【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于,属于生物药物领域。
技术介绍
大豆蛋白是肉用动物饲料的主要成分之一,近年来,它在人类饮食中的作用也越 来越受到重视。然而,大豆蛋白(对人类而言)并不是一种理想的蛋白质来源,原因是除了 氨基酸组成方面的限制之外,抗营养因子也限制了大豆蛋白的应用。 大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)是一种多肽类或蛋白质。它对植物本身具有保护作 用,可防止大豆籽粒自身发生分解代谢,使种子处于休眠状态,能调节大豆蛋白质的合成与 分解,并具有抗虫作用,因而是大豆必需成分。然而其对人类胰蛋白酶的抑制作用而使其 成为大豆中主要抗营养因子,从而降低了大豆蛋白的营养价值。与大豆中的另一种主要抗 营养因子大豆凝血素不同,STI有很强的耐热能力。大多数经过加热的豆类食品仍然残留 20%的胰蛋白酶抑制剂。为了提高大豆对人类营养与健康的价值,需要对大豆蛋白中那些 降低其营养价值的因子有更加深刻的认识。 目前,大豆胰蛋白酶抑制剂抗营养作用主要表现在抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶 活性、降低蛋白质消化吸收和造成胰腺肿大两个方面。主要是胰蛋白酶抑制因子与小肠液 中胰蛋白酶、糜蛋白酶结合,生成无活性复合物,消耗和降解胰蛋白酶,导致肠道对蛋白质 消化、吸收及利用能力下降。同时,胰蛋白酶抑制剂与肠内胰蛋白酶结合后随粪便排出体 外,使肠内胰蛋白酶数量减少。因胰蛋白酶中含有丰富含硫氨基酸,若出现这种内源补偿性 分泌和排泄,必然会造成体内含硫氨基酸内源性散失,使原本缺乏含硫氨基酸大豆及豆制 品在食用后,机体内含硫氨基酸不仅得不到有效补充,且因食用大豆或豆制品而大量消耗 和散失,导致机体内含硫氨基酸耗散性缺 ...
【技术保护点】
一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法,其特征在于包括以下步骤: (1)大豆胰蛋白酶抑制剂的提取和初级分离 大豆乳清废水用HCl溶液调pH,静止,收集沉淀,离心干燥,得到大豆乳清蛋白。大豆乳清蛋白加水,用NaOH溶液调pH,水浴搅拌溶解反应,用无水硫酸铵调饱和度,水浴保温反应,离心除沉淀,重复一次。将沉淀先用蒸馏水透析,再用磷酸缓冲液透析去盐。 透析溶液上离子交换柱,用的HCl洗脱,收集蛋白组分。合并洗脱液减压浓缩至原体积1/3,用NaOH溶液调pH,再上离子交换柱用磷酸缓冲液洗脱,收集蛋白组分。 (2)固定化胰蛋白酶制备 碱性苯乙烯阴离子交换树脂经酸、碱、乙醇、去离子水洗活化后待用。取胰蛋白酶溶于的磷酸缓冲液与处理过的树脂混合,缓慢搅拌吸附,加戊二醇搅拌均匀,交联,用的磷酸缓冲液洗涤至液体无酶活性。 (3)胰蛋白酶抑制剂纯化 合并有胰蛋白酶活性的洗脱液,减压浓缩至原体积1/3。用HCl溶液调pH,上固定化酶柱,HCl溶液洗脱,在280nm测蛋白质吸收值,至无蛋白吸收峰为止。再用含有NaCl、CaCl2和异丙醇的HCl溶液洗脱,收集蛋白组分。将得到的洗脱液经浓缩、透析、 ...
【技术特征摘要】
一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法,其特征在于包括以下步骤(1)大豆胰蛋白酶抑制剂的提取和初级分离大豆乳清废水用HCl溶液调pH,静止,收集沉淀,离心干燥,得到大豆乳清蛋白。大豆乳清蛋白加水,用NaOH溶液调pH,水浴搅拌溶解反应,用无水硫酸铵调饱和度,水浴保温反应,离心除沉淀,重复一次。将沉淀先用蒸馏水透析,再用磷酸缓冲液透析去盐。透析溶液上离子交换柱,用的HCl洗脱,收集蛋白组分。合并洗脱液减压浓缩至原体积1/3,用NaOH溶液调pH,再上离子交换柱用磷酸缓冲液洗脱,收集蛋白组分。(2)固定化胰蛋白酶制备碱性苯乙烯阴离子交换树脂经酸、碱、乙醇、去离子水洗活化后待用。取胰蛋白酶溶于的磷酸缓冲液与处理过的树脂混合,缓慢搅拌吸附,加戊二醇搅拌均匀,交联,用的磷酸缓冲液洗涤至液体无酶活性。(3)胰蛋白酶抑制剂纯化合并有胰蛋白酶活性的洗脱液,减压浓缩至原体积1/3。用HCl溶液调pH,上固定化酶柱,HCl溶液洗脱,在280nm测蛋白质吸收值,至无蛋白吸收峰为止。再用含有NaCl、CaCl2和异丙醇的HCl溶液洗脱,收集蛋白组分。将得到的洗脱液经浓缩、透析、真空干燥,得到白色粉末物质。2. 根据权利要求(1)中所说的大豆蛋白酶抑制剂的提取和初级分离,其特征在于大 豆乳清废水用20% (v/v)HCl调pH3.0,静止6 8h;大豆乳清蛋白按照(m : v = 1 ...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈群,吴菁,
申请(专利权)人:湖州来色生物基因工程有限公司,吴菁,
类型:发明
国别省市:33[中国|浙江]
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