GFAP特异性抗体及其在检测GFAP试剂盒中的应用制造技术

技术编号：40963765 阅读：2 留言：0更新日期：2024-04-18 20:43

本申请公开了一种GFAP特异性抗体及其在检测GFAP试剂盒中的应用，属于生物医药技术领域。本申请提供一种特异性结合GFAP的抗体或其抗原结合片段，本申请还提供编码所述抗体或抗原结合片段的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述载体的宿主细胞、抗体或抗原结合片段的制备方法和检测GFAP蛋白的试剂盒。本申请提供的检测试剂盒可以用于与GFAP相关疾病的辅助诊断。

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【技术实现步骤摘要】

本申请属于生物医药，涉及一种靶向gfap的抗体、制备方法和检测gfap的试剂盒。

技术介绍

1、gfap富含谷氨酸和天冬氨酸，在软骨细胞、成纤维细胞、肌上皮细胞、淋巴细胞、肝星形细胞少有分布，但主要存在于中枢神经系统的ast内，为ast内的主要骨架蛋白。gfap在ast内特异性表达，为其标志性蛋白，被认为是ast成熟活化的特异性标志。它在细胞核和细胞膜之间形成连接，参与细胞骨架重组、细胞黏附、维持脑内髓鞘形成和神经元的结构以及作为细胞信号参与转导通路等，还参与细胞运动迁移和细胞增殖。具有维护 ast 形态稳定、参与血脑屏障和髓鞘形成、调节突触功能等多种生物学功能。

2、多个研究表明，gfap表达水平异常与多种遗传病和精神病相关，gfap水平与脑卒中有关，脑卒中后胶质瘢痕的增生伴随着gfap表达增加。gfap水平可反映脑梗死病灶大小，血浆中gfap水平越高，梗死病灶越大，且两者呈正相关。此外，gfap水平还与神经功能损伤程度有关，血浆中gfap水平越高，神经功能损伤程度越严重。

3、目前临床上gfap最常用的检测方法为酶联免疫吸附法（elisa）和化学发光法(clia)，电化学发光法和液相色谱法。其检测方法中使用的gfap特异性抗体的性能直接决定检测的灵敏度和特异性。

4、因此，发现一种结合特异性较高的针对gfap蛋白的单克隆抗体对检测gfap表达水平具有重要的意义。

技术实现思路

1、本申请提供一种识别胶质纤维酸性蛋白的单克隆抗体及其在化学发光免

2、一方面，本申请提供一种特异性结合gfap的抗体或其抗原结合片段。

3、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含至少一种、两种、三种、四种、五种或六种选自下述的cdr： (a)包含与seq id no：1的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h1；(b)包含与seq id no：2的氨基酸序列的具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h2；(c)包含与seq id no：3的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h3；(d)包含与seq id no：4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l1；(e)包含与ras的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l2；和(f)包含与seq id no：5的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l3。

4、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含至少一种、至少两种或所有三种选自下述的vh cdr序列： (a)包含与seq id no：1的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h1；(b)包含与seq id no：2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h2；和(c)包含与seq id no：3的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h3。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含(a)包含seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h1；(b)包含seq id no：2的氨基酸序列的cdr-h2；和(c)包含seq id no：3的氨基酸序列的cdr-h3。

5、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含至少一种、至少两种或所有三种选自下述的vl cdr序列： (a)包含与seq id no：4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l1；(b)包含与ras的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l2；和(c)包含与seq id no：5的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l3。在一些实施方案中, 该抗体或抗原结合片段包含(a)包含与seq id no：4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l1；(b)包含与ras的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l2；和(c)包含与seq id no：5的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l3。

6、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含(a)包含至少一种、至少两种或所有三种选自下述的vh cdr序列的vh域： (i)包含与seq id no：1的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h1；(ii)包含与seqid no：2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-h2；(iii)包含与seq id no：3的具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的氨基酸序列的cdr-h3；和(b)包含至少一种、至少两种或所有三种选自下述的vl cdr序列的vl域：(i)包含与seq id no：4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l1；(ii)包含与ras的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l2；和(iii)包含与seq id no：5的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的cdr-l3。

7、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含(a)包含seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种特异性结合GFAP的抗体或其抗原结合片段，其重链CDRH1-CDRH3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：3所示，轻链CDRL1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，轻链CDRL2的氨基酸序列为RAS，轻链CDRL3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：如SEQ ID NO：6所示的重链可变区VH和如SEQ ID NO：7所示的轻链可变区VL。

3.一种多核苷酸，其编码权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

4.一种检测GFAP的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括靶向GFAP的第一抗体包被的磁珠，和经化学发光剂标记的靶向GFAP的第二抗体，其中，靶向GFAP的第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的一个抗体为权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，所述第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的另一个抗体的重链CDRH1-CDRH3氨基酸序列分别如SEQ ID NO：18-SEQ ID NO：20所示

6.根据权利要求5所述的试剂盒，所述第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的另一个抗体包含：如SEQ ID NO：16所示的重链可变区VH和如SEQ ID NO：17所示的轻链可变区VL。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，所述第二抗体为权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述第一抗体的重链CDRH1-CDRH3氨基酸序列分别如SEQ ID NO：18-SEQ IDNO：20所示，轻链CDRL1的氨基酸序列如SEQ ID NO：21所示，轻链CDRL2的氨基酸序列为DAS，轻链CDRL3的氨基酸序列如SEQ ID NO：22所示。

8.根据权利要求4所述的试剂盒，所述第二抗体为权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述第一抗体包含如SEQ ID NO：16所示的重链可变区VH和如SEQ ID NO：17所示的轻链可变区VL。

9.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，化学发光剂选自吖啶酯、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶中的至少一种。

10.根据权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备辅助诊断GFAP相关疾病的试剂盒中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种特异性结合gfap的抗体或其抗原结合片段，其重链cdrh1-cdrh3的氨基酸序列分别如seq id no：1-seq id no：3所示，轻链cdrl1的氨基酸序列如seq id no：4所示，轻链cdrl2的氨基酸序列为ras，轻链cdrl3的氨基酸序列如seq id no：5所示。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：如seq id no：6所示的重链可变区vh和如seq id no：7所示的轻链可变区vl。

3.一种多核苷酸，其编码权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

4.一种检测gfap的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括靶向gfap的第一抗体包被的磁珠，和经化学发光剂标记的靶向gfap的第二抗体，其中，靶向gfap的第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的一个抗体为权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，所述第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的另一个抗体的重链cdrh1-cdrh3氨基酸序列分别如seq id no：18-seq id no：20所示，轻链cdrl1的氨基酸序列如seq id no：21所示，轻链cdrl2的氨基酸序列为da...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹林，冯速，颜丹，赵驰浩，
申请(专利权)人：南京诺唯赞医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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