一种基于多位点的高灵敏磷酸化Tau蛋白检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于多位点的高灵敏磷酸化Tau蛋白检测方法，涉及医学检验技术领域，其技术要点为：采用双抗体夹心ELISA法，即其中吸附在固相上的抗体用以捕获待测靶蛋白，然后用交联着生物活性酶的抗体，对靶蛋白结合，然后加入酶的底物，通过底物的显色或发光程度，起到检测作用；本发明专利技术的方法采用针对包括T181在内的其它升高更强或丰度更高的磷酸化位点(如T220、T231、S235、S238、S305、S396、S400、T403及S404)的抗体，以提高磷酸化Tau蛋白检测的灵敏度。本发明专利技术的多位点联合检测方法，比T181单位点检测方法，可将灵敏度提高到10倍左右，本发明专利技术比现有方法有着明显的优越性。本发明专利技术比现有方法有着明显的优越性。本发明专利技术比现有方法有着明显的优越性。

【技术实现步骤摘要】
一种基于多位点的高灵敏磷酸化Tau蛋白检测方法


[0001]本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种基于多位点的高灵敏磷酸化Tau蛋白检测方法。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s disease,AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今未明。65岁以前发病者，称早老性痴呆；65岁以后发病者称老年性痴呆。随着人口老龄化，阿尔茨海默病(Alzheimer
’
sdisease,AD)作为老年性痴呆的主要病因，日渐成为社会的主要问题，而目前尚缺乏有效的治疗方法。从根本上控制这一棘手的问题，就是在神经元出现不可再生的死亡前及时发现并予以及时干预，而这有赖于简便有效的大规模筛查，特别是血清检测。
[0003]血清磷酸化Tau蛋白检测是目前临床上重要的AD辅助诊断方法之一(1)，目前临床所用的检测方法是基于T181磷酸化位点的检测(国家药品监督管理局，皖械注本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于多位点的高灵敏磷酸化Tau蛋白检测方法，其特征是：包括以下步骤：S1、阳性参照品配制：将老年人脑皮层组织按1g/mL裂解于RIPA缓冲液中，得脑组织裂解液；对脑组织裂解液中的Tau蛋白与Aβ进行Western blot与ELISA进行检测，并确认其水平升高，将其作为阳性对照的标本；S2、抗体特异性鉴定：将步骤S1中的作为阳性对照的标本的脑组织裂解液用碱性磷酸酶处理，以去除Tau蛋白上的各磷酸化位点，作为阴性对照；利用重组质粒在细胞中表达Tau蛋白，作为阳性对照；将经过碱性磷酸酶处理前后的脑组织裂解液、表达Tau蛋白的细胞裂解液和未表达Tau蛋白的细胞裂解液作为蛋白样品，利用各磷酸化Tau蛋白抗体进行Western blot，根据结果中的实际印迹条带与预期目标条带进行对比，以判断各抗体的特异性；S3、抗体包板：将步骤S2中的各抗体，即针对包括T181位点在内的T220、T231、S235、S238、S305、S396、S400、T403及S404位点的磷酸化位点的抗体，在包板缓冲液中配制成10ng/ml，加入ELISA板条各孔中(100μl/孔)，4度过夜后，移去抗体上清；并用TBST(0.05％Twe...

【专利技术属性】
技术研发人员：柏兵，陈德柱，蔡敏琪，陈衣强，刘思远，魏雪菲，汪彦阳，周远洋，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：