乙肝病毒前S*抗体酶免测定试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种乙肝病毒前Ｓ↓［１］抗体酶免测定试剂盒及制备方法。本发明专利技术的试剂在乙肝血清中检测前Ｓ↓［１］抗体的阳性率较高，检出的前Ｓ↓［１］抗体与乙肝病情的恢复一致，对乙肝疾病能否及时康复有早期预示作用。试剂的特异性高，在乙肝检测中有较高应用价值。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物技术试剂，具体涉及一种乙肝病毒前S1抗体酶免测定试剂盒及制备方法。乙型肝炎病毒(HBV)的DNA序列分析表明HBV基因的S区由S、前S1、前S2所组成，其编码的蛋白有主要蛋白(HBsAg)，中分子蛋白(HBsAg加前S2)和大分子蛋白(HBsAg，前S2和前S1)，因前S1蛋白存在于大分子蛋白中，故感染血液中的前S1蛋白全部存在于HBsAg阳性血清中，前S1蛋白由108个或119个氨基酸组成，其长度因亚型而异，ayw亚型为108aa，adw亚型有119个aa，前S1蛋白位于病毒颗粒的表面，因而它具有高度的免疫原性。Milich以大分子蛋白免疫小鼠，然后做前S1各段合成肽的T细胞增殖试验，实验显示，前S1肽链的P1-21，12-32和94-117三段多肽可以引起的T细胞明显增殖，说明该三段氨基酸序列具有免疫原性，是免疫决定簇区，而P32-53及P74-89肽段不能在体外使T细胞增殖，提示该二段序列无免疫原性。对P1-21及12-32肽段的进一步研究，在用P12-32肽段免疫小鼠后，再用1-21和12-32可以引起相同的T细胞增殖，提示这二肽段的共同序列即P12-21是重要的抗原决定簇区，起了主要的激活作用。用更短肽链的实验结果又显示，P12-19的免疫活性只及P12-21的1.6％，P14-21的活性只及P12-21的0.4％，也即去掉P12-21氨基酸端或羧基端的氨基酸，就极度影响了P12-21的免疫原性，证实了引起T细胞对免疫原性识别的最小氨基酸数为10肽。在P12-21肽中，分别替代其中的第14，18和19位，免疫原性分别只相当于肽链的66.6％，0.7％和1.6％，说明P12-21的10肽中，第18和19位氨基酸对免疫原性最为重要。这对合成前S1多肽抗原有较高参考价值。而Alberti用P21-32，32-47及94-117三段前S1多肽均能检测到急性乙肝患者血清中的相应抗体，说明P32-53并非没有免疫原性，并且从前S1抗体的动力学态势分析，抗P32-47的前S1抗体具有更为重要的作用。多数急性乙肝患者早期先出现P32-47抗体，然后出现P21-32和P94-117抗体，有的患者只出现P32-47抗体，而另二种抗体始终阴性。在恢复顺利的急性乙肝中，P94-117抗体均与P32-47抗体同时存在，没有单独P94-117抗体阳性的情况，而在慢性乙肝中，往往就只有P94-117抗体而无另二种抗体，由此可见，P32-47及P21-32抗体多数出现于预后较好的急性乙肝中，而单独P94-117抗体阳性一般为慢性肝炎。黑猩猩的感染实验证明，血清前S1抗原蛋白最早可在感染后的第5周从电泳带上检测到，至第8周血清中出现抗前S1抗体，18周时前S1抗原消失，在直至36周的整个观察期间，前S1抗体始终阳性，而抗HBs直至33周才出现，因为乙肝的潜伏期为6周-6个月，所以大多数急性乙肝发病时，抗前S1抗体就可呈现阳性结果，它是乙肝早期诊断的可靠指标。前S1抗体一般出现于急性自限性乙肝中，而慢性化发展的急性乙肝及HBsAg长期携带者，该抗体的检出率都很低。Theilmanm报道入院时血清中前S1抗体阳性的4例急性乙肝均顺利康复，而6例前S1抗体阴性的未能康复而转为慢性，10例HBsAg携带者该抗体全部阴性。说明血清中出现前S1抗体是病情预后良好的早期信号。Budkowska也指出急性乙肝顺利康复的患者均有前S1抗体，而急性乙肝慢性化以及前S1抗原持续阳性的慢性肝炎中都检测不到前S1抗体。前S1抗体促进疾病康复的机理可能是前S1抗体发挥了PHSA的竞争抑制作用，抗体封闭了前S1抗原和肝细胞上的PHSA受体，使PHSA不能发挥“桥连”作用，从而阻断了HBV进入肝细胞的途径。另外，前S1抗体特异性地与HBV上前S1抗原结合后，通过其它免疫途径发挥了清除病毒的作用，因此，前S1抗体是体内的中和性抗体。近十多年来，众多国外研究报告显示，乙肝病毒的前S1抗体是中和性抗体，具有阻止病毒复制和清除病毒的作用，它是乙肝疾病呈现恢复趋向的最早期信号，在了解病情和判断预后方面较二对半项目更为直接和及时。因此，它是乙肝疾病的早期恢复指标，抗前S1抗体几乎与HBsAg及抗HBc同时出现于血清中，所以它又是乙肝感染的早期诊断指标。据Alberti A，Caralletto D，Chemello L.et alFine specificity of humanantibody response to the preS1 domain of hepatitis B Virus.Hepatology1990；12(2)199-203.和TheilmannL，Klinkert MQ，Gmelin K，et alDetection ofantibodies against pre-S1 proteins in sera of patients with hepatitis Bvirus(HBV)infection，J hepato 1987；422-28等报道，急性乙肝患者入院时，多数患者能同时检测到前S1抗原、前S1抗体、HBsAg、HBV-DNA及抗HBc等指标的阳性结果，虽然从动物实验研究中，了解到在感染的潜伏期中间，前S1抗原及HBsAg等指标要比前S1抗体提早2-4周出现于血液中，但这并不影响它作为临床早期诊断指标的作用。乙肝二对半指标中，只有抗HBs是保护性抗体，它在血液中的阳转表示病毒的清除，疾病的康复，但抗HBs一般要在HBsAg转阴后才出现，它出现的时间较晚，对一般急性乙肝患者，抗HBs的阳性出现于发病后的4-5个月，因此它就根本无早期预后作用。而抗前S1抗体多数在发病后数日的血清中就呈阳性结果，它可与抗HBc，HBsAg，HBeAg等早期诊断指标同时存在于血清中。抗HBc虽也在HBV后较早出现，但它只是一项感染性指标，抗HBc并不是中和抗体，对清除病毒和病情预后并无多大作用。而与抗HBc同时早期出现的抗前S1抗体却在这方面有明显的指示作用，对该抗体多方面的研究都显示了抗前S1抗体有阻止乙肝病毒进入肝细胞繁殖及清除病毒的作用，它在血清中的阳转预示HBsAg及前S1抗原等感染因子均可顺利转阴，疾病可以较早康复，它的早期预后作用在乙肝所有指标中是独一无二的，因此它在乙肝的实验室诊断中有很大的应用价值。本专利技术的目的在于研制一种乙肝病毒前S1抗体酶免测定试剂盒。本专利技术提供了一种乙肝病毒前S1抗体酶免测定试剂盒，该试剂盒是由预包被反应条、酶结合物工作液、阳性对照物、阴性对照物、样品稀释液、浓洗涤液、显色剂A、显色剂B和终止液组成的。本专利技术的剂剂盒在第二军医大学第一附属医院临床使用结果如下受上海新新医学生物工程公司委托对其生产的乙肝抗前S1酶联试剂盒进行了临床使用考核，病例血清样品来自于本院传染科和检验科，实验操作严格按说明书进行，临床使用结果和评价如下1、乙型肝炎不同阶段中乙肝前S1抗体阳性率表1乙肝前S1抗体在乙型肝炎中的阳性率血清标志 血清标本 抗前S1阳性 抗前S1阴性 阳性率(％)HbsAg(+)抗HBc(+) 254 107 147 42.1抗HBs(-)HbsAg(-)抗HBc(+) 1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙肝病毒前Ｓ↓［１］抗体酶免测定试剂盒，其特征在于该试剂盒是由预包被反应条，酶结合物工作液、阳性对照物、阴性对照物、样品稀释液、浓洗涤液、显色剂Ａ、显色剂Ｂ和终止液组成的。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杜凤鸣，
申请(专利权)人：上海新新医学生物工程公司，杜凤鸣，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]