增强对单纯疱疹病毒疫苗应答的疫苗及其制药应用制造技术

一种诱导和增强哺乳动物抗ＨＳＶ的保护性和／或治疗性免疫的方法，该方法包括以下步骤：用有效量ＤＮＡ疫苗组合物进行至少一次免疫，所述ＤＮＡ疫苗组合物包含含有编码１型或２型ＨＳＶｇＤ蛋白的ＤＮＡ序列的第一种核酸分子和含有编码ＩＬ－１２异二聚体两种亚单位的ＤＮＡ序列的第二种核酸分子。该方法还包括用有效量的蛋白疫苗组合物进行至少一次后续免疫，所述蛋白疫苗组合物包含１型或２型ＨＳＶｇＤ蛋白以及ＩＬ－１２异二聚体。在ＤＮＡ疫苗组合物中可包括一定量的局部麻醉剂，所述局部麻醉剂可与所述核酸分子形成一种或多种复合物。当将用于本方法的疫苗组合物按照本方案以合适有效剂量提供给哺乳动物时，其在免疫的哺乳动物中产生超乎想象好的保护性和／或治疗性抗ＨＳＶ免疫应答。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及疫苗领域，更具体地说涉及一种诱导抗单纯疱疹病毒免疫的疫苗方案，该方案既使用核酸疫苗，也使用蛋白疫苗，以及使用选定的佐剂。已知的疫苗制剂使用了各种各样的传递载体，用于将如gD基因的抗原提呈至哺乳动物免疫系统，以便激发针对所述病原体的保护性免疫应答。这种“传递载体”包括作为疫苗组分的热灭活或化学灭活完整病毒、完整病毒的蛋白颗粒、病毒载体(如腺病毒或痘苗病毒等)以及基于DNA的载体或质粒。后一类型的HSV gD基因制剂的实例描述于1998年4月30日公开的国际专利申请WO98/17820号和美国专利第5,958,895号。另一方面，其它传递载体可以是例如质粒型载体的附加物，该附加物有助于将抗原传递或提呈至免疫系统。参见例如1998年11月5日公开的国际专利申请WO98/48780号。针对众多病原体的疫苗的其它变化包括含其它载体的组合物和制剂，所述载体用于传递需要针对其的免疫反应的抗原。这些其它载体可以为通过其自身生物活性增加或增强抗所述抗原的免疫应答的类型。例如，已经发现某些细胞因子和白介素是疫苗组合物的理想“佐剂”。在这些佐剂中最令人感兴趣的是IL-12。参见例如美国专利第5,723,127号和5,571,515号。作为再一个获得针对任何数量的抗病原体疫苗的合适保护性免疫应答的方法，已经提出了各种疫苗接种方案。例如，先前的研究已经证实，质粒型疫苗可用于激发免疫系统，用另一种形式的相同抗原(诸如蛋白质或重组病毒)进行第二次免疫。尽管有大量关于疫苗和疫苗制剂的信息，但仍旧需要有效的疫苗，特别是在人类诱导或产生足够的抗HSV保护性免疫的有效疫苗。在用此DNA疫苗免疫哺乳动物至少一次之后，该方法还包括用有效量的第二种疫苗组合物免疫哺乳动物至少一次，所述第二种疫苗组合物在合适药用载体中包含蛋白、特别是1型或2型HSV gD蛋白和IL-12异二聚体蛋白。在选择实施方案中，第一种疫苗以含有一定量局部麻醉剂的制剂给予，局部麻醉剂可与第一种疫苗中的核酸分子形成一种或多种复合物。再一方面，本专利技术包括HSV疫苗药盒，该药盒含有以上疫苗方法中详细列举的各种组分，以及说明书和适于混合和给予所述疫苗组分的任选装置。本专利技术的其它方面和优势在以下的其优选实施方案的详述中进一步描述。专利技术详述本专利技术提供一种有效预防或治疗哺乳动物感染单纯疱疹病毒的疫苗接种方案。此疫苗接种方法包括初免-加强免疫，在哺乳动物诱导针对1型或2型单纯疱疹病毒病原体的保护性和/或治疗性免疫。本专利技术证实，初免-加强疫苗接种方案增强了据认为是对治疗至关重要的细胞介导免疫，在所述接种方案中，HSV gD在DNA初免阶段、任选DNA加强阶段和使用与gD相同形式的IL-12的蛋白加强阶段给予。该方案证实的广谱免疫还增强抗HSV感染的保护性和/或治疗性免疫。因此，本专利技术提供了一种用于预防和治疗HSV感染的方法，例如用于HSV接触前和接触后的个体。I.定义术语“哺乳动物”包含其一般的含义。尽管本专利技术最理想的是指对人的效力，但其它灵长类动物以及驯养哺乳动物物种，包括但不限于狗、猫、母牛、马、猪、绵羊、山羊、小鼠、兔和大鼠等，也包含在此定义内。作为术语在本文可交互使用的“免疫应答”或“免疫性”是指诱导体液(即B细胞)和/或细胞(即T细胞)应答。相应地通过检测将HSV gD抗原引至宿主中而免疫的动物血清中存在的抗原特异性抗体评价体液免疫应答。在以下的一个典型实施方案中，通过酶联免疫吸附测定免疫动物血清或如以下的实施例2所述通过微量中和测定免疫动物血清评价免疫应答。还可如下文所述用CTL测定检测分离自免疫动物脾的淋巴细胞的T细胞应答。术语“初免”和“加强”具有其在本领域的通常含义。“初免”是指用第一种组合物免疫接种，其在随后用相同的或另一种组合物免疫(“加强”)时诱导的针对抗原的免疫应答水平高于用单一疫苗组合物(例如单独的初免组合物或单独的加强组合物)免疫获得的免疫应答。本文使用的术语“同源”是指两个聚合分子的序列相似性，例如两个核酸分子(如两个DNA分子或两个RNA分子)或两个多肽分子之间的序列相似性。当两个分子上的核苷酸或氨基酸位置都由相同的单体核苷酸或氨基酸占据时，例如两个DNA分子中每一个分子的某个位置都是腺嘌呤，那么它们在该位置同源。两个序列之间的同源性是匹配或同源位置数的正函数，例如如果两个化合物序列的一半位置(例如10个亚单位长度的聚合物中的5个位置)同源，那么两个序列50％同源，如果90％的位置(例如10个位置中的9个)匹配或同源，则两个序列具有90％同源性。举例来说，DNA序列3′ATTGCC5′和3′TATGCG5′具有50％同源性。本文使用的术语“大致同源”是指与目标核酸约50％同源的DNA或RNA，更优选约70％同源，甚至更优选约80％同源，最优选约90％同源。本文论述的HSV gD或IL-12蛋白和/或DNA序列由其与鉴定序列的同源性或同一性百分比限定，用于计算同源性或同一性百分比的算法包括Smith-Waterman算法，以及BLAST和FASTA程序。这些参考文献通过引用结合到本文中。II.用gD和IL-12 DNA初免按照本专利技术，所述方法的第一步或初免步骤包括用有效量的第一种“初免”疫苗免疫接种哺乳动物，所述“初免”疫苗包含含1型和2型HSV gD蛋白DNA编码序列的第一种核酸分子和含IL-12异二聚体每个亚单位的DNA编码序列的第二种核酸分子。此第二种核酸序列可包含两个单独核酸分子的组合物，其中每个核酸分子都编码不同的IL-12异二聚体，或者可以是含两个异二聚体亚单位的双顺反子或者为IL-12亚单位或其生物活性片段融合在一起成为单个分子的单一序列。gD1和gD2蛋白的编码序列是已知的(参见例如GenBank登录号K01408和以上
技术介绍
中提及的文献)，还已知IL-12异二聚体的编码序列(参见例如美国专利第5,457,038号)。天然HSV gD1或gD2序列优选用于初免疫苗；但是，本专利技术考虑使用修饰的gD1和gD2序列，在本专利技术中，这样的核酸序列修饰增强了gD基因的体内免疫原性、稳定性或某些其它药理特性。已知众多的核苷酸序列修饰，下文进行概述。在所述修饰中包括截断或缺失/插入，以缩短或延长天然gD序列。可截断gD序列的5′末端，以除去信号序列或前导序列。或者，可截断gD序列的3′末端，以除去其跨膜结构域或其半胱氨酸富集区。另一个选择是gD分子的5′和3′末端都截断，以使信号序列和跨膜结构域都被去除。修饰的gD基因的再一个实例是缺失天然前导序列或信号序列而被另一个信号序列取代的序列。例如，可在gD的残基285或残基316的氨基酸编码密码子处截断所述序列，以提供可用于本专利技术的修饰的gD序列。其他修饰可能也有用(参见例如美国专利第5,958,895号描述的片段)。本专利技术还包括gD核酸编码序列，该序列以相同读框融合至另一个有助于免疫宿主细胞表达和分泌多肽或有助于所述多肽在细胞中的稳定性的多核苷酸序列，例如，起控制细胞中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导哺乳动物抗单纯疱疹病毒病原体的保护性免疫的方法，该方法包括以下步骤：（ａ）用有效量的ＤＮＡ疫苗组合物进行至少一次免疫，所述ＤＮＡ疫苗组合物包括：（ｉ）含有编码１型或２型ＨＳＶｇＤ蛋白的ＤＮＡ序列的第一种核酸分子，和（ｉｉ）含有编码ＩＬ－１２异二聚体两种亚单位的ＤＮＡ序列的第二种核酸分子；以及（ｂ）然后用有效量的蛋白疫苗组合物进行至少一次免疫，所述蛋白疫苗组合物包括：（ｉ）１型或２型ＨＳＶｇＤ蛋白；和（ｉｉ）ＩＬ－１２异二聚体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：EM米斯金，RJ纳图克，MW普里德，MK西德胡，
申请(专利权)人：惠氏控股公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]