【技术实现步骤摘要】
本申请涉及工业微生物，尤其是涉及一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺。
技术介绍
1、阿维菌素是一种一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物，由阿维菌素链霉菌发酵产生。阿维菌素的作用机制与一般杀虫剂不同的是干扰神经生理活动，刺激释放γ-氨基丁酸，而氨基丁酸对节肢动物的神经传导有抑制作用。螨类成虫、若虫和昆虫幼虫与阿维菌素接触后即出现麻痹症状，不活动、不取食，2～4天后死亡。因不引起昆虫迅速脱水，所以阿维菌素致死作用较缓慢。阿维菌素对捕食性昆虫和寄生天敌虽有直接触杀作用，但因植物表面残留少，因此对益虫的损伤很小，因此，受到广大农药生产企业和农民的青睐。
2、目前，现有的阿维菌素的制备工艺是将发酵液经过滤，滤渣粉碎后用乙醇进行两次提取，提取液蒸干溶剂后用醋酸丁酯溶解、水洗后再进行浓缩得到膏状物，膏状物用乙醇溶解，进行两次结晶后离心干燥得到产品。该工艺操作繁琐，且去除杂质的效果不理想，导致阿维菌素的纯度较低。
技术实现思路
1、为了提高阿维菌素的纯度，本申请提供一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺。
2、第一方面，本申请提供一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，采用如下技术方案：一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，包括如下步骤：
3、s1：将阿维菌素发酵液过滤，收集滤渣，得到阿维菌素菌丝体；
4、s2：将阿维菌素菌丝体溶解，得到混合液，在逆流萃取塔中经洗脱剂洗脱，得到洗脱液；
5、s3：将洗脱液进行浓缩、干燥、重结晶，得到
6、s4：解吸吸附后的改性大孔树脂，得到混合液，将混合液重结晶，得到阿维菌素。
7、进一步的，一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，包括如下步骤：
8、s1：将阿维菌素发酵液过滤，收集滤渣，得到阿维菌素菌丝体；
9、s2：将阿维菌素菌丝体放在乙酸乙酯中，加热升温至50-60℃，搅拌溶解，得到混合液，在逆流萃取塔中经洗脱剂洗脱，混合液从逆流萃取塔的下部进入塔内，依靠密度差向逆流萃取塔的上部流动，洗脱剂从逆流萃取塔的上部进入，依靠重力向逆流萃取塔的下部流动，得到洗脱液；
10、s3：将洗脱液进行浓缩、干燥、采用质量分数为95％的乙醇溶液重结晶，得到粗品，将粗品放入95％的乙醇溶液中浸提1-2h，得到第一次浸提液；向浸提后的粗品中再次加入质量分数为95％的乙醇溶液进行第二次浸提1-2h，得到第二次浸提液，收集两次浸提液，并经改性大孔树脂吸附，得到吸附后的改性大孔树脂；
11、s4：采用甲醇解吸吸附后的改性大孔树脂，得到混合液，将混合液重结晶，得阿维菌素；其中，步骤s1中阿维菌素发酵液和乙酸乙酯的体积比为1：(1-3)；步骤s2中的混合液和洗脱剂的体积比为1:1；混合液的流速为6-8ml/min，洗脱液流速为6-8ml/min，步骤s3中洗脱液和重结晶时的乙醇溶液的体积比为1：(0.8-1.2)，每1g粗品中两次浸提用的乙醇溶液的添加量为3-5ml，粗品和改性大孔树脂的重量配比为1：(1-1.4)；步骤s4中每1g吸附后的改性大孔树脂中甲醇的添加量为2-4ml，每1g吸附后的改性大孔树脂中重结晶溶液的添加量为3-5ml。
12、通过采用上述技术方案，本申请的用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，通过各步骤之间的协同作用，提高了阿维菌素b1的收率，降低了3'-o-去甲基阿维菌素b1b杂质的含量，提高了阿维菌素的纯度，其中，阿维菌素b1的收率为93.11-99.87％，3'-o-去甲基阿维菌素b1b杂质含量为0.09-0.39％。
13、本申请采用逆流萃取技术对阿维菌素进行提纯，使洗脱效率大幅度提高，能够高效去除大极性杂质，也使提纯工艺具有操作简单、收率较高、生产成本低、可大规模工业生产等优点。
14、首先将阿维菌素发酵液过滤，能够除去阿维菌素中的一些比较大的杂质，得到阿维菌素菌丝体，再将菌丝体溶解，经逆流萃取塔洗脱萃取，由于的3'-o-去甲基阿维菌素b1b杂质在洗脱剂中的溶解度略大于在混合液中的溶解度，通过不断的混合分离过程，能够实现的3'-o-去甲基阿维菌素b1b杂质从混合液中到洗脱液相的转移，最终实现去除杂质的目的；然后将洗脱液经过首次重结晶，得到粗品，再将粗品进行浸提、改性大孔树脂吸附，大孔树脂具有许多孔径和比较大的外表面积，能够吸附浸提液中的b1，对大孔树脂进行改性后，进一步提高了吸附性，从而进一步提高了对b1的吸附率，最后经解吸、重结晶，得到阿维菌素，提高了阿维菌素的纯度。
15、作为优选：步骤s1中的发酵液在过滤时加入珍珠岩。
16、进一步的，步骤s1中的发酵液在过滤时加入珍珠岩，且每1ml阿维菌素发酵液中珍珠岩的添加量为0.3-0.5g。
17、通过采用上述技术方案，珍珠岩的表面凹凸不平，表面呈锯齿状，加入到发酵液中作为助滤剂，珍珠岩会相互咬合联接形成粗糙的滤隙，其中也有许多内联通道，小到可以阻挡微米大小的粒子，同时又具有80-90％的空隙率，保留较高的连续渗透力，可以快速过滤且捕捉到1μm以下的超微小颗粒，不仅能够使发酵液快速过滤，还能够进一步除去阿维菌素中的一些微小杂质，进一步提高了阿维菌素的纯度。
18、作为优选：步骤s2中的洗脱剂为石油醚和异丙醇的混合物，且石油醚和异丙醇的重量配比为(6-8)：1。
19、作为优选：步骤s2中洗脱温度为20-30℃。
20、通过采用上述技术方案，利用石油醚和异丙醇的混合物作为洗脱剂，且对洗脱温度进行限定，能够较优的去除3'-o-去甲基阿维菌素b1b杂质，从而提高阿维菌素的纯度。
21、作为优选：步骤s3中的改性大孔树脂采用以下方法制备：
22、a1：将大孔树脂放入乙醇溶液中，加入十六烷基三甲基溴化铵，振荡，过滤，烘干，得到固体物；
23、a2：将固体物放入水中，加入3,4-二羟基苯乙胺，混合均匀，反应，真空抽滤，洗涤滤饼，烘干，得到改性大孔树脂。
24、进一步的，步骤s3中的改性大孔树脂采用以下方法制备：
25、a1：将大孔树脂放入乙醇溶液中，加入十六烷基三甲基溴化铵，振荡22-26h，过滤，烘干，得到固体物；
26、a2：将固体物放入水中，加入3,4-二羟基苯乙胺，混合均匀，反应1-3h，真空抽滤，用水洗涤滤饼4-6次，烘干，得到改性大孔树脂；
27、其中，步骤a1中每1g大孔树脂中乙醇溶液的添加量为3-5ml，乙醇溶液的质量分数为90％，大孔树脂和十六烷基三甲基溴化铵的重量配比为1:1，步骤a2中的每1g固体物中水的添加量为2-4ml。
28、通过采用上述技术方案，利用上述制备方法对大孔树脂进行改性，首先利用十六烷基三甲基溴化铵对大孔树脂进行处理，能够有效改善大孔树脂的表面张力，初步提高了大孔树脂的吸附性；然后利用3,4-二羟基苯乙胺再对本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤S1中的发酵液在过滤时加入珍珠岩。
3.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤S2中的洗脱剂为石油醚和异丙醇的混合物，且石油醚和异丙醇的重量配比为（6-8）：1。
4.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤S2中洗脱温度为20-30℃。
5.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤S3中的改性大孔树脂采用以下方法制备：
6.根据权利要求5所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：所述大孔树脂和十六烷基三甲基溴化铵的重量配比为1：（0.8-1.2）。
7.根据权利要求5所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：所述大孔树脂和3,4-二羟基苯乙胺的重量配比为1：（0.7-0.9）。
8.根据权利要求5所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工
9.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤S4中重结晶溶液为乙酸乙酯和乙醇的混合物。
...【技术特征摘要】
1.一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤s1中的发酵液在过滤时加入珍珠岩。
3.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤s2中的洗脱剂为石油醚和异丙醇的混合物，且石油醚和异丙醇的重量配比为（6-8）：1。
4.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤s2中洗脱温度为20-30℃。
5.根据权利要求1所述的一种用于阿维菌素的逆流萃取提纯工艺，其特征在于：步骤s3中的改性大孔树脂采用以下方法制备：
6.根据权利要求5所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：白晓光，赵向丛，范兴华，
申请(专利权)人：河北万博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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