microRNA-126-5p在心肌损伤中的表达检测方法技术

本发明专利技术涉及microRNA-126-5p在心肌损伤中的表达检测方法，包括如下步骤：S1.从-80℃中取出已收集好的心肌组织标本，用Trizol提取组织中RNA；S2.逆转录RNA为cDNA：根据逆转录试剂配制反应液，并对反应液进行稀释，取稀释液加入到下一步的Real Time PCR反应体系中，进行定量检测；S3.RT-QPCR定量检测：配制PCR反应液，进行Real Time PCR反应，包括S3.1对DNA进行95℃、30S预变性处理；S3.2进行PCR反应，反应条件为95℃、5S,60℃、34S,进行40个循环。本发明专利技术的优点体现在：可快速进行microRNA-126-5p在心肌损伤中的表达量检测。

【技术实现步骤摘要】
201610243189

【技术保护点】
microRNA‑126‑5p在心肌损伤中的表达检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.从‑80℃中取出已收集好的心肌组织标本，用Trizol提取组织中RNA；S2.逆转录RNA为cDNA：根据逆转录试剂配制反应液，并对反应液进行稀释，取稀释液加入到下一步的Real Time PCR反应体系中，进行定量检测；S3.RT‑QPCR定量检测：配制PCR反应液，进行Real Time PCR反应，包括S3.1对DNA进行95℃、30S预变性处理；S3.2进行PCR反应，反应条件为95℃、5S,60℃、34S,进行40个循环。

【技术特征摘要】
1.microRNA-126-5p在心肌损伤中的表达检测方法，其特征在于，
包括如下步骤：
S1.从-80℃中取出已收集好的心肌组织标本，用Trizol提取组
织中RNA；
S2.逆转录RNA为cDNA：根据逆转录试剂配制反应液，并对反应
液进行稀释，取稀释液加入到下一步的RealTimePCR反应体系中，
进行定量检测；
S3.RT-QPCR定量检测：配制PCR反应液，进行RealTimePCR
反应，包括
S3.1对DNA进行95℃、30S预变性处理；
S3.2进行PCR反应，反应条件为95℃、5S,60℃、34S,进行40
个循环。
2.根据权利要求1所述的microRNA-126-5p在心肌损伤中的表达
检测方法，其特征在于，所述步骤S1中，用Trizol提取组织中RNA
步骤为：
S1.1将标本从-80℃取出后迅速放置液氮中速冻，用经过高温灭
酶的研钵研磨至成粉末状后在转移至无酶EP管中；
S1.2每个标本中加入1000体积份数的Trizol裂解组织，室温
放置2-5min；
S1.3加入200体积份数的三氯甲烷，上下倒置混匀15s，充分混
匀后静置10min，于4℃冷室中以12000rpm离心15min；
S1.4轻轻吸取上清液至另一1500体积份数的无酶EP管中，加

\t入同体积的异丙醇，上下倒置混匀15s，静置10min，于4℃冷室中
以12000rpm离心10min；
S1.5倒掉上清液，加入1000体积份数的75％的乙醇洗涤沉淀，
沉淀条件为置于4℃冷室中以7500rpm离心5min；
S1.6加入20体积份数的无酶水溶液沉淀。
3.根据权利要求2所述的microRNA-126-...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋碧梅，梁鹏飞，肖献忠，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43