一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法技术

本发明专利技术涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明专利技术基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。

【技术实现步骤摘要】
201610136155

【技术保护点】
一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：(1)按照多个基因的相对表达量将基因相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；其中，多个基因包括看家基因和目标基因；(2)将步骤(1)中每个基因的两组逆转录引物A和B，以标准品RNA为模板分别进行A，B两组多重逆转录反应，构建标准品A，B竞争性模板；以待测样品RNA为模板进行B组多重逆转录反应，构建待测样品B竞争性模板；其中，逆转录引物A和B中引入相邻两个位点单碱基突变，逆转录后得到两种单碱基差异的cDNA；(3)利用步骤(2)中的标准品A，B竞争性模板和待测样品B竞争性模板进行三轮多重竞争性PCR；(4)混合所有步骤(3)中得到的...

【技术特征摘要】
1.一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：
(1)按照多个基因的相对表达量将基因相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓
度比例；其中，多个基因包括看家基因和目标基因；
(2)将步骤(1)中每个基因的两组逆转录引物A和B，以标准品RNA为模板分别进行A，
B两组多重逆转录反应，构建标准品A，B竞争性模板；以待测样品RNA为模板进行B组多
重逆转录反应，构建待测样品B竞争性模板；其中，逆转录引物A和B中引入相邻两个位点
单碱基突变，逆转录后得到两种单碱基差异的cDNA；
(3)利用步骤(2)中的标准品A，B竞争性模板和待测样品B竞争性模板进行三轮多重
竞争性PCR；
(4)混合所有步骤(3)中得到的第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取
数据并计算测定序列数，根据标准品梯度比例数据绘制标准曲线，校准待测样本数据，将看
家基因归一化处理后，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。
2.根据权利要求1所述的一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，其特征在于，
所述步骤(1)中多个基因为8个基因，包括5个目的基因和3个看家基因。
3.根据权利要求1所述的一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，其特征在于，
所述步骤(1)中基因的相对表达量是通过Real-TimePCR检测，根据Ct值的高低将PCR引
物分为两组。
4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖君华，胡世贤，徐福义，王茂春，陈科，白杨，陈义群，周梁梁，李凯，周宇荀，
申请(专利权)人：东华大学，上海翼和应用生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31