Aβ1-40特异性抗体及其在阿尔茨海默症辅助诊断试剂盒的应用制造技术

技术编号：40548751 阅读：10 留言：0更新日期：2024-03-05 19:07

本申请公开了一种Aβ1‑40特异性抗体及其在阿尔茨海默症辅助诊断试剂盒的应用，属于免疫分析技术领域，本申请提供了靶向β淀粉样蛋白1‑40的抗体、检测β淀粉样蛋白1‑40的化学发光试剂盒。本申请的抗体亲和力高、灵敏度高和生产周期明显缩短，更适合作为核心原料应用于体外诊断试剂领域。本申请公开的试剂盒可以用于与Aβ1‑40相关的疾病，例如阿尔茨海默症的辅助诊断。

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【技术实现步骤摘要】

本申请属于免疫分析，涉及一种靶向aβ1-40的抗体和其制备方法、检测aβ1-40的试剂盒及其在阿尔茨海默症辅助诊断的应用。

技术介绍

1、阿尔茨海默症(alzheimer’s disease，ad)是一种年龄相关的、进行性和不可逆的神经退行性疾病，常发病于老年阶段或老年前期。临床表现为在没有意识障碍的状态下，记忆、思维、分析判断、空间辨认、情绪、日常生活能力进行性减退并有各种神经精神症状和行为障碍。根据认知程度受损的严重程度，分为轻度、中度和重度。轻度ad患者虽然开始忘记熟悉的单词或物体的位置，但生活仍然可以自理；发展到中度，患者变得更健忘，更难以完成日常任务，并经历性格和行为的变化；重度ad患者则不能再对他们的环境做出反应，不能进行交谈，也不能控制运动或控制大便。

2、研究发现，ad的主要病理表现有脑内细胞外的老年斑(senile plaques)沉积、细胞内的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，nft)以及胆碱功能缺损等，最终造成神经元损伤和坏死并最终导致海绵脑病。其中，由β淀粉样蛋白组成的老年斑以及由磷酸化tau蛋白（phosphorylated tau，p-tau）组成的胞内神经原纤维缠结是ad主要神经病理学特征。目前已经有多种发病机制试图解释这些改变，包括aβ淀粉样蛋白级联假说、tau蛋白假说、炎症假说以及其他机制如神经血管受损学说、氧化应激和线粒体功能障碍等。

3、aβ是由app经β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有39~43个氨基酸的多肽，主要是aβ1-40

4、目前aβ1-40检测主要采用的是酶联免疫、poct、电化学发光、化学发光等技术平台，抗体制备技术主要存在两个问题。（1）抗体灵敏度不足：抗体灵敏度不足将直接影响检测试剂的灵敏度，同时降低检测的特异性和抗干扰性，并最终影响检测结果的可靠性；（2）单克隆抗体制备工艺不足：单克隆抗体的制备的批间差异会直接影响试剂盒的批间重复性上，因此需要保证重复性可控。

5、由于血液中β淀粉样蛋白的分子量小且含量及其稀少，上述问题会导致检测试剂盒的灵敏度和准确度。因此，开发一种抗β淀粉样蛋白的抗体及应用迫在眉睫。

技术实现思路

1、为了克服现有技术中存在的不足，本申请提供一种抗β淀粉样蛋白1-40（即aβ1-40）抗体anti-aβ1-40-rrmab-1，本申请采用单b细胞技术制备的兔源单克隆抗体灵敏度更高、生产周期明显缩短，利用anti-aβ1-40-rrmab-1制备的试剂盒的灵敏度高，检测限低，为与β淀粉样蛋白1-40相关的疾病的辅助诊断提供工具，更进一步地提供该抗体或试剂盒在辅助诊断阿尔茨海默症中的应用。

2、一方面，本申请提供一种特异性结合aβ1-40的抗体或其抗原结合片段。

3、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段其包含：至少包含一种、两种、三种、四种、五种或六种选自下述的cdr：(a)包含如与seq id no：1的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h1；(b)包含如与seq id no：2的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h2；(c)包含如与seq id no：3的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h3；(d)包含如与seqid no：4的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链可变域cdr-l1；(e)包含如与eas的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链链可变域cdr-l2；和(f)包含如与seq id no：5的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链可变域cdr-l3。

4、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含至少一种，至少两种或所有三种选自下述的vh cdr序列：(a)包含如与seq id no：1氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h1；(b)包含如与seq idno：2的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h2；和(c)包含如与seq id no：3的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h3。在一些实施方案中，该抗体包含(a)如与seq id no：1的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h1；(b)包含如与seq id no：2的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h2；和(c)如与seq id no：3的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变域cdr-h3。

5、在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包括至少一种，至少两种或所有三种选自下述的vl cdr序列：(a)包含如与seq id no：4的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链链可变域cdr-l1；(b)包含如与eas的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链链可变域cdr-l2；和(c)包含如与seq id no：5的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链链可变域cdr-l3。在一些实施方案中，该抗体包含(a)包含如与seq id no：4的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链链可变域cdr-l1；(b)包含如与eas的氨基酸序列具有90%、91本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种特异性结合Aβ1-40的抗体或其抗原结合片段，其重链CDRH1-CDRH3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：3所示，轻链CDRL1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，轻链CDRL2的氨基酸序列为EAS，轻链CDRL3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：如SEQ ID NO：6所示的重链可变区VH和如SEQ ID NO：7所示的轻链可变区VL。

3.一种检测β淀粉样蛋白1-40的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括靶向β淀粉样蛋白1-40的第一抗体包被的磁珠和经化学发光剂标记的靶向β淀粉样蛋白1-40的第二抗体；其中，靶向β淀粉样蛋白1-40的第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的一个抗体为权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的另一个抗体的重链CDRH1-CDRH3氨基酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：3所示，轻链CDRL1的氨基

5.根据权利要求4所述的试剂盒，所述第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的另一个抗体包含：如SEQ ID NO：15所示的重链可变区VH和如SEQ ID NO：16所示的轻链可变区VL。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，所述第二抗体为权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述第一抗体的重链CDRH1-CDRH3氨基酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：3所示，轻链CDRL1的氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示，轻链CDRL2的氨基酸序列为EAS，轻链CDRL3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

7.根据权利要求3所述的试剂盒，所述第二抗体为权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述第一抗体包含如SEQ ID NO：15所示的重链可变区VH和如SEQ ID NO：16所示的轻链可变区VL。

8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，化学发光剂选自吖啶酯、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶中的至少一种。

9.根据权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求3-8任一项所述的试剂盒在辅助诊断阿尔茨海默症中的应用。

10.一种多核苷酸，其编码权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

11.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段的制备方法，采用单B细胞抗体克隆技术制备，其特征在于，包括以下步骤：

...

【技术特征摘要】

1.一种特异性结合aβ1-40的抗体或其抗原结合片段，其重链cdrh1-cdrh3的氨基酸序列如seq id no：1-seq id no：3所示，轻链cdrl1的氨基酸序列如seq id no：4所示，轻链cdrl2的氨基酸序列为eas，轻链cdrl3的氨基酸序列如seq id no：5所示。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：如seq id no：6所示的重链可变区vh和如seq id no：7所示的轻链可变区vl。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述第一抗体和第二抗体组成的抗体对中的另一个抗体的重链cdrh1-cdrh3氨基酸序列如seq id no：1、seq id no：22和seq id no：3所示，轻链cdrl1的氨基酸序列如seq id no：23所示，轻链cdrl2的氨基酸序列为eas，轻链cdrl3的氨基酸序列如seq id no：5所示。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，所述第一抗体和第二抗体组成的抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹林，唐波，颜丹，冯速，
申请(专利权)人：南京诺唯赞医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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