本发明专利技术公开了一种小链霉菌及其在达托霉素制备中的应用，该菌株由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：ＣＣＴＣＣ?ＮＯ：Ｍ２０１０１３６，保藏日期为：２０１０年６月４日。本发明专利技术制备达托霉素的方法为：ａ．采用小链霉菌ＣＣＴＣＣ?ＮＯ：Ｍ２０１０１３６为发酵菌株；ｂ．菌株培养：斜面菌苔接入摇瓶种子罐培养得摇瓶种子液；将摇瓶种子液接种于种子罐中培养；将种子罐培养液接种于发酵罐培养基培养，收集发酵液；发酵培养过程中进行补料，ｃ．发酵产物提取。本发明专利技术提供的发酵工艺经过中试和１０吨发酵罐中进行试验，其生产能力稳，发酵单位高且发酵副产物相对较少，大大地降低了后提取的难度，适宜于工业化大生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种新型微生物及其用途和应用，尤其涉及一种小链霉菌及其在制备 达托霉素中的应用。
技术介绍
达托霉素是一类称为环酯肽类新抗生素家族的第一个产品。它是从小链霉菌 (Streptomyces parvus)发酵液当中提取得到。它不仅具有新颖的化学结构，且其作用模式 也与任一已获准抗生素不同。达托霉素能在多个方面破坏细菌细胞膜功能，由此迅速杀死 革兰阳性菌。达托霉素除能作用于大多数临床相关革兰阳性菌外，更重要的是在体外对已 呈甲氧西林(methicillin)、万古霉素和利奈唑胺等耐药性分离菌株仍具强力活性。达托霉素为发酵产物，通过发酵培养得到的发酵滤液，再通过一系列纯化工艺如 色谱层析、脱色、结晶和重结晶等可最终获得达托霉素。一般达托霉素产生菌，生产能力不 稳定，产量较低，发酵副产物较多，杂质较多，导致后提取工作较为复杂，大大地增加了后序 的提纯难度，难以获得高纯度的最终产物，从而无法产业化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述问题，提供一种发酵单位高、能稳定生产、产量多且副产 物少的达托霉素产生菌。一种小链霉菌SW0702，分类命名为小链霉菌(Sti^ptomyces parvus SW0702)，由 中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO :M2010136，保藏日期为2010年6月4曰。小链霉菌CCTCC NO :M2010136的菌株的菌落特征基内菌丝发育良好，菌丝细长 分枝，直径为0. 8 0. 9 μ m ；气生菌丝生长良好，孢子丝着生在气生菌丝体上，孢子丝直、柔 曲，孢子呈椭圆形或卵圆形，表面光滑，直径为0. 65 0. 95 X 0. 95 2. 6 μ m,成熟孢子链孢 子个数在20个以上。蔗糖硝酸盐琼脂气丝浅黄色至粉红色。根据微生物形态学及国外相关资料的描述，结合小链霉菌CCTCC NO :M2010136的 菌株的各种培养特征和形态特征，该小链霉菌CCTCC NO :M2010136的菌株应属于小链霉菌 属，定名为 Streptomyces parvus SW0702。本专利技术的另一个目的是提供该菌种在制备达托霉素中的应用。小链霉菌CCTCC NO :M2010136的菌株可应用于发酵制备达托霉素。该制备方法包 括下列步骤a.发酵菌株采用小链霉菌CCTCC NO :M2010136的菌株；b.菌株培养按常规方法制备的斜面茄子瓶，挖取斜面菌苔接入摇瓶种子培养得 摇瓶种子液；将摇瓶种子液接种于摇瓶发酵培养基中或种子罐中培养；将种子罐培养液接 种于发酵罐培养基培养，收集发酵液；优选在发酵培养过程中进行补料。c.发酵产物提取色谱层析、脱色、结晶和重结晶。4其中所述的步骤b为按常规方法制备的斜面，挖取0. 5 X 1. Ocm2的斜面菌苔接入 摇瓶种子培养基，150 250rpm，培养16 32小时，得摇瓶种子液；将摇瓶种子液按种子罐 培养基体积0. 1 5%的接种量接种于种子罐，80 120rpm，培养16 32h ；将种子罐培养 液按发酵培养基体积5 15%的量接种于发酵罐培养基，120 200rpm，发酵培养130 240小时，收集发酵液；其中培养温度均为28 32°C。其中步骤b中的补料在发酵的整个过程中是很重要。具体补料工艺根据发酵液实 际情况从PH、菌浓、碳氮源消耗、溶氧及菌丝镜检情况等几方面来考虑，补料可采用连续流 加或间歇补料的方式。其中发酵培养过程中的补料，也即发酵罐补料视不同的具体发酵情况有多种，主 要有以下几种不同的方法，1、待菌丝生长良好后，开始补癸酸与油酸甲酯以体积比1 1的混合物料，根据菌 丝镜检情况和发酵单位情况调整补料量，所补的量为0. lml/L 0. 6ml/L发酵液.h ；或者2、待菌丝生长良好后，开始流加补8%癸酸氨，流速1. 0 3. 0ml/L/h，控制发酵时 溶氧不低于10%。具体地说就是在培养一定时间(此时发酵液较粘稠，菌丝生长旺盛，菌浓 20%以上)开始补料流加癸酸氨，当癸酸氨加入一定量后菌丝开始自溶，菌浓下降，培养液 变稀，溶氧上升，这时可以适当降低转速、通气量。或者3、在发酵过程中pH第一次升到7. 0 8. 5时开始补，所补的为癸酸与油酸甲酯以 体积比1 1的混合物料(为了简便后序的描述，将癸酸与油酸甲酯以体积比1 1的混 合物料简称为前体)，所补的量为0. 03 0. 2ml/L发酵液.h ；在发酵进行到35 45小时 左右一直到结束，所补的量为0. 10 0. 55ml/L发酵液· h ；为了进一步地提高发酵单位，还可以在补料操作中增加菜油的补料，具体为当发 酵至70 78小时，暂时停止前体的补入，一次性补入第一次菜油，补量以体积计为发酵罐 体积的0. 5 1. 7%，空气流量适当减少，约减少10 20%，在第一次菜油补料结束后4 8小时再重新开始补前体，补料量为0. 10 0. 55ml/L发酵液.h ；在第一次补菜油后24 40小时，暂停补前体，改补菜油(第二次)，一次性补入，补料量以体积计为发酵罐体积的 0. 5 1. 5%左右，空气流量继续适当减少，约减少10 20%。第二次菜油补料结束后4 8小时，恢复前体的补入。在发酵罐第二次补菜油后24小时，还可以再次暂停前体的补入，而再补一次菜油 (第三次)，补量以体积计为发酵罐体积的0. 5 1. 2%，之后再恢复前体的补入。在整个发 酵罐补料过程中，菜油的总补量以体积计为发酵罐体积的1. 5 4. 4%。或者4、待菌丝生长良好后开始补前体，根据菌丝镜检情况和发酵单位情况调整补料 量，菌丝生长粗壮，量多，发酵单位逐步产生并开始上升，所补的量为0. lml/L 0. 4ml/L发 酵液.h，当培养基中的还原糖降低至以下，开始补葡萄糖，以保持还原糖的浓度，浓度 维持在左右。在补料过程中，油酸甲脂和癸酸两者按1 1体积混合，通过膜过滤除菌后用于补 料。由于癸酸有很强的腐蚀性，补料用的管道质量一定要好。防止癸酸补料不正常，导致发酵异常。另外，气温低于20°C以下，癸酸很容易凝固，造成补料管道堵塞，因此对管道要进行 保温，保持管道通畅。本专利技术还公开了培养基按重量体积比计，摇瓶培养过程中的碳源为1.0 9. 5%，优选1. 5 9. 2%，最优选为8. 0 9. 0%;氮源为0. 4 3. 8%，优选1. 0 3. 5%， 最优选为2. 0 2. 8%;无机盐为0. 2 2. 5%，优选0. 4 2. 0%，最优选0. 5 1. 3%;其 余为水；种子罐培养过程中的碳源为1. 0 9. 5 %，优选1. 3 9. 2 %，最优选为7. 0 9.0% ；氮源为0. 8 3. 8 %，优选1. 5 3. 3 %，最优选为2. 0 3. 0 % ；无机盐为0. 2 2.5%，优选0.4 2.0%，最优选0.5 1.3% ；其余为水；其中碳源选自麦芽糊精、淀粉、淀粉水解糖、糖蜜、糊精、甘油、葡萄糖、麦芽糖、麦 芽汁、土豆浸出粉、土豆糊精、燕麦片中的一种或几种；优选麦芽糊精、淀粉水解糖、糖蜜、甘 油、葡萄糖、麦芽汁、土豆糊精、燕麦片中的一种或几种；最优选麦芽糊精、淀粉水解糖、糖 蜜、甘油、葡萄糖、土豆糊精中的一种或几种。其中氮源选自黄豆饼粉、玉本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种菌株，分类命名为小链霉菌ＳＷ０７０２（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐａｒｖｕｓ ＳＷ０７０２），由武汉中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ２０１０１３６，保藏日期为：２０１０年６月４日。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱健，陈晓霞，许永锋，王蓓，李艳，高兴蓉，
申请(专利权)人：杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：86
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。