胶体金免疫层析试纸的制备方法、胶体金免疫层析试纸及试纸盒技术

本发明专利技术涉及免疫检测分析技术领域，特别涉及一种胶体金免疫层析试纸的制备方法、胶体金免疫层析试纸及试纸盒。胶体金免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：将流感病毒A抗体与粒径为50nm

【技术实现步骤摘要】
胶体金免疫层析试纸的制备方法、胶体金免疫层析试纸及试纸盒


[0001]本专利技术涉及免疫检测分析
，特别涉及一种胶体金免疫层析试纸的制备方法、胶体金免疫层析试纸及试纸盒。

技术介绍

[0002]胶体金免疫层析技术是一种将抗原抗体免疫反应与胶体金标记示踪技术结合用于抗原、抗体含量定性定量检测的技术。抗体的胶体金标记主要是通过胶体金与蛋白质之间的静电作用力进行牢固结合的，由于其快速、简便、成本低、稳定性好等优点，特别是为现场快速检测叩开了一扇崭新的大门。
[0003]流行性感冒病毒简称流感病毒。它分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，流感病毒可引起人、禽、猪、马、蝙蝠等多种动物感染和发病，是人流感、禽流感、猪流感、马流感等人与动物疫病的病原。其中人类流感病毒根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:甲型流感病毒(Influenza Avirus)，又称A型流感病毒；乙型流感病毒(Influenza B virus)，又称B型流感病毒；丙型流感病毒(Influenza C virus)，又称C型流感病毒，甲型流感病毒(Influenza A virus)为常见流感病毒，甲型流感病毒最容易发生变异。
[0004]现有技术中，有采用胶体金免疫层析技术检测流感病毒A，在制备免疫标签的过程中，需要使用纳米金溶液与抗体进行反应，以在纳米金表面标记上抗体，在标记过程中会出现标记效率低的问题，如何提高标记效率是需要解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是提供一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，旨在提高标记效率。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提出的一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：
[0007]将流感病毒A抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用；
[0008]在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别流感病毒A抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述流感病毒A抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；
[0009]将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测流感病毒A抗原的胶体金免疫层析试纸。
[0010]可选地，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：
[0011]准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL流感病毒A抗体，反应预设时间，再加入封闭剂，封闭预设时间，得到反应后的溶液并浓缩，得到免疫标签，采用复溶
液将所述免疫标签重悬，得到免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，烘干，备用。
[0012]可选地，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：
[0013]准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
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70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0
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9.0，然后加入浓度为10ug/mL
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30ug/mL的流感病毒A抗体，在室温下振荡反应4h
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5h，再加入质量体积浓度为0.5％
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1.0％ BSA溶液将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，封闭30min
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60min，在离心转速为6000r/min
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8000r/min条件下离心10min
‑
15min，去除上清液，得到浓缩10倍的免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到稀释5
‑
10倍的免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，于4542℃烘干16h
‑
18h，备用。
[0014]可选地，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤之前，还包括以下步骤：
[0015]配置结合垫预处理液，将结合垫置于所述结合垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述结合垫取出干燥，备用，其中，所述结合垫预处理液的成分包括10mM
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20mM Tris
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HCI，100mM
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150mM NaCI，质量体积浓度为1％
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1.5％酪蛋白，质量体积浓度为3％
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5％蔗糖，体积浓度为0.1％
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5％Tween
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20，质量体积浓度为0.1％
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0.2％PEG 20000，体积浓度为0.1％
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0.2％proclin 300。
[0016]可选地，在将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测流感病毒A抗原的胶体金免疫层析试纸的步骤之前，还包括以下步骤：
[0017]配置样本垫预处理液，将样本垫置于所述样本垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述样本垫取出干燥，备用，其中，所述样本垫预处理液的成分包括10mM
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20mM PBS，体积浓度为1％
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1.5％Tween
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20，质量体积浓度为0.2％
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0.5％ S9，质量体积浓度为4％
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6％蔗糖，质量体积浓度为0.5％
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0.8％PEG6000，质量体积浓度为1.5％
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2％BSA，体积浓度为0.1％
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0.2％proclin 300。
[0018]可选地，所述胶体金溶液的pH为7.5。
[0019]可选地，所述流感病毒A抗体包括M1302流感病毒抗体。
[0020]可选地，所述第一抗体包括M1301流感病毒A抗体。
[0021]本申请还提供一种胶体金免疫层析试纸，所述胶体金免疫层析试纸包括如所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法制备的胶体金免疫层析试纸。
[0022]本申请还提供一种胶体金免疫层析试纸盒，包括通过如所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法制得的胶体金免疫层析试纸。
[0023]本申请的胶体金免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：将流感病毒A抗体与粒径为50nm
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70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用；在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别流感病毒A抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述流感病毒A抗体的第二抗体固定在所述质控线，备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将流感病毒A抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用；在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别流感病毒A抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述流感病毒A抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测流感病毒A抗原的胶体金免疫层析试纸。2.如权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL流感病毒A抗体，反应预设时间，再加入封闭剂，封闭预设时间，得到反应后的溶液并浓缩，得到免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，烘干，备用。3.如权利要求1或2所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm
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70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0
‑
9.0，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL的流感病毒A抗体，在室温下振荡反应4h
‑
5h，再加入质量体积浓度为0.5％
‑
1.0％BSA溶液将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，封闭30min
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60min，在离心转速为6000r/min
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8000r/min条件下离心10min
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15min，去除上清液，得到浓缩10倍的免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到稀释5
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10倍的免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，于4542℃烘干16h
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18h，备用。4.如权利要求1至3中任一项所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓明，刘念，
申请(专利权)人：南方工业技术研究院深圳，
类型：发明
国别省市：