用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物，其含有０．０１ｍＭ／１００ｍＬ～１ｍＭ／１００ｍＬ的肌醇及０．０１ｍＭ／１００ｍＬ～１ｍＭ／１００ｍＬ的烟酰胺，在加快谷胱甘肽生产性酵母的生长繁殖速度的同时，增加菌体内谷胱甘肽积蓄量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物，其特征在于，谷胱甘肽生产性 酵母的培养基内含有肌醇和烟酰胺，在加快谷胱甘肽生产性酵母的生长繁殖速度的同时， 增加菌体内谷胱甘肽积蓄量。
技术介绍
关于谷胱甘肽生产性酵母，自以前起，酵母(Saccharomyces)属的生产率高，菌体 内积蓄量多的情况便为人们所知，据报告显示，其中，酵母属Cystinovolensis与其它具 代表性的谷胱甘肽生产性酵母——酿酒酵母和卡氏酵母——相比，具有生产率更高的菌种 特性(日本特愿昭52-8984)。还有报告显示，遗传基因引入技术可使酿酒酵母中谷胱甘 肽的积蓄量增加(日本特开平6-7075 。此外，通过向培养基内添加锌离子，谷胱甘肽的 生成积蓄量将会增加(日本特开平11-92394)。此外，亦有报告显示，挑选酵母属酵母的 突然变异株，提高锌离子的耐受性，这样便可使谷胱甘肽的生成积蓄量增加(日本特愿平 1-115295)。无论哪项技术，都以增加酵母菌中谷胱甘肽的生成积蓄量，最终增加生产收率 为目的。然而，尽管添加锌离子会产生其相应的效果，但需指出的是，培养基内锌离子的浓 度梯度难以控制，此外，还可能产生种种问题，例如由于菌的不同，在高浓度锌离子存在的 情况下，可能引起繁殖障碍等。虽然通过挑选突然变异株也有得到改观的倾向，但不一定会 收到良好的效果。
技术实现思路
本专利技术最重要的目的是提高谷胱甘肽产生菌的生长繁殖速度，进而延长菌的谷胱 甘肽合成活性半衰期，故而致力于培养基的改良。专利技术者知道，不论动物还是植物，正常细 胞培养中若有肌醇的存在，那么培养基的环境本身便可得到调节，从而保持对葡萄糖这种 养分的稳定吸收，于是专利技术者尝试向培养基内添加肌醇。此外，液态物质、细胞培养液状态 下，混合液本身的稳定性会对细胞的繁殖率产生巨大影响，专利技术者认为这是培养基内氧化 物的增加造成的。为此，专利技术者选出生物体内广泛存在、能对电子的授受进行可逆性操作的 抗氧化物质作为最适宜添加进培养基内的物质，这就是烟酰胺。也就是说，本技术是以通过 向培养基内添加肌醇和烟酰胺，加快谷胱甘肽生成菌生长繁殖速度，进而延长谷胱甘肽合 成活性半衰期为特征的技术。通过利用本技术，可增加谷胱甘肽在细胞内的积蓄量，与锌离 子添加技术、遗传基因重组技术相比，在最终收率上，会得到同等甚至更高的生产率。培养 后的菌体可通过离心分离等方式收集，并用热水提取。提取是指将收集到的菌体的浓度调 节至6 10%后，使其悬浮于95 100°C的热水中，并保持1 10分钟，然后再提取。基于上述目的，本专利技术提供一种用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物， 其特征在于，含有0. OlmM/IOOmL ImM/lOOmL的肌醇及0. OlmM/IOOmL ImM/lOOmL的烟 酰胺。在本专利技术前述的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物中，含有等摩尔浓度的L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸作为合成谷胱甘肽的原料，其中，L-谷氨酸、L-半胱 氨酸和甘氨酸的浓度均为20 50mM/100mL。在本专利技术前述的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物中，含有浓度为 10 25mM/100mL的硫酸镁作为活性维持辅助剂。在本专利技术前述的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物中，含有从D-葡 萄糖、D-果糖和D-麦芽糖中选出的至少一种物质作为碳源。在本专利技术前述的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物中，上述碳源的浓 度为 5 15mM/100mL。在本专利技术前述的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物中，肌醇含量为 0. 05mM/100mL 0. 5mM/100mL，烟酰胺含量为 0. 05mM/100mL 0. 5mM/100mL。在本专利技术前述的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物中，谷胱甘肽生产 性酵母为酵母属酵母。在本专利技术前述的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物中，谷胱甘肽生 产性酵母为从假丝酵母(Candida)属酵母、德巴利酵母(Debaryomyces)属酵母、红酵母 (Rhodotorula)属酵母、球拟酵母菌(Torulopsis)属酵母、汉逊酵母(Hansenula)属酵 母、裂殖酵母(Schizosaccharomyces)属酵母、毕赤酵母(Pichia)属酵母、克鲁维酵母 (Kluyveromyces)属酵母和法夫酵母(Wiaffia)属酵母组成的菌群中选取的1种或2种以 上的酵母。利用本专利技术提供的用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物，加快了谷胱甘 肽生产性酵母的生长繁殖速度，进一步延长了谷胱甘肽合成活性半衰期，增加了菌体内谷 胱甘肽积蓄量。具体实施例方式下面通过实施例来具体说明本专利技术。首先，使用"Saccharomyces cystinovolens KNC-1，，、“酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae IF00021) ”、“卡氏酵母(Saccharomyces carlsbergensisY1068)，，这 3 种菌种。用麦芽糖培养基对它们进行初期培养后，为它们添加3种培养基，分别计算测量 其生长繁殖速度、菌体浓度、菌体内谷胱甘肽浓度、菌体外谷胱甘肽浓度、谷胱甘肽稳定浓 度到达时间、基质中谷胱甘肽稳定收率、谷胱甘肽稳定浓度保持时间、谷胱甘肽合成活性半 衰期，并作比较。培养基中的L-谷氨酸、L-半胱氨酸、甘氨酸是由酵母菌生成的谷胱甘肽 的原料，添加D-葡萄糖作为菌体的碳源，还添加日本特开昭53-94089记述的硫酸镁作为菌 生长繁殖的辅助剂。此外，作为原料添加的L-谷氨酸、L-半胱氨酸、甘氨酸必须为等摩尔 浓度，这样得以生成谷胱甘肽。当然，为增加产量还可能提高各原料的浓度，但生产上最优 选的浓度是实施例中列举的比例。另外，硫酸镁对该原料的相对浓度优选1/3 1/2，选择 1/3时，判断葡萄糖选定为10/3会产生最佳效果，该结果如实施例1所示。此外，为对它们进行对比，先固定谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、硫酸镁、葡萄糖的浓 度，然后改变肌醇、烟酰胺的添加量，其对比结果如实施例3 5所示。关于谷胱甘肽含量的测定，使用DTNB (BP 5,5- 二硫代双硝基苯甲酸))，通过 比色法(chromogenic technique)测定，待测定稳定浓度后算出各数值。关于合成活性，需自初期值起定时测定谷胱甘肽浓度，标注半衰减时间。谷胱甘肽在初期培养阶段，因D-麦芽糖、糖蜜的作用而繁殖到2倍容量，在下一阶 段添加硫酸镁后，活性提高、繁殖到4倍容量。在最终阶段，添加适量L-谷氨酸、L-半胱氨 酸、甘氨酸这三种原料的同时，添加适量D-葡萄糖、肌醇、烟酰胺，谷胱甘肽可繁殖到6倍容 量。酵母菌发酵产生的谷胱甘肽被高氯酸钠、高氯酸钾高氯酸镁或高氯酸钙这些添加剂氯 化后，使用高速离心机提取澄清部分，向罐内投进ODS树脂，进行搅拌，让其产生吸附作用， 然后用淡盐酸萃取，温风干燥后即得到所需谷胱甘肽。实施例13种培养基的组成如下。(数值单位mM/100ml)表权利要求1.用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物，其特征在于，含有0.OlmM/lOOmL ImM/IOOmL 的肌醇及 0. OlmM/IOOmL ImM/lOOmL 的烟酰胺。2.根据权利要求1本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．用于培养谷胱甘肽生产性酵母的培养基组合物，其特征在于，含有０．０１ｍＭ／１００ｍＬ～１ｍＭ／１００ｍＬ的肌醇及０．０１ｍＭ／１００ｍＬ～１ｍＭ／１００ｍＬ的烟酰胺。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：川崎究，
申请(专利权)人：重庆凯林制药有限公司，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]