本发明专利技术涉及MAFF在诊断和区分冠心病和冠心病合并糖尿病中的应用。基于高通量测序的方法对冠心病、冠心病合并糖尿病患者及健康人外周血进行测序，比较冠心病与健康对照、冠心病结合糖尿病与健康对照、冠心病与冠心病合并糖尿病三组数据，挑选出差异表达基因MAFF，进而通过实验验证MAFF基因与冠心病和冠心病合并糖尿病的相关性。本发明专利技术提供的MAFF基因不仅能作为冠心病、冠心病合并糖尿病的诊断靶点，还可以用来区分这两种疾病，具有很好的临床应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及MAFF在诊断和区分冠心病和冠心病合并糖尿病中的应用。
技术介绍
冠心病(coronaryheartdisease，CHD)在心血管系统疾病中占有重要地位，它是由冠状动脉发生粥样硬化引起的管腔狭窄或闭塞，导致心肌缺血缺氧或坏死而引起的心脏病。被认为是世界上最常见的死亡原因之一，近年来该病在国内的发病率不断上升，成为人民健康的巨大威胁。糖尿病是冠心病的主要危险因素之一，在糖尿病人群中冠心病的发病率较高，与单纯冠心病患者相比，其冠状动脉病变多呈弥漫性，多支病变的发生率较高，且管腔的狭窄程度较重。有报道显示新诊断的糖尿病患者一半己有大血管损伤，提示糖尿病既是一种血管性疾病，也是一种炎症性疾病。随着糖尿病的患病率的增加，其患病人群中的青壮年人逐年增长，对社会和家庭的危害更加严重。冠心病合并糖尿病较单纯冠心病发病率高数倍，并且病情进展迅速，危害更甚。虽然目前已经对冠心病的研究取得较大进展，但是冠心病合并糖尿病的发病研究较少，二者的发病机制仍有待阐明。临床迫切需要寻找冠心病、冠心病合并糖尿病的分子诊断标记，进行早预防、早治疗，尤其是对冠心病合并糖尿病患者，早期诊断将有效提高患者生存率。为解决目前冠心病和冠心病合并糖尿病早期分子诊断标记稀缺的问题，专利技术人对2例单纯冠心病患者，6例冠心病合并糖尿病患者及10例健康人对照外周血样本进行高通量测序，比较冠心病与健康对照、冠心病结合糖尿病与健康对照、冠心病与冠心病合并糖尿病三组数据，挑选出差异表达基因MAFF，进一步，通过实验证实了MAFF基因与冠心病和冠心病合并糖尿病具有很好的相关性，并且可以用来区分这两种疾病，为临床的防治提供参考，进一步，专利技术设计了针对MAFF的高效干扰RNA，为后续治疗制剂的研制提供基础。本专利技术提供的冠心病和冠心病合并糖尿病辅助诊断靶标具有很好的临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供MAFF基因和/或其蛋白抑制剂在制备抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病制剂中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因MAFF，继而通过分子生物学方法验证了MAFF与冠心病和冠心病合并糖尿病的关系：MAFF与冠心病和冠心病合并糖尿病具有很好的相关性，可用于制备抗冠心病和冠心病合并糖尿病制剂和/或冠心病和冠心病合并糖尿病诊断制剂，具有重要的临床应用价值。进一步，抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病制剂是指可以抑制MAFF基因的表达的制剂。本领域人员熟知抑制基因的表达通常可以采用下述方法中的一种和/或几种：通过激活MAFF基因的抑制基因、激活MAFF基因的抑制基因表达的蛋白、采用RNA干扰技术抑制MAFF基因表达、激活促进MAFF基因mRNA降解的microRNA、导入促进MAFF基因编码蛋白降解的分子、抑制促进MAFF基因表达的因子及蛋白的表达。即通过激活MAFF基因的抑制基因、激活抑制MAFF基因表达的蛋白、导入抑制MAFF基因表达的siRNA、激活促进MAFFmRNA降解的microRNA、导入促进MAFF蛋白降解的分子、抑制促进MAFF基因表达的因子及蛋白的表达。RNA干扰(RNAi)是指外源性和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解，导致转录后基因沉默的现象，是一种使用小的双链RNA高效、特异地阻断体内某种特定基因的表达，促使mRNA降解，使细胞表现出特定基因缺失表型的技术。siRNA设计完成后可以采用直接合成法或者构建siRNA表达载体，制备好的siRNA可以通过磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene法、显微注射或基因枪等机械法、阳离子脂质体试剂法等途径转染细胞。进一步，所述抑制MAFF基因表达的siRNA靶点序列选自下列序列中的一种和/或几种：SEQIDNO.1、SEQIDNO.4、SEQIDNO.7。优选siRNA靶点序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.3。进一步，所述抑制MAFF基因表达的siRNA序列选自下列序列中的一种和/或几种：SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.8、SEQIDNO.9。优选siRNA序列为SEQIDNO.2、SEQIDNO.3和SEQIDNO.8、SEQIDNO.9。本专利技术的目的在于提供一种抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病制剂，抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病制剂抑制MAFF基因的表达。进一步，抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病制剂中含有抑制MAFF基因表达的siRNA。本专利技术的目的在于提供检测MAFF基因和/或其表达蛋白的制剂在制备冠心病和/或冠心病合并糖尿病诊断制剂中的应用。进一步，冠心病和/或冠心病合并糖尿病的诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测外周血中MAFF基因和/或MAFF蛋白的表达。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。用于荧光定量PCR方法检测冠心病和/或冠心病合并糖尿病中MAFF基因的产品含有一对特异性扩增MAFF基因的引物；所述的基因芯片包括与MAFF基因的核酸序列杂交的探针。进一步，冠心病和/或冠心病合并糖尿病的诊断制剂包括用免疫方法检测MAFF蛋白的表达。优选所述免疫检测方法检测冠心病和冠心病合并糖尿病中MAFF蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。酶联免疫本文档来自技高网...
【技术保护点】
MAFF基因和/或MAFF蛋白抑制剂在制备抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病制剂中的应用。
【技术特征摘要】
1.MAFF基因和/或MAFF蛋白抑制剂在制备抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病制
剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，抗冠心病和/或冠心病合并糖尿病
制剂可以采用下述方法中的一种和/或几种抑制MAFF基因的表达：通过激活
MAFF基因的抑制基因、激活抑制MAFF基因表达的蛋白、导入抑制MAFF基因
表达的siRNA、激活促进MAFFmRNA降解的microRNA、导入促进MAFF蛋白降
解的分子、抑制促进MAFF基因表达的因子及蛋白的表达。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，抑制MAFF基因表达的siRNA靶点
序列选自下列序列中的一种和/或几种：SEQIDNO.1、SEQIDNO.4、SEQID
NO.7，优选siRNA靶点序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.3。
4.检测MAFF基因和/或其表达蛋白的制剂在制备冠心病和/或冠心病合并糖尿
病诊断制剂中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，诊断制剂检测外周血中MAFF基因
和/或MAFF蛋白的表达。
6...
【专利技术属性】
技术研发人员：宫蕊，
申请(专利权)人：宫蕊，
类型：发明
国别省市：河北;13
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