体系内，所述修饰抗原同时采用两种及以上模式间接结合检测标记物；例如在一个反应体系内，所述修饰抗原通过生物素
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亲和素间接结合吖啶酯，并且所述修饰抗原通过标签蛋白
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抗体间接结合吖啶酯；例如在一个反应体系中，所述修饰抗原通过生物素
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亲和素间接结合吖啶酯，并且所述修饰抗原通过针对抗原的抗体间接结合吖啶酯。例如在一个反应体系中，所述修饰抗原通过标签蛋白
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抗体间接结合吖啶酯，并且所述修饰抗原通过针对抗原的抗体间接结合吖啶酯。例如在一个反应体系中，同时采用3种以上间接结合的模式检测标志物，所述修饰抗原通过标签蛋白
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抗体间接结合吖啶酯，所述修饰抗原通过针对抗原的抗体间接结合吖啶酯，并且所述修饰抗原通过生物素
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亲和素间接结合吖啶酯。
[0026]在一些实施方案中，上述方法还包括连接于固相载体的抗Ig抗体接触样本之后的洗涤步骤。可以理解，具体的加样模式可根据需要进行选择，例如可以先向样本中加入连接于固相载体的抗Ig抗体和修饰抗原，洗涤后再加入连接有检测标记物的第二桥连分子和连接有检测标记物的针对上述抗原的抗体；或者也可以先向样本中加入连接于固相载体的抗Ig抗体，洗涤后再加入修饰抗原、连接有检测标记物的第二桥连分子和连接有检测标记物的针对上述抗原的抗体等，在一些实施方案中，检测所述检测标记物前进行洗涤。可以理
解，上述方法为修饰抗原应用于捕获法时的具体示例，其同样可应用于间接法或其他形式的免疫检测方法。
[0027]本专利技术中，接触是指样本与连接于固相载体的抗Ig抗体接触混匀并使得其中可能的组分发生免疫反应。
[0028]在一些实施方案中，检测标记物为金属粒子、荧光标记、发色团标记、电子致密标记、化学发光标记、放射性标记或酶标记，但不限于此。可以理解，根据检测标记物的不同，相应的检测方法可根据需要选择，例如荧光标记通过荧光检测方法进行测定，酶标记通过底物反应进行测定等。
[0029]在一些实施方案中，检测标记物为罗丹明、荧光素、量子点、地高辛标记探针、放射性同位素、放射性造影剂、超声造影剂、光敏剂、荧光微球、胶体金、吖啶酯、荧光素酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β
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半乳糖苷酶、糖氧化酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶或葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶标记。
[0030]在一些实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种捕获法检测抗体的方法，其特征在于，所述方法以形成抗Ig抗体
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待测抗体
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修饰抗原的形式完成检测，所述修饰抗原包括抗原及与所述抗原连接的修饰剂，所述修饰剂为甜菜碱类、氧化叔胺类或聚乙二醇类；所述方法包括：通过连接于固相载体的抗Ig抗体捕获样本中的待测抗体；使待测抗体与所述修饰抗原结合；所述修饰抗原与检测标记物直接和/或间接结合；检测所述检测标记物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述修饰抗原通过第一桥连分子及第二桥连分子与所述检测标记物间接结合；和/或所述修饰抗原通过针对所述抗原的抗体与所述检测标记物间接结合。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一桥连分子为生物素、碳水化合物或标签蛋白，所述第二桥连分子为亲和素、抗生物素抗体、凝集素或能够特异性结合所述标签蛋白的抗体。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括所述连接于固相载体的抗Ig抗体接触样本之后的...

【专利技术属性】
技术研发人员：周峻，李瑞净，
申请(专利权)人：菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：