病毒的检测方法及胶体金免疫层析试纸的制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测分析技术领域，特别涉及一种病毒的检测方法及胶体金免疫层析试纸的制备方法。采用胶体金免疫层析试纸对待测样品进行检测，包括以下步骤：将待测样品加到胶体金免疫层析试纸的样本垫上，免疫层析反应10min

【技术实现步骤摘要】
病毒的检测方法及胶体金免疫层析试纸的制备方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测分析
，特别涉及一种病毒的检测方法及胶体金免疫层析试纸的制备方法。

技术介绍

[0002]胶体金免疫层析技术是一种将抗原抗体免疫反应与胶体金标记示踪技术结合用于抗原、抗体含量定性定量检测的技术。抗体的胶体金标记主要是通过胶体金与蛋白质之间的静电作用力进行牢固结合的，由于其快速、简便、成本低、稳定性好等优点，特别是为现场快速检测叩开了一扇崭新的大门。
[0003]轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一，其主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。轮状病毒感染从无症状、轻微发病到严重发病，严重时发生致命性胃肠炎、脱水及电解质平衡失调。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提供一种病毒的检测方法，提高病毒的检测灵敏度。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提出的一种病毒的检测方法，采用胶体金免疫层析试纸对待测样品进行检测，包括以下步骤：
[0006]将待测样品加到所述胶体金免疫层析试纸的样本垫上，免疫层析反应10min
‑
15min；
[0007]观察所述胶体金免疫层析试纸上检测线和质控线上的颜色，得到检测结果；
[0008]其中，所述胶体金免疫层析试纸包括底板、以及依次设置在所述底板上的样本垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述层析膜上设有检测线和质控线；
[0009]所述结合垫包被有胶体金标记的轮状病毒抗体，所述胶体金的粒径为50nm<br/>‑
70nm，所述检测线处的抗体包括用以识别轮状病毒抗原的第一抗体，所述质控线处的抗体包括用以识别所述轮状病毒抗体的第二抗体。
[0010]可选地，所述轮状病毒抗体包括11H4克隆号抗体，所述第一抗体包括7E12克隆号抗体。
[0011]可选地，所述胶体金免疫层析试纸的最低检出限为4
×
104，单位为：病毒颗粒数/ml。
[0012]可选地，所述胶体金的粒径为60nm；
[0013]和/或，所述第二抗体包括羊抗鼠IgG；
[0014]和/或，所述第一抗体为单抗或多抗。
[0015]可选地，所述检测线处第一抗体的划线浓度为1ul/cm；
[0016]和/或，所述结合垫包被有胶体金标记的轮状病毒抗体的涂覆浓度为10ul/cm。
[0017]可选地，所述底板的材料包括聚氯乙烯、聚乙烯和玻璃中的至少一种；
[0018]和/或，所述样本垫的材料包括玻璃纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom8964；
[0019]和/或，所述结合垫的材料包括玻璃纤维膜和/或聚酯纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom 8980；
[0020]和/或，所述层析膜的材料包括硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜包括sartorius 140；
[0021]和/或，所述样本垫、所述结合物垫、所述层析膜和所述吸水垫依次相互搭接地贴在所述底板上。
[0022]本申请还提供一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，包括以下步骤：
[0023]准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0
‑
9.0，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL轮状病毒抗体，反应预设时间，再加入封闭剂，封闭预设时间，得到反应后的溶液并浓缩，得到免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，烘干，备用；
[0024]在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别轮状病毒抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述轮状病毒抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；
[0025]将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测轮状病毒抗原的胶体金免疫层析试纸。
[0026]可选地，在将轮状病毒抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：
[0027]准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.5，然后加入浓度为20ug/mL的轮状病毒抗体，在室温下振荡反应4h
‑
5h，再加入质量体积浓度为0.5％
‑
1.0％ BSA溶液将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，封闭30min
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60min，在离心转速为6000r/min
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8000r/min条件下离心10min
‑
15min，去除上清液，得到浓缩10倍的免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，所述复溶液包括50mM的NaCl，质量体积浓度为0.1％的BSA，质量体积浓度为1.5％的蔗糖和质量体积浓度为1.5％的酪蛋白钠；得到稀释5
‑
10倍的免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，于4542℃烘干16h
‑
18h，备用。
[0028]可选地，在将轮状病毒抗体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤之前，还包括以下步骤：
[0029]配置结合垫预处理液，将结合垫置于所述结合垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述结合垫取出干燥，备用，其中，所述结合垫预处理液的成分包括10mM
‑
20mM PB，100mM
‑
150mM NaCI，质量体积浓度为1％
‑
1.5％酪蛋白，质量体积浓度为3％
‑
5％蔗糖，体积浓度为0.5％
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1.0％Tween
‑
20，质量体积浓度为0.1％
‑
0.2％PEG 20000，体积浓度为0.1％
‑
0.2％proclin 300。
[0030]可选地，在将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测轮状病毒抗原的胶体金免疫层析试纸的步骤之前，还包括以下步骤：
[0031]配置样本垫预处理液，将样本垫置于所述样本垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述样本垫取出干燥，备用，其中，所述样本垫预处理液的成分包括10mM
‑
20mM PBS，体积浓度为1％
‑
1.5％Tween
‑
20，质量体积浓度为0.2％
‑
0.5％ S9，质量体积浓度为4％
‑
6％蔗糖，质量体积浓度为0.5％
‑
0.8％PEG6000，质量体积浓度为1.5％<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种病毒的检测方法，其特征在于，采用胶体金免疫层析试纸对待测样品进行检测，包括以下步骤：将待测样品加到所述胶体金免疫层析试纸的样本垫上，免疫层析反应10min
‑
15min；观察所述胶体金免疫层析试纸上检测线和质控线上的颜色，得到检测结果；其中，所述胶体金免疫层析试纸包括底板、以及依次设置在所述底板上的样本垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述层析膜上设有检测线和质控线；所述结合垫包被有胶体金标记的轮状病毒抗体，所述胶体金的粒径为50nm
‑
70nm，所述检测线处的抗体包括用以识别轮状病毒抗原的第一抗体，所述质控线处的抗体包括用以识别所述轮状病毒抗体的第二抗体。2.如权利要求1所述的病毒的检测方法，其特征在于，所述轮状病毒抗体包括11H4克隆号抗体，所述第一抗体包括7E12克隆号抗体。3.如权利要求1或2所述的病毒的检测方法，其特征在于，所述胶体金免疫层析试纸的最低检出限为4
×
104，单位为：病毒颗粒数/ml。4.如权利要求1至3中任一项所述的病毒的检测方法，其特征在于，所述胶体金的粒径为60nm；和/或，所述第二抗体包括羊抗鼠IgG；和/或，所述第一抗体为单抗或多抗。5.如权利要求1至3中任一项所述的病毒的检测方法，其特征在于，所述检测线处第一抗体的划线浓度为1ul/cm；和/或，所述结合垫包被有胶体金标记的轮状病毒抗体的涂覆浓度为10ul/cm。6.如权利要求1至3中任一项所述的病毒的检测方法，其特征在于，所述底板的材料包括聚氯乙烯、聚乙烯和玻璃中的至少一种；和/或，所述样本垫的材料包括玻璃纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom8964；和/或，所述结合垫的材料包括玻璃纤维膜和/或聚酯纤维膜，所述玻璃纤维膜包括ahlstrom 8980；和/或，所述层析膜的材料包括硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜包括sartorius 140；和/或，所述样本垫、所述结合物垫、所述层析膜和所述吸水垫依次相互搭接地贴在所述底板上。7.一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0
‑
9.0，然后加入浓度为10ug/mL
‑
30ug/mL轮状病毒抗体，反应预设时间，再加入封闭剂，封闭预设时间，得到反应后的溶液并浓缩，得到免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，烘干，备用；在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别轮状病毒抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述轮状病毒抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测轮状病毒抗原的胶体金免疫层析试纸。8.如权利要求7所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将轮状病毒抗
体与粒径为50nm
‑
70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓明，刘念，
申请(专利权)人：南方工业技术研究院深圳，
类型：发明
国别省市：