一种单细胞基因表达定量分析的方法技术

本发明专利技术公开了一种单细胞基因表达定量分析的方法，包括在反应容器中加入单细胞，裂解该单细胞，在反应容器中加入反应体系，执行多位点RT，以该多位点RT获得的cDNA为模板执行多位点PCR扩增，最后以多位点PCR扩增获得的序列为底物，加入特异性引物执行特异性定量PCR来分析该单细胞中特定基因的表达量，其中在反应容器中加入的反应体系包括反应混合物、引物池、逆转录酶/聚合酶及无核酸酶去离子水，引物池中包含至多500对的多对引物，所述反应混合物包含缓冲体系、dNTP和特异性增强因子。本发明专利技术的方法能够有效的获取单个细胞中的大量基因表达及基因突变信息，实现普通RT‑qPCR无法实现的高通量和高灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体来说涉及一种单细胞基因表达定量分析的方法。
技术介绍
传统的基因表达分析方法如qPCR、Microarray、RNA-seq等，通常以群体细胞为研究对象。这类分析的结果，忽视了群体细胞中的异质性。世界上没有两个完全一样的细胞，而单个细胞是生命体基因组调控的根本单元。近几年，单细胞水平的基因表达分析技术，成为了世界范围的研究热点。这项技术正对生命科学的研究和重大疾病的诊断，产生着革命性的影响，改变着基础和临床试验的基本方式和思路。然而，现有的单细胞分析技术，如单细胞RNA-seq等，需要复杂的技术流程，和昂贵的仪器设备。市场上常见的单细胞qPCR试剂，通常只能分析单个基因在单个细胞中的表达，细胞被分析后便不复存在。
技术实现思路
为此，我们研发了一套简单、实用、灵敏的高通量单细胞基因表达定量分析系统(SSA体系)。能够一步扩增单细胞转录组中的多达500个特定基因位点。扩增后的产物可用任何荧光定量PCR系统，对已扩增的基因位点进行qPCR定量分析。具体来说，本专利技术采用了以下技术方案：一种单细胞基因表达定量分析的方法，其特征在于，所述方法包括：在反应容器中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单细胞基因表达定量分析的方法，其特征在于，所述方法包括：在反应容器中加入单细胞，裂解该单细胞，在反应容器中加入反应体系，执行多位点RT，以该多位点RT获得的cDNA为模板执行多位点PCR扩增，最后以多位点PCR扩增获得的序列为底物，加入特异性引物执行特异性定量PCR来分析该单细胞中特定基因的表达量，其中在反应容器中加入的反应体系包括反应混合物、引物池、逆转录酶/聚合酶及无核酸酶去离子水，引物池中包含至多500对的多对引物，其中所述反应混合物包括缓冲体系、dNTP和特异性增强因子。

【技术特征摘要】
1.一种单细胞基因表达定量分析的方法，其特征在于，所述方法包括：在反应容器中加入单细胞，裂解该单细胞，在反应容器中加入反应体系，执行多位点RT，以该多位点RT获得的cDNA为模板执行多位点PCR扩增，最后以多位点PCR扩增获得的序列为底物，加入特异性引物执行特异性定量PCR来分析该单细胞中特定基因的表达量，其中在反应容器中加入的反应体系包括反应混合物、引物池、逆转录酶/聚合酶及无核酸酶去离子水，引物池中包含至多500对的多对引物，其中所述反应混合物包括缓冲体系、dNTP和特异性增强因子。2.如权利要求1所述的单细胞基因表达定量分析的方法，其特征在于，执行多位点RT与执行多位点PCR所用的反应体系为向反应容器中加入的同一套反应体系，并且该两个反应是在一个步骤中同时执行。3.如权利要求1所述的单细胞基因表达定量分析的方法，其特征在于，所述反应混合物中的缓冲体系包括：50-100mMTris-HClpH8.5，10-50mMKCl，10-50mM(NH4)2SO4，2-5mMMgCl2，浓度以终反应体积计。4.如权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭国骥，赖迪文，王翠，姜蒙蒙，
申请(专利权)人：南京诺唯赞医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32