腺相关病毒反向末端重复序列突变体及其应用制造技术

本发明专利技术具体涉及腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)反向末端重复序列(inverted terminal repeats，ITR)突变体及其应用。本发明专利技术设计并合成了一系列AAV的ITR的突变体，对其功能进行了验证和研究。实施例中，本发明专利技术利用这些突变体ITR替代AAV中的野生型ITR，构建了多种新型腺相关病毒质粒载体。这些含有“所设计的突变体ITR的新型腺相关病毒质粒载体”可成功地包装成重组腺相关病毒，并能有效地将外源基因转导至细胞中；与野生型ITR的AAV载体相比，这些含有“所设计的突变体ITR的重组AAV”在体内外转导中外源基因的表达水平更高，装载外源基因的容量也更大。本发明专利技术扩大了AAV载体在基因治疗及其他基因转移应用方面的应用范围。

Adeno associated virus reverse end repeat mutant and uses thereof

The present invention relates to recombinant adeno-associated virus (Adeno-associated virus, AAV) inverted terminal repeat (inverted terminal repeats, ITR) mutant and its application. A series of mutants of AAV ITR are designed and synthesized, and their functions are verified and studied. In the embodiment, the invention utilizes the mutant ITR to replace the wild type AAV in ITR, and constructs a plurality of novel adeno associated virus plasmid vectors. These contain new adeno associated virus vector \the mutant ITR was successfully packaged into recombinant adeno-associated virus, and can effectively reduce the exogenous gene transduction to cells; the AAV vector compared with wild-type ITR, expression levels of these contain\ group AAV \designed mutants of exogenous ITR transduction in vitro and in vivo gene in higher exogenous gene loading capacity is also bigger. The invention expands the application range of the AAV vector in gene therapy and other gene transfer applications.

【技术实现步骤摘要】
腺相关病毒反向末端重复序列突变体及其应用本专利技术属于生物技术专利
本专利技术具体涉及腺相关病毒(Adeno-associatedvirus，AAV)反向末端重复序列(invertedterminalrepeats，ITR)突变体及其应用。本专利技术设计并合成了一系列AAV的ITR的突变体，对其功能进行了验证和研究。实施例中，本专利技术利用这些突变体ITR替代AAV中的野生型ITR，构建了多种新型腺相关病毒质粒载体。这些含有“所设计的突变体ITR的新型腺相关病毒质粒载体”可成功地包装成重组腺相关病毒，并能有效地将外源基因转导至细胞中；与野生型ITR的AAV载体相比，这些含有“所设计的突变体ITR的重组AAV”在体内外转导中外源基因的表达水平更高，装载外源基因的容量也更大。本专利技术扩大了AAV载体在基因治疗及其他基因转移应用方面的应用范围。背景一基因治疗基因治疗是二十世纪八十年代发展起来的一种全新疾病治疗模式，它有别于传统的药物治疗，而是将产生药物的基因导入人体，以纠正缺陷基因或发挥治疗作用。与传统治疗方法相比，基因治疗的优势是明显的，它一次性给药，长期持续表达目的基因，持续产本文档来自技高网...

【技术保护点】
腺相关病毒反向末端序列突变体，其技术特征在于：腺相关病毒(Adeno‑associated virus，AAV)中的野生型反向重复序列(inverted terminal repeats，ITR)被改造成为截短的新型ITR。

【技术特征摘要】
1.腺相关病毒反向末端序列突变体，其技术特征在于：腺相关病毒(Adeno-associatedvirus，AAV)中的野生型反向重复序列(invertedterminalrepeats，ITR)被改造成为截短的新型ITR。2.依据权利要求1所述，截短的新型ITR突变体包括分别删除B/B’、B/B’+C/C’、B/B’+C/C，+1/2(A/A’)、B/B’+C/C’+A/A’(不含trs)，依次命名为ITR-ΔB(SEQIDNO：1)、ITR-ΔBC(SEQIDNO：2)、ITR-ΔBC1/2A(SEQIDNO：3)、ITR-ΔBCA(SEQIDNO：4)。3.依据权利要求2所述，截短的新型ITR突变体在删除B/B’、B/B’+C/C’的基础上，继续删除D序列及部分trs序列，成为新的突变体，并依次命名为ITR-ΔBDtrs(SEQIDNO：8)、ITR-ΔBCDtrs(SEQIDNO：9)。4.依据权利要求2所述，在AAV载体的一侧应用ITR突变体ITR-ΔB、ITR-ΔBC、ITR-ΔBC1/2A、ITR-ΔBCA，其技术特征是可以有效地包装成AAV病毒及感染细胞，不降低外源基因的表达水平。5.依据权利要求2所述，在AAV载体的两侧应用ITR突变体ITR-ΔB，其技术特征是可以有效地包装成AAV病毒及感染细胞，增加外源基因的表达水平，并增加至少可增加46bp的包装容量。6.依据权利要求2所述，在AAV载体的两侧应用删ITR突变体ITR-ΔBC，其技术特征是可以有效地包装成AAV病毒及感染细胞，增加外源基因的表达水平，并增加至少可增加68bp的包装容量。7.依据权利要求3所述，在AAV载体的两侧应用ITR突变体IT...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴小兵，董小岩，周庆璋，
申请(专利权)人：北京五加和分子医学研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11