胶体金免疫层析试纸盒、胶体金免疫层析试纸及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测分析技术领域，特别涉及一种胶体金免疫层析试纸盒、胶体金免疫层析试纸及其制备方法。胶体金免疫层析试纸盒包括待测样本稀释液和胶体金免疫层析试纸；结合垫胶体金免疫层析试纸盒包括卡盒，结合垫卡壳上开设有加样区和显色区；结合垫待测样本稀释液包括：10mM

【技术实现步骤摘要】
胶体金免疫层析试纸盒、胶体金免疫层析试纸及其制备方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测分析
，特别涉及一种胶体金免疫层析试纸盒、胶体金免疫层析试纸及其制备方法。

技术介绍

[0002]胶体金免疫层析技术是一种将抗原抗体免疫反应与胶体金标记示踪技术结合用于抗原、抗体含量定性定量检测的技术。抗体的胶体金标记主要是通过胶体金与蛋白质之间的静电作用力进行牢固结合的，由于其快速、简便、成本低、稳定性好等优点，特别是为现场快速检测叩开了一扇崭新的大门。
[0003]流行性感冒病毒简称流感病毒。它分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，流感病毒可引起人、禽、猪、马、蝙蝠等多种动物感染和发病，是人流感、禽流感、猪流感、马流感等人与动物疫病的病原。其中人类流感病毒根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:甲型流感病毒(Influenza A virus)，又称A型流感病毒；乙型流感病毒(Influenza B virus)，又称B型流感病毒；丙型流感病毒(Influenza C virus)，又称C型流感病毒，B型流感病毒比A型流感病毒更易引发并发症。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提供一种胶体金免疫层析试纸盒，提高病毒的检测灵敏度。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提出的一种胶体金免疫层析试纸盒，包括待测样本稀释液和胶体金免疫层析试纸；
[0006]所述胶体金免疫层析试纸盒包括卡盒，所述卡盒包括卡壳盖和卡壳底，所述卡壳盖和所述卡壳底围设形成用以容纳所述胶体金免疫层析试纸的空间，所述卡壳上开设有加样区和显色区；
[0007]所述待测样本稀释液包括：10mM
‑
20mM PBS、0.05％
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0.1％Triton X100、0.05％
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0.1％ Tween 20以及0.1％
‑
0.2％鱼明胶；
[0008]所述胶体金免疫层析试纸包括底板、以及依次设置在所述底板上的样本垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述层析膜上设有检测线和质控线；
[0009]所述结合垫包被有胶体金标记的流感病毒B抗体，所述胶体金的粒径为50nm
‑
70nm，所述检测线处的抗体包括用以识别流感病毒B抗原的第一抗体，所述质控线处的抗体包括用以识别所述流感病毒B抗体的第二抗体。
[0010]可选地，所述流感病毒B抗体包括M1304克隆号抗体。
[0011]可选地，所述第一抗体包括M1303流感病毒B抗体。
[0012]可选地，所述结合垫包被有胶体金标记的流感病毒B抗体的涂覆浓度为10ul/cm。
[0013]可选地，所述检测线处第一抗体的划线浓度为1ul/cm。
[0014]可选地，所述样本垫、所述结合垫、所述层析膜和所述吸水垫依次相互搭接地贴在所述底板上，所述样本垫和所述结合垫搭接的宽度为1mm
‑
2mm；所述结合垫与所述层析膜搭
接的宽度为1mm
‑
2mm；所述层析膜和所述吸水垫搭接的宽度为1mm
‑
2mm。
[0015]可选地，所述胶体金的粒径为60nm；
[0016]和/或，所述检测流感病毒B抗原的胶体金免疫层析试纸的最低检出限为1
×
104，单位为：病毒颗粒数/ml。
[0017]本申请还提供一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：
[0018]配置结合垫预处理液，将结合垫置于所述结合垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述结合垫取出干燥，备用，其中，所述结合垫预处理液的成分包括10mM
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20mM Tris
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HCI，100mM
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150mM NaCI，质量体积浓度为1％
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1.5％酪蛋白，质量体积浓度为3％
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5％蔗糖，体积浓度为0.1％
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5％Tween
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20，质量体积浓度为0.1％
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0.2％PEG 20000，体积浓度为0.1％
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0.2％proclin 300；
[0019]准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
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70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0
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9.0，然后加入浓度为10ug/mL
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30ug/mL的流感病毒B抗体，在室温下振荡反应4h
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5h，再加入质量体积浓度为0.5％
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1.0％ BSA溶液将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，封闭30min
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60min，在离心转速为6000r/min
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8000r/min条件下离心10min
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15min，去除上清液，得到浓缩10倍的免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到稀释5
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10倍的免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，于4542℃烘干16h
‑
18h，备用；
[0020]配置样本垫预处理液，将样本垫置于所述样本垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述样本垫取出干燥，备用，其中，所述样本垫预处理液的成分包括10mM
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20mM PBS，体积浓度为1％
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1.5％Tween
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20，质量体积浓度为0.2％
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0.5％ S9，质量体积浓度为4％
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6％蔗糖，质量体积浓度为0.5％
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0.8％PEG6000，质量体积浓度为1.5％
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2％BSA，体积浓度为0.1％
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0.2％proclin 300；
[0021]在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别流感病毒B抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述流感病毒B抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；
[0022]将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测流感病毒B抗原的胶体金免疫层析试纸。
[0023]可选地，所述胶体金溶液的pH为7.5；
[0024]和/或，所述流感病毒B抗体的浓度为20μg/ml；
[0025]和/或，所述结合垫上免疫标签的涂覆浓度为10ul/cm。
[0026]本申请还提供一种胶体金免疫层析试纸，所述胶体金免疫层析试纸包括如所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法制备的胶体金免疫层析试纸。
[0027]本申请的胶体金免疫层析试纸盒，包括待测样本稀释液和胶体金免疫层析试纸；胶体金免疫层析试纸盒包括卡盒，卡盒包括卡壳盖和卡壳底，卡壳盖和卡壳底围设形成用以容纳胶体金免疫层析试纸的空间，卡壳上开设有加样区和显色区；待测样本稀释液包括：10mM
‑
20mM P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于，包括待测样本稀释液和胶体金免疫层析试纸；所述胶体金免疫层析试纸盒包括卡盒，所述卡盒包括卡壳盖和卡壳底，所述卡壳盖和所述卡壳底围设形成用以容纳所述胶体金免疫层析试纸的空间，所述卡壳上开设有加样区和显色区；所述待测样本稀释液包括：10mM
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20mM PBS、0.05％
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0.1％Triton X100、0.05％
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0.1％Tween 20以及0.1％
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0.2％鱼明胶；所述胶体金免疫层析试纸包括底板、以及依次设置在所述底板上的样本垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述层析膜上设有检测线和质控线；所述结合垫包被有胶体金标记的流感病毒B抗体，所述胶体金的粒径为50nm
‑
70nm，所述检测线处的抗体包括用以识别流感病毒B抗原的第一抗体，所述质控线处的抗体包括用以识别所述流感病毒B抗体的第二抗体。2.如权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于，所述流感病毒B抗体包括M1304克隆号抗体。3.如权利要求1或2所述的胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于，所述第一抗体包括M1303流感病毒B抗体。4.如权利要求1至3中任一项所述的胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于，所述结合垫包被有胶体金标记的流感病毒B抗体的涂覆浓度为10ul/cm。5.如权利要求1至4中任一项所述的胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于，所述检测线处第一抗体的划线浓度为1ul/cm。6.如权利要求1至5中任一项所述的胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于，所述样本垫、所述结合垫、所述层析膜和所述吸水垫依次相互搭接地贴在所述底板上，所述样本垫和所述结合垫搭接的宽度为1mm
‑
2mm；所述结合垫与所述层析膜搭接的宽度为1mm
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2mm；所述层析膜和所述吸水垫搭接的宽度为1mm
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2mm。7.如权利要求1至6中任一项所述的胶体金免疫层析试纸盒，其特征在于，所述胶体金的粒径为60nm；和/或，所述检测流感病毒B抗原的胶体金免疫层析试纸的最低检出限为1
×
104，单位为：病毒颗粒数/ml。8.一种如权利要求1至7中任一项所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：配置结合垫预处理液，将结合垫置于所述结合垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述结合垫取出干燥，备用，其中，所述结合垫预处理液的成分包括10mM
‑
20mM Tris
‑
HCI，100mM
‑
150mM NaCI，质量体积浓度为1％
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1.5％酪蛋白，质量体积浓度为3％
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5％蔗...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘念，陈晓明，
申请(专利权)人：南方工业技术研究院深圳，
类型：发明
国别省市：