用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡、其制备方法及试剂盒技术

本申请实施例属于生物医药技术领域，涉及一种用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡、其制备方法及试剂盒，包括将一体垫分为样品区域和结合区域，并将预配制的处理液均匀涂抹于一体垫；将配制的荧光微粒标记抗体溶液喷涂于一体垫的结合区域，制得用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的一体垫；将硝酸纤维素膜贴在底板上，并在硝酸纤维素膜上相互间隔平行设置两条划膜线；制备尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和鸡IgY包被抗体溶液，将尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和鸡IgY包被抗体溶液分别喷涂至对应的划膜线，形成检测线和质控线；将一体垫固定于底板上，制得试纸条，将试纸条安装于试纸壳内，制得检测卡。本申请提高尿胰蛋白酶原Ⅱ检测的检测速度，以及检测灵敏度。检测灵敏度。检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡、其制备方法及试剂盒


[0001]本申请涉及生物医药
，尤其涉及一种用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡、其制备方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]胰蛋白酶原主要有胰蛋白酶原
‑
1和胰蛋白酶原
‑
2两种，主要存在于胰腺内，正常情况下仅有很少部分分泌至体液循环。健康人群的尿胰蛋白酶原
‑
1水平比尿胰蛋白酶原
‑
2水平高，但在急性胰腺炎患者中，尿胰蛋白酶原
‑
2升高更明显，并且其分子量小，容易从肾小球滤过，在肾小管的重吸收率低，因而尿液中浓度较高，且较少受尿量的影响。因此，尿胰蛋白酶原
‑
2是诊断急性胰腺炎的可靠指标。尿胰蛋白酶原
‑
2的浓度在临床上主要用于对急腹症人群中急性胰腺炎的研究。
[0003]尿胰蛋白酶原Ⅱ是一个比较敏感而特异的诊断指标，而被用做在急诊时的筛选试验。尿胰蛋白酶原
‑
2阴性结果多半可以除外急性胰腺炎，而阳性结果时应做进一步检查以确定诊断，也应做动态观察。目前有多种尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测方法研究，根据检测的原理以及方法的不同主要可以分为两种：免疫学方法和分子生物学检测方法。其中，免疫学方法包括酶联免疫方法(Enzyme
‑
Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)、免疫胶体金方法(ImmunoChromatogragphicAssay，ICA)、放射免疫法(Radio Immune Assay，RIA)以及化学发光免疫分析法(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)等，分子生物学检测方法包括聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)和实时荧光定量PCR(Quantitative real
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time PCR，qrt
‑
PCR)等。
[0004]但是，通过免疫学方法以及现有的分子生物学检测方法对尿胰蛋白酶原Ⅱ进行检测，检测时间长、灵敏度低、仪器成本高，同时不能进行定量检测，检测精度不高。

技术实现思路

[0005]本申请实施例的目的在于提出一种用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡制备方法及试剂盒方法，以解决相关技术中尿胰蛋白酶原Ⅱ检测的时间长以及灵敏度低的技术问题。
[0006]为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡制备方法，采用了如下所述的技术方案：
[0007]将一体垫分为样品区域和结合区域，并将预配制的处理液均匀涂抹于所述一体垫；
[0008]配制荧光微粒标记抗体溶液，并将所述荧光微粒标记抗体溶液喷涂于所述结合区域，制得用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的一体垫，其中，所述荧光微粒标记抗体溶液包括尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体和羊抗鸡IgY抗体；
[0009]将硝酸纤维素膜贴在一底板上，并在所述硝酸纤维素膜上设置两条相互间隔平行的划膜线；
[0010]制备尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和鸡IgY包被抗体溶液，将所述尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和所述鸡IgY包被抗体溶液分别喷涂至对应的所述划膜线，形成检测线和质控线；
[0011]将所述一体垫和吸水垫依次固定于所述底板上，其中，所述一体垫的一端与所述硝酸纤维素膜的一端搭接，所述吸水垫的一端与所述硝酸纤维素膜的另一端搭接，制得试纸条；
[0012]将所述试纸条安装于试纸壳内，制得检测卡。
[0013]进一步的，所述配制荧光微粒标记抗体溶液的步骤包括：
[0014]取荧光微球加入装有2
‑
吗啉乙磺酸缓冲溶液的离心管中，超声至混合均匀，得到第一混合液；
[0015]量取含有1
‑
乙基
‑
碳酰二亚胺盐酸盐和N
‑
羟基琥珀酰亚胺的活化液，加入第一混合液中，超声至分散均匀，得到第二混合液；
[0016]对第二混合液进行离心，并去上清，留取沉淀；
[0017]往沉淀中加入2
‑
吗啉乙磺酸缓冲溶液，依次进行旋涡超声后，加入尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体和羊抗鸡IgY抗体进行旋转反应，得到标记抗体反应物；
[0018]向标记抗体反应物加入牛血清蛋白溶液进行封闭，并进行离心，并重复此步骤一次；
[0019]去上清后加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液，并进行超声和离心；
[0020]去上清后加入微球复溶液，依次进行超声和离心，去沉淀得到荧光微粒标记抗体溶液。
[0021]进一步的，所述处理液的组分包括硼酸
‑
硼砂缓冲液、蔗糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮以及人抗红细胞抗体。
[0022]进一步的，所述制备尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和鸡IgY包被抗体溶液的步骤包括：
[0023]配制包被液，其中，所述包被液含有三羟甲基氨基甲烷和蔗糖；
[0024]使用包被液稀释尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体，得到尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液；
[0025]使用包被液稀释鸡IgY抗体，得到鸡IgY包被抗体溶液。
[0026]进一步的，所述尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液中尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体的终浓度为1mg/mL，所述鸡IgY包被抗体溶液中鸡IgY抗体的终浓度为1mg/mL。
[0027]进一步的，所述荧光微粒标记抗体溶液中的尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体的终浓度为0.5mg/mL，所述荧光微粒标记抗体溶液中的羊抗鸡IgY抗体的终浓度为0.5mg/mL。
[0028]为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡，采用如上所述制备方法制得。
[0029]为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：
[0030]该试剂盒包括样品稀释液、尿胰蛋白酶原Ⅱ检测芯片以及采用如上所述检测卡制备方法制得的检测卡。
[0031]进一步的，所述样品稀释液包括PB、聚乙烯吡咯烷酮、氯化钠以及吐温。
[0032]进一步的，所述试剂盒的适用样本类型为人尿液样本。
[0033]进一步的，所述试剂盒的检测有效性标准为荧光检测时，仅在质控线上检测到荧光信号。
[0034]与现有技术相比，本申请实施例主要有以下有益效果：
[0035]本申请通过将一体垫分为样品区域和结合区域，并将预配制的处理液均匀涂抹于一体垫；配制荧光微粒标记抗体溶液，并将荧光微粒标记抗体溶液喷涂于结合区域，制得用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的一体垫，其中，荧光微粒标记抗体溶液包括尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体和羊抗鸡IgY抗体；将硝酸纤维素膜贴在一底板上，并在硝酸纤维素膜上设置两条相互间隔平行的划膜线；制备尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和鸡IgY包被抗体溶液，将尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和鸡IgY包被抗体溶液分别喷涂至对应的划膜线，形成检测线和质控线；将一体垫和吸水垫依次固定于底板上，其中，一体垫的一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的检测卡制备方法，其特征在于，包括下述步骤：将一体垫分为样品区域和结合区域，并将预配制的处理液均匀涂抹于所述一体垫；配制荧光微粒标记抗体溶液，并将所述荧光微粒标记抗体溶液喷涂于所述结合区域，制得用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ的一体垫，其中，所述荧光微粒标记抗体溶液包括尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体和羊抗鸡IgY抗体；将硝酸纤维素膜贴在一底板上，并在所述硝酸纤维素膜上设置两条相互间隔平行的划膜线；制备尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和鸡IgY包被抗体溶液，将所述尿胰蛋白酶原Ⅱ包被抗体溶液和所述鸡IgY包被抗体溶液分别喷涂至对应的所述划膜线，形成检测线和质控线；将所述一体垫和吸水垫依次固定于所述底板上，其中，所述一体垫的一端与所述硝酸纤维素膜的一端搭接，所述吸水垫的一端与所述硝酸纤维素膜的另一端搭接，制得试纸条；将所述试纸条安装于试纸壳内，制得检测卡。2.根据权利要求1所述的用于检测尿胰蛋白酶原Ⅱ检测卡的制备方法，其特征在于，所述配制荧光微粒标记抗体溶液的步骤包括：取荧光微球加入装有2
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吗啉乙磺酸缓冲溶液的离心管中，超声至混合均匀，得到第一混合液；量取含有1
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乙基
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碳酰二亚胺盐酸盐和N
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羟基琥珀酰亚胺的活化液，加入第一混合液中，超声至分散均匀，得到第二混合液；对第二混合液进行离心，并去上清，留取沉淀；往沉淀中加入2
‑
吗啉乙磺酸缓冲溶液，依次进行旋涡超声后，加入尿胰蛋白酶原Ⅱ抗体和羊抗鸡IgY抗体进行旋转反应，得到标记抗体反应物；向标记抗体反应物加入牛血清蛋白溶液进行封闭，并进行离心；去上清后加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液，并进行超声和离心，并重复此步...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，齐文闯，刘双，潘秀华，陈泽壮，李俊玉，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：