检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸及其制备方法、试纸盒、检测方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测分析技术领域，特别涉及一种检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸及其制备方法、试纸盒、检测方法。该试纸包括底板、以及依次设置在底板上的样本垫、结合垫、层析膜和吸水垫，层析膜上设有检测线和质控线；结合垫包被有胶体金标记的腺病毒抗体，胶体金的粒径为58

【技术实现步骤摘要】
检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸及其制备方法、试纸盒、检测方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测分析
，特别涉及一种检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸及其制备方法、试纸盒、检测方法。

技术介绍

[0002]胶体金免疫层析技术是一种将抗原抗体免疫反应与胶体金标记示踪技术结合用于抗原、抗体含量定性定量检测的技术。抗体的胶体金标记主要是通过胶体金与蛋白质之间的静电作用力进行牢固结合的，由于其快速、简便、成本低、稳定性好等优点，特别是为现场快速检测叩开了一扇崭新的大门。
[0003]人腺病毒是人类重要的病毒性致病原，可导致多种疾病，主要包括急性呼吸道感染、眼结膜炎、胃肠道疾病等。
[0004]在制备免疫标签的过程中，需要使用纳米金溶液与抗体进行反应，以在纳米金表面标记上抗体，在标记过程中会出现标记效率低的问题，如何提高标记效率是需要解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是提供一种检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸，旨在提高标记效率。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提出的一种检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸，所述检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸包括底板、以及依次设置在所述底板上的样本垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述层析膜上设有检测线和质控线；
[0007]所述结合垫包被有胶体金标记的腺病毒抗体，所述胶体金的粒径为58nm
‑
62nm，所述检测线处的抗体包括用以识别腺病毒抗原的第一抗体，所述质控线处的抗体包括用以识别所述腺病毒抗体的第二抗体。
[0008]可选地，所述胶体金的粒径为60nm；
[0009]和/或，所述腺病毒抗体包括7B5M克隆号抗体，所述第一抗体包括2B10克隆号抗体；
[0010]和/或，所述第二抗体包括羊抗鼠IgG；
[0011]和/或，所述检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的最低检出限为4
×
104，单位为：病毒颗粒数/ml；
[0012]和/或，所述第一抗体为单抗或多抗；
[0013]和/或，所述检测线处第一抗体的划线浓度为1ul/cm；
[0014]和/或，所述结合垫包被有胶体金标记的腺病毒抗体的涂覆浓度为10ul/cm；
[0015]和/或，所述底板的材料包括聚氯乙烯、聚乙烯和玻璃中的至少一种；
[0016]和/或，所述样本垫的材料包括玻璃纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom8964；
[0017]和/或，所述结合垫的材料包括玻璃纤维膜和/或聚酯纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom 8980；
[0018]和/或，所述层析膜的材料包括硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜包括sartorius 140；
[0019]和/或，所述样本垫、所述结合物垫、所述层析膜和所述吸水垫依次相互搭接地贴在所述底板上。
[0020]本申请还提供一种检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：
[0021]将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用；
[0022]在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别腺病毒抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述腺病毒抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；
[0023]将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸。
[0024]可选地，在将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：
[0025]准备质量体积浓度为万分之四、粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL腺病毒抗体，反应预设时间，再加入封闭剂，封闭预设时间，得到反应后的溶液并浓缩，得到免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，烘干，备用。
[0026]可选地，在将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：
[0027]准备质量体积浓度为万分之四、粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0
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9.0，然后加入浓度为10ug/mL
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30ug/mL的腺病毒抗体，在室温下振荡反应4h
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5h，再加入质量体积浓度为0.1％
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0.3％ BSA溶液将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，封闭30min
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60min，在离心转速为6000r/min
‑
8000r/min条件下离心10min
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15min，去除上清液，得到浓缩10倍的免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到稀释5
‑
10倍的免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，于4542℃烘干16h
‑
18h，备用。
[0028]可选地，在将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤之前，还包括以下步骤：
[0029]配置结合垫预处理液，将结合垫置于所述结合垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述结合垫取出干燥，备用；
[0030]其中，所述结合垫预处理液的成分包括10mM
‑
20mM Tris
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HCI，100mM
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150mM NaCI，质量体积浓度为1％
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1.5％ BSA，质量体积浓度为3％
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5％蔗糖，体积浓度为0.5％
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1％Tween
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20，质量体积浓度为0.1％
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0.2％PEG 20000，体积浓度为0.1％
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0.2％proclin 300。
[0031]可选地，在将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析
试纸的步骤之前，还包括以下步骤：
[0032]配置样本垫预处理液，将样本垫置于所述样本垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述样本垫取出干燥，备用；
[0033]其中，所述样本垫预处理液的成分包括10mM
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20mM PBS，体积浓度为1％
‑
1.5％Tween
‑
20，质量体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸包括底板、以及依次设置在所述底板上的样本垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述层析膜上设有检测线和质控线；所述结合垫包被有胶体金标记的腺病毒抗体，所述胶体金的粒径为58nm
‑
62nm，所述检测线处的抗体包括用以识别腺病毒抗原的第一抗体，所述质控线处的抗体包括用以识别所述腺病毒抗体的第二抗体。2.如权利要求1所述的检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述胶体金的粒径为60nm；和/或，所述腺病毒抗体包括7B5M克隆号抗体，所述第一抗体包括2B10克隆号抗体；和/或，所述第二抗体包括羊抗鼠IgG；和/或，所述检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的最低检出限为4
×
104，单位为：病毒颗粒数/ml；和/或，所述第一抗体为单抗或多抗；和/或，所述检测线处第一抗体的划线浓度为1ul/cm；和/或，所述结合垫包被有胶体金标记的腺病毒抗体的涂覆浓度为10ul/cm；和/或，所述底板的材料包括聚氯乙烯、聚乙烯和玻璃中的至少一种；和/或，所述样本垫的材料包括玻璃纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom8964；和/或，所述结合垫的材料包括玻璃纤维膜和/或聚酯纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom 8980；和/或，所述层析膜的材料包括硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜包括sartorius 140；和/或，所述样本垫、所述结合物垫、所述层析膜和所述吸水垫依次相互搭接地贴在所述底板上。3.一种检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用；在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别腺病毒抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述腺病毒抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸。4.如权利要求3所述的检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：准备质量体积浓度为万分之四、粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL腺病毒抗体，反应预设时间，再加入封闭剂，封闭预设时间，得到反应后的溶液并浓缩，得到免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，烘干，备用。5.如权利要求3或4所述的检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标
签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：准备质量体积浓度为万分之四、粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0
‑
9.0，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL的腺病毒抗体，在室温下振荡反应4h
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5h，再加入质量体积浓度为0.1％
‑
0.3％BSA溶液将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，封闭30min
‑
60min，在离心转速为6000r/min
‑
8000r/min条件下离心10min
‑
15min，去除上清液，得到浓缩10倍的免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到稀释5
‑
10倍的免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，于4542℃烘干16h
‑
18h，备用。6.如权利要求3至5中任一项所述的检测腺病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将腺病毒抗体与粒径为58nm
‑
62nm的胶体金颗粒结合形成免...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘念，陈晓明，
申请(专利权)人：南方工业技术研究院深圳，
类型：发明
国别省市：