一种可降解二甲基甲酰胺的菌群富集方法技术

?本发明专利技术涉及环境微生物领域，尤其涉及一种可降解二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）的菌群富集方法。针对ＤＭＦ在工业废水处理中不易降解或降解效果不理想的问题。本发明专利技术公开了一种可降解二甲基甲酰胺的菌群富集方法，其特征在于将活性污泥加入到驯化期的培养基中进行驯化培养，再将驯化培养后的活性污泥加入到二甲基甲酰胺与富集培养基的体积比为１：２５０的培养液中进行富集培养，用ＮａＯＨ或Ｈ２ＳＯ４调节其ｐＨ至７．００；在好氧条件下放置在恒温振荡箱ＱＷ—Ａ中在恒温３０℃±２℃，振荡频率１５０ｒｐｍ左右振荡培养５至６天。本发明专利技术的目的在于为工业废水的生化处理提供一种经济高效的可降解ＤＭＦ的菌群的富集方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及环境微生物领域，尤其涉及一种可降解二甲基甲酰胺的菌群富集方 法。
技术介绍
二甲基甲酰胺(DMF)是一种化学性质稳定、沸点高、性能优良的有机溶剂，能与水 及多数有机溶剂以任意比互溶，有“万能溶剂”之称，在工业生产中得到大量应用。由于DMF 仅作为有机溶剂而不发生化学反应，在量上几乎没有损耗，全部进入废水中。DMF进入水中 会导致生物化学耗氧量和氮含量增加，使水质迅速恶化。IgDMF产生1. 54gC0D,0. OlgBOD, B0D/C0D值为0. 0065，可生化性极差。因此寻找一种有效的方法来处理DMF废水是十分迫 切的。高效优势菌以其成本低、二次污染少的特点，已受到重视并开始得到应用。但如何获 得高效的优势降解菌群一直是废水生化处理中的一个难题。高效降解菌在废水的生物处理中起着非常重要的作用，研究人员往往是从受污染 的环境中分离到一些具有特殊降解能力的细菌、真菌种类，通过富集、驯化而培养起来。国 外有学者为提高DMF的生物降解速率，用炼油厂、石化厂装置附近经常接触工业废水的土 壤中分离出的微生物或泥土加到活性污泥中去。研究发现主要降解DMF的菌种为给出中文 名称(Pseudomonas minuscula)，给出中文名称(Pcrucivial)及革兰氏阴性菌，它们可将 DMF作为碳、氮源而去除。在自然环境中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当希望获得某 一类微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一类微生物的纯培 养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得某类微生物的纯培养，一般 是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同而供给它适宜的培养条件，或加入某种 抑制剂造成只利于此菌生长而抑制其他细菌生长的环境，从而淘汰其他不需要的微生物， 再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得 到较纯的菌株。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种可降解DMF的菌群富集方法，通过该方 法能够为工业废水生化处理提供一种经济高效的可降解DMF的菌群。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下先将含可降解二甲基甲酰胺的菌的活性污泥加入到驯化期的培养基中进行驯化培养; 再将驯化培养后的的活性污泥加入到二甲基甲酰胺与富集培养基的体积比为1 :250的培 养液中进行富集培养；最后将培养液在好氧条件下放置在恒温振荡箱中，保持恒温28°C至 32°C、振荡频率150 rpm，振荡培养5至6天为一周期，在每一周期结束时，撇掉2/3的培养 液，补充添加新鲜的富集培养基继续培养，共经过5个周期的培养。进一步，驯化期的培养基组分为=K2HPO46. 8g、KH2PO4 1. 2、MgSO4. 7H20 0. lg、MnSO4. 4H20 0. lg、CaCl2. 2H20 0. lg、FeSO4. 7H20 0. lg、Na2MoO7. 2H20 0. 006g 和蒸溜水 1000mL。进一步，富集培养期的培养基组分为=KH2PO4 5g、CaCl2. 2H20 0. 022g、 MgSO4. 7H20 0. 040g、FeCl3. 6H20 0. 0075g、Na2MoO7. 2H20 0. 001 lg、ZnSO4. 7H20 0. 0007g、 MnSO4. 4H20 0. 0006g、CuSO4. 5H20 0. 0006g、CoCl2. 6H20 0. 0006g 和蒸溜水 1000mL。进一步，在上述培养过程中用NaOH或H2SO4调节其pH为7. 00。本专利技术的有益效果是利用本专利技术的方法能使工业废水处理中DMF去除速率由普 通活性污泥的 14. 24 mgDMF/(g (MLSS) · d)上升到 30. 72 mgDMF/(g (MLSS) .d^DMF 去除速 率有较大提高，对减少DMF给环境保护带来的危害起到很好的效果，在工业废水的处理具 有广阔的应用前景。附图说明图1为本专利技术活性污泥与添加富集微生物的活性污泥的DMF降解曲线图； 图2为本专利技术活性污泥与添加富集微生物的活性污泥的DMF去除率图。具体实施例方式以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并 非用于限定本专利技术的范围。实施例1原料的制备 a、培养基的配备利用II型电子精密天平依次称取下述组分溶于蒸馏水中，搅拌使其溶解。驯化期的培养基组分为=K2HPO46. 8g、KH2PO4 1. 2、MgSO4. 7H20 0. lg、 MnSO4. 4H20 0. lg、CaCl2. 2H20 0. lg、FeSO4. 7H20 0. lg、Na2MoO7. 2H20 0. 006g 和蒸溜水 1000mL。富集培养期培养基组分为KH2PO45g、CaCl2. 2Η20 0. 022g、MgSO4. 7H20 0. 040g、FeCl3. 6H20 0. 0075g、Na2MoO7. 2H20 0. 001 lg、ZnSO4. 7H20 0. 0007g、MnSO4. 4H20 0. 0006g、CuSO4. 5H20 0. 0006g、CoCl2. 6H20 0. 0006g 和蒸溜水 1000mL。b、含可降解DMF的菌的活性污泥制备取制于烟台市辛安河污水处理厂A20工艺二沉池的回流污泥 实施例2培养方法驯化培养由于DMF具有一定的生物毒性，因此为了降低DMF的毒性对活性污泥中微生 物正常生命活动的冲击影响，需要对其进行驯化培养，使其逐渐适应DMF，产生适应酶，从而 在处理DMF废水时以DMF作为唯一的碳源、氮源和能源进行代谢，达到降解DMF的目的。首先将取来的活性污泥进行了一周时间的驯化培养，活性污泥的MLSS为9702 mg/L。取250 mL锥形瓶3个，每个三角瓶取活性污泥62mL，静置弃去上清液，用驯化阶段培 养基稀释到200mL，这样每个三角瓶的初始MLSS约为3000 mg/L左右。利用NaOH或H2S04 调节其初始PH至7. 00。然后将三角瓶置于全温振荡培养箱中，温度保持在30 士 2°C，振荡频 率150 rpm左右的条件下进行培养。培养期间，每天取三角瓶中培养液50 mL利用TG16-WS 台式高速离心机在8000 r/分钟的转速下离心10分钟，取水样进行DMF含量和氨氮含量的测定，同时测量三角瓶中培养液的PH。由于培养液总量不多，离心剩余的泥和上清液又倒回 对应的三角瓶中。经过六天的培养，DMF含量由初始的2600 mg/L左右降至40 mg/L以下， 表明其中已经有可以降解DMF的微生物存活。筛选培养将驯化期培养后的三个三角瓶中的污泥混勻，平均分成六份并分别接 种到六个相同的250 mL三角瓶中。每个三角瓶中物质添加情况见表1。DMF添加量为0.4% (ν/ν),即每个三角瓶添加DMF 0. SmL0接种好之后在QW-A型全温振荡培养箱中于相同的条 件下进行培养。指标测定情况同前。筛选培养的目的是为了观察不同的PH和外加碳源对 DMF降解影响，并为最终的富集培养确定合适的条件。由实验中各项指标的测定及实验现象的观察，可以看出添加外加碳源琥珀酸钠且 全程PH保持在7. 00的培养基状况更适宜于DMF降解细菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可降解二甲基甲酰胺的菌群富集方法，是通过以下步骤实现：　　ａ、将活性污泥加入到驯化期的培养基中进行驯化培养　；　　ｂ、再将驯化培养后的的活性污泥加入到二甲基甲酰胺与富集培养基的体积比为１：２５０的培养液中进行富集培养；　　ｃ、将上述培养液在好氧条件下放置在恒温振荡箱中，保持恒温２８℃～３２℃、振荡频率１５０ｒｐｍ，振荡培养５～６天为一周期；　　ｄ、在每一周期培养结束后，去掉２／３的培养液，再补充添加新的富集培养基继续培养，共经过５个周期的培养。

【技术特征摘要】
一种可降解二甲基甲酰胺的菌群富集方法，是通过以下步骤实现a、将活性污泥加入到驯化期的培养基中进行驯化培养 ；b、再将驯化培养后的的活性污泥加入到二甲基甲酰胺与富集培养基的体积比为1250的培养液中进行富集培养;c、将上述培养液在好氧条件下放置在恒温振荡箱中，保持恒温28℃～32℃、振荡频率150rpm，振荡培养5～6天为一周期；d、在每一周期培养结束后，去掉2/3的培养液，再补充添加新的富集培养基继续培养，共经过5个周期的培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤a中驯化期的培养基组分 为=K2HPO4 6. 8g、KH2PO4 1. 2g、MgSO4. 7H20 0. lg、MnSO4. 4H20 0. lg、CaCl2. 2H20 0. lg、 F...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔荣，韩京龙，宋岩，张鹏，李金玲，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]