本发明专利技术涉及基因组学、分子生物学、细胞生物学、基因工程以及临床医学，本发明专利技术具体涉及人类ＩＮＧ４ＩＬ－２４双基因共表达载体作为放疗药物增敏剂的应用，放疗前将人类ＩＮＧ４和ＩＬ－２４双基因共表达载体导入肿瘤细胞，使人类ＩＮＧ４和ＩＬ－２４基因在肿瘤细胞中表达，然后进行放疗；本发明专利技术所述Ａｄ－ＩＮＧ４－ｐｏｌｙＡΔ２９６～２９８＋ＣＭＶ－ＩＬ－２４；可以使大量增殖期肿瘤细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期，有利于增强照射敏感性，ＭＴＴ和ＦＣＭ检测结果进一步表明，Ａｄ－ＩＮＧ４－ＩＬ－２４联合放疗具有显著性抑制ＳＰＣ－Ａ１肺腺癌细胞和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳腺癌细胞及其移植瘤生长和诱导细胞凋亡的作用，优于Ａｄ－ＩＮＧ４－ＩＬ－２４单纯组和放疗单纯组，呈现明显放疗增敏协同效应；因此，可以应用人类ＩＮＧ４和ＩＬ－２４双基因共表达载体增强肿瘤细胞对放疗敏感性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因组学、分子生物学、细胞生物学、基因工程以及临床医学，本专利技术 具体涉及人类ING4和IL-24双基因共表达载体作为化疗药物增敏剂的应用。
技术介绍
放射治疗是肿瘤治疗的常规手段之一，70% 80%的恶性肿瘤患者在治疗过程中 需接受放疗。肿瘤对辐射不敏感或对辐射产生抗拒性，是放射治疗难以根治恶性肿瘤的主 要原因之一。近年来，随着对肿瘤发病分子机制及细胞生长调控机理研究的深入，肿瘤基 因治疗已取得一些令人振奋的成果，但针对单一环节的转基因治疗常常不能达到令人满意 的治疗效果。Weichselbaum等于1994年提出肿瘤基因-放射治疗的新思路，其原理是将 辐射诱导型基因的调控序列与肿瘤杀伤基因相耦联，转染肿瘤细胞，对肿瘤实施局部照射 同时诱导基因表达，通过射线与基因的双重作用杀伤肿瘤，以达到降低照射剂量、缓解正常 组织损伤的目的。因此，将放射治疗与基因治疗相结合，事半功倍，已成为肿瘤治疗研究的 重要方向之一，目前肿瘤基因联合放射治疗的有关机制主要有如下几种(参见田玥，苏成 海.国际放射医学核医学杂志.2008 32(1))①免疫基因治疗与放射治疗的联合；②抑癌 基因与放射治疗的联合；③自杀基因治疗与放射治疗的联合；④抗血管生成基因治疗与放 射治疗的联合；⑤特异性启动子基因治疗与放射治疗的联合；⑥辐射保护性基因治疗与放 射治疗的联合。现有技术中，已知人ING4基因定位于12pl3_31，基因跨距13kb，由8个外显子 和7个内含子组成，cDNA全长1380bp，编码蛋白含249个氨基酸，是新近发现的一种细胞 内肿瘤生长抑制因子，可与NF- κ B蛋白的P65亚基结合抑制NF- κ B蛋白的活性，引起对 NF-κ B敏感的IL-8等基因的表达量减少；可通过调节p53乙酰化状态增强p53的转录 活性；可抑制缺氧诱导因子HIF-I的活化等，从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞生长；白 介素-24(interleukin-24，IL-24)基因原先被命名为黑色素瘤分化相关基因(melanoma differentiation-associated gene-7，mda_7)，由美国哥伦比亚大学的 Jiang 等人于 1995 年将增生活跃的人类黑色素瘤细胞HO-I产生的cDNA文库与经人成纤维细胞β干扰素 (IFN-β )和Hiezerein(MEZ)共同处理过的HO-I细胞的cDNA文库进行减数杂交时首次发 现(参见 Jiang H, Lin JJ, Su ZZ 等人，Oncogene，1995，11 (12) :2477_2486·)。这一因子 从其结构、染色体定位、碱基序列同源性及细胞因子特性等方面综合考虑，被归入IL-10家 族，并命名为IL-24。IL-24为分泌型细胞因子，是一种膜受体介导的肿瘤生长抑制因子。目 前的研究显示，IL-24基因是第一个，很可能是唯一既抑制肿瘤细胞生长和血管形成并诱导 凋亡，同时又能刺激免疫细胞表达细胞因子的新型抑癌基因，因而能通过抑制肿瘤血管生 长，刺激免疫系统应答及诱导肿瘤细胞凋亡三者联合的方式来发挥抗肿瘤效应。申请号为200910029793. 9的中国专利技术专利申请公开说明书公开了人类ING4基因 作为肿瘤放疗增敏剂的用途，可以将ING4基因应用于肿瘤放疗过程，并且明显促进不同肿 瘤细胞对放疗的敏感性，有效地抑制肿瘤细胞的生长，诱导肿瘤细胞凋亡。3申请号为200810244301. 3的中国专利技术专利申请公开说明书公开了双基因重组转 移载体 pAdTrack-CMV-ING4-polyAA296 298+CMV-IL-24，所述双基因载体将 ING4 和 IL-24 基 因理想而又成功的组合使两个基因在同一个载体上均能获得成功表达，并且通过双基因表 达产物的联合作用，将作用于肿瘤细胞内的ING4与分泌至胞外的IL-24联合作用，进而发 挥出抑癌增效和化疗增敏效果，而且其效果相对于单独的ING4或者IL-24的作用更明显。但是关于人类ING4和IL-24双基因共表达载体作为肿瘤放疗增敏剂的应用却未 见报道，而且本领域技术人员公知化疗增敏药物未必可以作为放疗增敏药物使用；放射 增敏作用主要是针对瘤内放射抗拒的那部分乏氧细胞而提出的，指的是某些化学物质能增 强射线对肿瘤内乏氧细胞的杀灭作用而对有氧的正常组织损伤较小，这些化学物质称为放 疗增敏剂，常用的放疗增敏剂主要有米索硝唑(MISO)、甘氨双唑钠(CMNa)、黄酮乙酸和氧； 有些药物既可以作为放疗增敏剂又可以作为化疗增敏剂，比如米索硝唑(MISO)、甘氨双唑 钠化11妝)、011妝、环磷酰胺、氟尿嘧啶、￥ -16、博来霉素、丝裂霉素(、(羟基)喜树碱、紫杉 醇、阿霉素、顺(卡)钼等；但是有些药物只能作为化疗增敏药物而不能作为放疗增敏药物， 比如磺氨酸、decitabine等可以克服抗药性，使癌症得到更好的治疗。而且目前未见有关人类ING4和IL-24双基因共表达载体及其双基因编码蛋白联 合放疗发挥放疗增敏作用的文献报道。
技术实现思路
本专利技术目的是提供ING4和IL-24基因共表达载体的新用途，具体涉及人类ING4 和IL-24双基因共表达载体作为放疗增敏剂的应用。本专利技术的另一目的是提供应用人类ING4和IL-24双基因共表达载体增强肿瘤细 胞对放疗敏感性的方法。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是人类ING4和IL-24双基因共表达载 体作为放疗增敏剂的应用，所述人类ING4和IL-24双基因共表达载体为双基因重组转移载 体 pAdTrack-CMV-ING4-polyAA296 298+CMV-IL-24(参见公开号为 CN 101591658A 的中国 专利技术专利申请公开说明书)。本专利技术还提供了一种应用人类ING4和IL-24双基因共表达载体增强 肿瘤细胞对放疗敏感性的方法，放疗前将人类ING4和IL-24双基因共表达载体 pAdTrack-CMV-ING4-polyA^96^ 298+CMV-IL-24 导入肿瘤细胞，使人类 ING4 和 IL-24 基因在 肿瘤细胞中表达，然后进行放疗。上述技术方案中，所述将pAdTrack-CMV-ING4_polyAA296 298+CMV-IL_24 导入肿瘤 细胞的方法为质粒转染或腺病毒介导法。上述技术方案中，所述pAdTrack-CMV-ING4_polyAA296 298+CMV-IL_24 具有公开号 为CN 101591658A中国专利技术专利申请公开说明书的序列表中SEQID NO. 2所述的碱基序列。下面以腺病毒介导法为例，说明本专利技术采用的技术方案，包括以下具体步骤(1)按照现有技术，用 pAdTrack-CMV-ING4-polyAA296 298+CMV-IL-24 双基 因共表达载体质粒构建Ad-ING4-polyAA296 298+CMV_IL_24重组腺病毒病毒子(简称 Ad-ING4-IL-24)；(2)用Ad-ING4-polyAA296 298+CMV-IL_24感染人肿瘤细胞或裸鼠移植瘤，使人4ING4和IL-24基因在人的肿瘤细胞中得到表达；(3)对步骤(2)所述的人的肿瘤细胞进行放疗。上述技术方案中，所述肿瘤为肺腺癌本文档来自技高网...
【技术保护点】
人类ＩＮＧ４和ＩＬ－２４基因共表达载体作为放疗增敏剂的应用，所述人类ＩＮＧ４和ＩＬ－２４双基因共表达载体为双基因重组转移载体ｐＡｄＴｒａｃｋ－ＣＭＶ－ＩＮＧ４－ｐｏｌｙＡ↑［Δ２９６～２９８］＋ＣＭＶ－ＩＬ－２４。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨吉成，凌春华，盛伟华，黄锦宏，谢宇锋，赵大国，李正祎，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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