抑制运甲状腺素蛋白表达的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及靶向运甲状腺素蛋白(TTR)基因的双链核糖核酸(dsRNA)，以及用所述dsRNA抑制TTR表达的方法。

【技术实现步骤摘要】
抑制运甲状腺素蛋白表达的组合物和方法本申请是申请日为2009年10月20日和专利技术名称为“抑制运甲状腺素蛋白表达的组合物和方法”的201410053075.6号专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及靶向运甲状腺素蛋白(TTR)基因的双链核糖核酸(dsRNA)，以及使用dsRNA抑制TTR表达的方法。相关申请的交叉引用本申请要求2008年10月20日提交的序号为61/106,956的美国临时申请、2008年11月18日提交的序号为61/115,738的美国临时申请、2009年3月2日提交的序号为61/156,670的美国临时申请、2009年6月9日提交的序号为61/185,545的美国临时申请、2009年9月15日提交的序号为61/242,783的美国临时申请和2009年9月22日提交的序号为61/244,794的美国临时申请的权益，为所有目的，所有这些申请以引用方式全部合并于此。序列表参考本申请包括以名为16126PCT_Sequence_Listing、在2009年创建、大小为346,516字节的文本文件电子提交的序列表，该序列表以引用方式合并于此。
技术介绍
运甲状腺素蛋白(TTR)是一种分泌的甲状腺激素-结合蛋白。TTR结合并转运视黄醇结合蛋白(RBP)/维生素A及血浆和脑脊液中的血清甲状腺素(T4)。正常序列TTR和变异序列TTR均引起淀粉样变性。正常序列TTR在老年人中引起心脏性淀粉样变性，称为老年性系统性淀粉样变性(SSA)(也称为老年性心脏性淀粉样变性(SCA))。SSA通常伴有许多其他器官中的微小沉淀。TTR突变加速TTR淀粉体形成过程，并且是发展临床上重要的TTR淀粉样变性(也称为ATTR(淀粉样变性-运甲状腺素蛋白型))的最重要的危险因素。已知超过85种淀粉样蛋白形成TTR变体引起系统性家族性淀粉样变性。肝脏是TTR表达的主要位置。其他重要的表达位置包括脉络丛、视网膜和胰腺。TTR淀粉样变性表现为多种形式。当更多地影响周围神经系统时，该疾病称为家族性的淀粉样变性多神经病(FAP)。当主要涉及心脏而不是神经系统时，该疾病称为家族性淀粉样变性心肌病(FAC)。第三种主要类型的TTR淀粉样变性称为软脑膜/CNS(中枢神经系统)淀粉样变性。已显示双链RNA分子(dsRNA)以称为RNA干扰(RNAi)的高度保守调节机制阻断基因表达。WO99/32619(Fire等)公开了利用长度为至少25个核苷酸的dsRNA抑制秀丽隐杆线虫(C.elegans)中的基因表达。也显示dsRNA降解其他有机体中的靶标RNA，所述其他有机体包括植物(例如参见WO99/53050,Waterhouse等；以及WO99/61631,Heifetz等)、果蝇(例如参见Yang,D.,等Curr.Biol.(2000)10:1191-1200)和哺乳动物(参见WO00/44895,Limmer；和DE10100586.5,Kreutzer等)。U.S.20070207974公开了功能性和超功能性siRNA。U.S.20090082300公开了针对TTR的反义分子。U.S.专利No.7,250,496公开了针对TTR的微RNA。专利技术简述在一个实施方式中，本专利技术提供用于抑制运甲状腺素蛋白(TTR)表达的双链核糖核酸(dsRNA)，其中所述dsRNA含有有义链和反义链，所述反义链含有与编码运甲状腺素蛋白(TTR)的mRNA的一部分互补的区域，其中所述互补区域的长度小于30个核苷酸，所述反义链含有SEQIDNO:170、SEQIDNO:450、SEQIDNO:730或SEQIDNO:1010的15或更多个连续核苷酸。在一个相关实施方式中，所述有义链含有SEQIDNO:169、SEQIDNO:449、SEQIDNO:729或SEQIDNO:1009的15或更多个连续核苷酸。在另一个相关实施方式中，所述有义链由SEQIDNO:449组成，所述反义链由SEQIDNO:450组成。在又一个相关实施方式中，所述有义链由SEQIDNO:729组成，所述反义链由SEQIDNO:730组成。在另一个相关实施方式中，所述有义链由SEQIDNO:1009组成，所述反义链由SEQIDNO:1010组成。在又一个相关实施方式中，所述dsRNA含有选自表3A、3B、4、6A、6B、7和16的有义链和选自表3A、3B、4、6A、6B、7和16的反义链。在某些实施方式中，dsRNA的反义链与编码运甲状腺素蛋白的mRNA之间的互补区域的长度是19个核苷酸。在另一个实施方式中，互补区域由SEQIDNO:169组成。在其他实施方式中，dsRNA的各链的长度是19、20、21、22、23或24个核苷酸。在又一个实施方式中，各链的长度是21个核苷酸。在某些实施方式中，用于抑制运甲状腺素蛋白表达的dsRNA不在SEQIDNO:1331的位置637上的腺嘌呤核苷酸与SEQIDNO:1331的位置638上的鸟嘌呤核苷酸之间切割TTRmRNA。在其他实施方式中，dsRNA在SEQIDNO:1331的位置636上的鸟嘌呤核苷酸与SEQIDNO:1331的位置637上的腺嘌呤核苷酸之间切割TTRmRNA。在某些实施方式中，dsRNA与SEQIDNO:1331的位置628上的鸟嘌呤核苷酸和SEQIDNO:1331的位置646上的尿嘧啶核苷酸之间的TTRmRNA退火。在其它相关实施方式中，本专利技术提供用于抑制运甲状腺素蛋白表达的上述dsRNA，其中所述dsRNA含有一个或多个修饰核苷酸。在相关实施方式中，至少一个修饰核苷酸(或多个核苷酸)选自下组：2'-O-甲基修饰核苷酸、含有5'-硫代磷酸基团的核苷酸、以及与胆固醇基衍生物或十二烷酸二癸基酰胺基相连的末端核苷酸。在另一相关实施方式中，所述修饰核苷酸选自下组：2'-脱氧-2'-氟代修饰核苷酸、2'-脱氧-修饰核苷酸、锁核苷酸、脱碱基核苷酸、2'-氨基-修饰核苷酸、2'-烷基-修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯(phosphoramidate)、和含有非天然碱基的核苷酸。在某些实施方式中，所述dsRNA含有至少一个2'-O-甲基修饰核苷酸。在其他实施方式中，用于抑制运甲状腺素蛋白表达的上述dsRNA与配体偶联，或配制在脂质制剂中。在某些实施方式中，所述脂质制剂可以是LNP制剂、LNP01制剂、XTC-SNALP制剂或SNALP制剂。在相关实施方式中，XTC-SNALP制剂如下：以比例为57.1/7.1/34.4/1.4的XTC/DPPC/胆固醇/PEG-cDMA使用2,2-二亚油基-4-二甲基氨基乙基-[1,3]-二氧戊环(2,2-Dilinoleyl-4-dimethylaminoethyl-[1,3]-dioxolane)(XTC)以及比例约为7的脂质:siRNA。在另一个相关实施方式中，所述dsRNA的有义链由SEQIDNO:1009组成且反义链由SEQIDNO:1010组成，所述dsRNA配制成如下XTC-SNALP制剂：以比例为57.1/7.1/34.4/1.4的XTC/DPPC/胆固醇/PEG-cDMA使用2,2-二亚油基-4-二甲基氨基乙基-[1,3]-二氧戊环(XTC)以及比例约为7的脂质:siRNA。或本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含用于抑制运甲状腺素蛋白(TTR)表达的双链核糖核酸(dsRNA)和脂质4‑(二甲基氨基)丁酸(6Z,9Z,28Z,31Z)‑庚三十碳‑6,9,28,31‑四烯‑19‑基酯(MC3)的脂质制剂，其中所述dsRNA含有反义链，所述反义链含有与SEQ ID NO：1331的核苷酸618‑648的15‑30个核苷酸互补的区域，和其中所述反义链与SEQ ID NO：1331的位置628上的鸟嘌呤碱基配对。

【技术特征摘要】
2008.10.20 US 61/106,956;2008.11.18 US 61/115,738;1.包含用于抑制运甲状腺素蛋白(TTR)表达的双链核糖核酸(dsRNA)和脂质4-(二甲基氨基)丁酸(6Z,9Z,28Z,31Z)-庚三十碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(MC3)的脂质制剂，其中所述dsRNA含有反义链，所述反义链含有与SEQIDNO：1331的核苷酸618-648的15-30个核苷酸互补的区域，和其中所述反义链与SEQIDNO：1331的位置628上的鸟嘌呤碱基配对。2.权利要求1的脂质制剂，其中所述脂质制剂还包含二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。3.权利要求2的脂质制剂，其中所述脂质制剂还包含胆固醇。4.权利要求3的脂质制剂，其中所述脂质制剂还包含聚乙二醇(PEG)或PEG-DMG。5.权利要求4的脂质制剂，其中所述脂质制剂具有约50％的MC3、约10％的DSPC、约38.5％的胆固醇和约1.5％的PEG-DMG的摩尔比。6.用于抑制TTR基因的表达的药物组合物，其包含权利要求1-5任一项所述的脂质制剂和药学上可接受的载体。7.抑制细胞中的TTR表达的体外方法，该方法包括：(a)使所述细胞与权利要求1-5任一项所述的脂质制剂接触；和(b)将步骤(a)中产生的细胞保持足以获得TTR基因的mRNA转录物降解...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·W·萨，G·辛克尔，R·阿尔瓦雷兹，S·米尔斯泰恩，陈庆敏，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US