具有甲状腺素5’脱碘酶活力抗体酶的制备制造技术

本发明专利技术属于具有甲状腺素５’脱碘酶活力抗体酶的制备方法。该方法以甲状腺素为半抗原，通过共价交联的方法，与牛血清白蛋白连接，制备成全抗原，采用单克隆抗体技术，制备具有甲状腺素结合能力的抗体，通过化学修饰，将甲状腺素脱碘酶的催化中心－ＳｅＨ引入到抗体的抗原结合部位，赋予其甲状腺素脱碘酶的活性。制得的抗体酶稳定性好，活力达２９０Ｕ／ｍｇＰｒ。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于具有甲状腺素5’脱碘酶活力抗体酶的制备方法。甲状腺素是人体的一种必须激素，甲状腺素与临床上许多疾病相关。人体内的甲状腺素以两种活性形式存在3，5，3’，5’-四碘甲状腺素原氨酸(T4)和3，5，3’-三碘甲状腺素原氨酸(T3)。T3的生物学活性是T4的8倍，是体内活性甲状腺素的主要形式。所有外周组织和血液中的T4都由甲状腺合成，T3有85％以上来自于外周组织的甲状腺素5’脱碘酶的催化产物。可见甲状腺素5’脱碘酶对于甲状腺素发挥生理功能具有重要意义。目前，人们共发现三种甲状腺素脱碘酶，其中，I型甲状腺素脱碘酶(IT45’D)是一种含硒的膜蛋白，广泛存在于肝、肾、甲状腺、肌肉等部位，大部分T3都由这种酶催化产生。1990年，有报道采用凝胶电泳法从相关组织中分离到了IT45’D。采用放射性同位素Se75标记，发现IT45’D是一种含硒酶。1991年Berry等(Nature，1991，349438-440)在蟾蜍卵母细胞中运用克隆表达技术从鼠肝中分离到了IT45’D的互补DNA，其中含有一个TGA密码子来编码硒代半胱氨酸。IT45’D中的硒以硒代半广氨酸形式存在，并且是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有甲状腺素５’脱碘酶活力抗体酶的制备方法，其特征在于采用以下步骤完成：Ａ．全抗原的制备将Ｔ４与牛血清白蛋白以３０－５０∶１（摩尔比）的比例溶解于ｐＨ８－１１的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中，其中，Ｔ４浓度为１－５ｍｇ／ｍｌ搅拌，逐渐 滴加戊二醛，反应１０－２４小时，加入甘氨酸终止反应，除盐，冻干；Ｂ．单克隆抗体的制备ａ．免疫小鼠将抗原１－３ｍｇ／ｍｌ与福氏完全佐剂１∶１混合，摇匀，每只Ｂａｂ／ｃ小鼠注射１００－３００μｌ，两周后进行二次免疫，第四到十周每隔两 周以福氏不完全佐剂免疫，用ＥＬＩＳＡ检测抗体；ｂ．融合及抗体制备拉颈法处死小鼠，取脾脏，无菌条件下在...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵大庆，陈默，廉革伟，林凤，丁兰，刘仔，倪嘉缵，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]