一种抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基及其制备方法。按重量百分比，包括：1±0.2%酵母粉、2±0.2%蛋白胨、2±0.2%葡萄糖、2±0.2%琼脂、4±0.2%储液A 、0.1±0.2%储液B和2.2±0.2%丙酸钠，余量为水，自然pH为6.5±0.2。该方法包括以下几个步骤：步骤A：按配方配制基础培养基、储液A、储液B；步骤B：按配方分别加入酵母粉、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、水，混合均匀后加入储液A和储液B，再加入丙酸钠，使培养基自然pH值达到6.5±0.2，121±0.2℃灭菌20分钟，灭菌后加入氯霉素和储液C采用本方案，能够有效抑制自然界中霉菌细菌的污染，达到酵母菌富集培养及初步鉴定的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基及其制备方法
本专利技术属于自然界中酵母培养筛选方法领域，具体涉及到酵母的富集培养及分类鉴定培养基及其制备方法。
技术介绍
酵母菌是一类广泛存在于自然环境中的真核微生物。在自然环境中存在大量有益的酵母菌，特别是葡萄园及葡萄浆果表面。同时在自然界中还存在大量其他微生物，包括细菌及霉菌、放线菌。在做野生酵母资源分类调查时，需要真实反映环境中野生酵母菌的种类、数量。但是酵母菌和霉菌同属真菌，生长环境相同，最适生长温度都在25-28度。因此在培养酵母菌时无法避免霉菌的污染，严重影响酵母种类观察及计数。在采集自然野生酵母时也需要多次分离纯化，费时费力。
技术实现思路
为了解决以上技术问题，本专利技术提供一种能富集培养酵母菌，有效抑制霉菌、细菌及放线菌的酵母富集培养基。同时加入微量元素及显色剂，能够使不同属酵母表现出不同颜色及形态特征，对自然野生酵母进行初步分类鉴定。一种抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基，按重量百分比，包括：1±0.2%酵母粉、2±0.2%蛋白胨、2±0.2%葡萄糖、2±0.2%琼脂、4±0.2%储液A、0.1±0.2%储液B和2.2±0.2%丙酸钠，余量为水，自然pH为6.5±0.2。优选的，所述储液A包括：磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钙和硫酸镁。优选的，所述储液B包括：氯化铁和硫酸锰。本专利技术采用以上技术方案，其优点在于，储液A为培养基提供必要的离子元素，储液B为培养基提供必要的离子元素。丙酸钠能够有效抑制霉菌，但不影响酵母菌生长。采用本方案，能够有效抑制自然界中霉菌细菌的污染，达到酵母菌富集培养及初步鉴定的作用。本专利技术还提供一种制备抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基方法，包括以下几个步骤：步骤A：按配方分别加入1±0.2%酵母粉、2±0.2%蛋白胨、2±0.2%葡萄糖、2±0.2%琼脂、水，混合均匀，按配方配制储液A、储液B；步骤B：加入储液A和储液B，再加入丙酸钠，使培养基自然pH值达到6.5±0.2，121℃灭菌20分钟，灭菌后加入氯霉素和储液C。本专利技术采用以上技术方案，其优点在于，配方中加了抑制霉菌的丙酸钠；传统需多次分离纯化以避免霉菌和细菌的污染；如果有霉菌的话，会污染整个培养皿。优选的，所述储液C采用溶解于酒精的溴甲酚绿。本专利技术进一步采用以上技术特征，其优点在于，储液C为显色剂，溴甲酚绿变色范围PH是3.8-5.4，酸式型为黄色，碱式型为蓝色。酵母在生长过程中是自身及周围环境酸碱值变化，引起菌落及周围的颜色变化。本专利技术的有益效果：本方法将富集培养与分类鉴定有机结合，能够快速、简单、方便的从自然界中分离出各种酵母菌，同时进行有效分类。并且能够直观的从本培养基上观察到酵母菌的生态分布与种属多样性。对于从事自然界酵母资源调查的科研工作者提供快速的技术方法，同时也为酒厂或其他需要从自然环境中筛选酵母菌种的加工企业提供简单方便的筛选鉴定方法。具体实施方式下面对本专利技术的较优的实施例作进一步的详细说明：实施例1步骤A：配制基础培养基以及储液A、储液B；步骤B：在常规酵母培养基（1%酵母粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖、2%琼脂、余量为水），混合均匀后加入储液A和储液B。最后通过加入丙酸钠2.2%，使培养基自然pH值达到6.5。121℃灭菌20分钟，灭菌后加入氯霉素1%，储液C0.1%。具体配方为：储液A：磷酸二氢钾5.5g、氯化钾4.25g、氯化钙1.25g、硫酸镁1.25g用水定容至400ml。储液B：氯化铁0.25g、硫酸锰0.25g用水定容至100ml。储液C：将0.44g溴甲酚绿溶解于20ml浓度为50%的酒精中。新型培养基：按重量百分比：1%酵母粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖、2%琼脂、4%储液A、0.1%储液B，自然pH为6.5。对比实施例：与实施例1不同的是：按上述配方配制培养基，仅改变丙酸钠添加的浓度。实施例2：加入0.7%丙酸钠，自然PH值6.27，其它条件与实施例1相同；实施例3：加入1.0%丙酸钠，自然PH值6.31，其它条件与实施例1相同；实施例4：加入1.4%丙酸钠，自然PH值6.35，其它条件与实施例1相同；实施例5：加入2.2%丙酸钠，自然PH值6.50，其它条件与实施例1相同；分别接种霉菌、汉逊酵母、毕赤酵母和酿酒酵母，25℃培养，6天后，实施例2、3和4均有霉菌和酵母菌生长，实施例5仅有酵母菌生长。由此可见，丙酸钠的重量比为2.2%时，该培养基可以有效富集培养自然界中常见酵母菌种，同时抑制霉菌的污染，能够达到富集培养并进行初步分类的目的。汉逊酵母属（Hanseniaspora）显蓝绿色，周围培养基变黄色，菌落平坦，表面光滑呈奶油状。毕赤酵母属（Pichia）显白色，周围培养基变黄色，菌落平坦，表面干燥粗糙。酿酒酵母属（Saccharomyces）显白色，周围培养基变黄色，菌落锥状突起，表面光滑奶油状。从效果可以对比出：若按传统方法需要先使用酵母富集培养基（YPD）从自然界中筛选出酵母菌（3-5天）再经过分离纯化1-3次（每次需3-5天培养），然后再使用鉴别培养基进行分类鉴定（需要5-7天）。本专利技术可以将酵母采集与分类的工作同时进行，一般需要5-7天即可从培养基中分离出酵母菌，并且从平板上直接观察出酵母菌的种类。极大减少了按传统方式进行酵母分离纯化到分类鉴定的工作量。实施例6野生酿酒酵母菌的筛选工作将葡萄浆果除梗破碎，装入适量容器中使其自然触发发酵，发酵启动后，取1mL发酵液，稀释到10-4或10-5，取稀释液0.1mL涂布于本设计培养基，25℃培养5-7天，进行观察。平板上表现出三个形态的酵母菌。一种菌落特征表现为圆形，平坦，奶油状，表面光滑湿润，带黄绿色，可鉴定为汉逊酵母属（Hanseniaspora）；一种菌落特征表现为圆锥状，中心凸起，表面光滑，奶油状，白色，可鉴定为酿酒酵母属（Saccharomyces）；一种酵母特征表现为白色菌落，表面干燥粉末状，可鉴定为毕赤酵母属（Pichia）。实验结果表明，该葡萄果实表面存在三种与葡萄酒酿造相关的酵母菌，分别为汉逊酵母、酿酒酵母、毕赤酵母。从培养基中挑取单菌落酵母菌，进行复壮培养、保藏即可用于开展相关酵母菌的生理生化特性、优良菌株选育等深入科学研究。本培养基大大缩短了自然酵母筛选分类的工作时间和工作强度，为从事酵母菌的科研工作者提供了便捷高效的获取实验材料的方法。以上内容是结合具体的优选实施方式对本专利技术所作的进一步详细说明，不能认定本专利技术的具体实施只局限于这些说明。对于本专利技术所属
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基，其特征在于，按重量百分比，包括：1±0.2%酵母粉、2±0.2%蛋白胨、2±0.2%葡萄糖、2±0.2%琼脂、4±0.2%储液A、0.1±0.2%储液B和2.2±0.2%丙酸钠，余量为水，自然pH为6.5±0.2。

【技术特征摘要】
1.一种制备抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基的方法，其特征在于，包括以下几个步骤：步骤A：配制基础培养基以及储液A、储液B；步骤B：按配方分别加入1%酵母粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖、2%琼脂、水，混合均匀后加入储液A和储液B，再加入丙酸钠，使培养基自然pH值达到6.5，121℃灭菌20分钟，灭菌后加入1%氯霉素和0.1%储液C；所述抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基，按重量百分比，由以下组分组成：...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨莹，管敬喜，谢林君，张劲，谢太理，张瑛，文仁德，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院葡萄与葡萄酒研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45