针对iNKT的人类化抗体制造技术

本发明专利技术提供治疗以抑制免疫反应的方法。所述方法包含向需要治疗的个体以有效抑制所述个体的iNKT细胞功能的量投与选择性结合iNKT细胞的裸阻断抗体。还提供组合物，其包含选择性结合iNKT细胞的经分离人类化抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对iNKT的人类化抗体相关申请案本申请案根据35U.S.C.§119(e)主张2011年10月27日申请的美国临时申请案第61/552,337号的权益，所述申请案的内容以全文引用的方式并入本文中。
技术介绍
哮喘是一种世界范围内相对常见的疾病。在2009年，疾病控制中心(CentersforDiseaseControl)估计在美国哮喘的发病率是8.2％的人口或2460万人。世界范围内哮喘的负担较大，估计发病率超过3亿例，并且预期此数目到2025年会增长超过1亿。哮喘是我国代价最高的疾病之一。估计每年美国关于归因于哮喘的健康和生产力丧失的花费超过200亿美元。在2006年和2007年，每年在美国有约3500例哮喘相关的死亡并且在世界范围内有超过250,000例死亡。哮喘严重程度根据症状或“发作”的频率和严重程度、肺功能测试的结果和获得症状控制所需的药物水平来分类(NIH，“哮喘诊断与处理指南(GuidelinesfortheDiagnosisandManagementofAsthma),2007”)。约30％的哮喘患者具有轻度间歇性哮喘症状，肺功能测试正常。另外30％的哮喘患者具有轻度持续性症状(每周有两次或两次以上发作)，肺功能测试正常。40％的哮喘患者具有中度到中重度持续性每天或连续哮喘症状，肺功能测试异常。据估计，超过80％的哮喘相关的卫生保健成本归因于20％的患有中度到中重度持续性和/或较轻度难治性哮喘的个体。因此，难治性哮喘保持为未得到充分满足的医学需要。已经实行介导免疫系统作为一种治疗哮喘以及多种包括(但不限于)以下的其它疾病和病症的合乎需要的方法：自体免疫疾病、感染、过敏、发炎性病况、自然流产、怀孕、移植物抗宿主疾病和癌症。T细胞已经成为所述介导的标靶。T细胞是参与多种免疫系统功能的淋巴细胞。T细胞的子集(例如辅助T细胞、细胞毒性T细胞和抑制性T细胞)介导不同免疫功能。自然杀伤T(NKT)细胞是与常规T细胞和自然杀伤(NK)细胞共有表面标记和功能特征的T淋巴细胞子集。不同于T细胞，其识别糖脂抗原而非肽抗原。NKT细胞可以分成三个子集：1型，其表达不变T细胞受体并且是CD1d限制的(iNKT)；2型(NKT)，其表达变化的T细胞受体但是CD1d限制的；和3型，其表达变化的T细胞受体并且不是CD1d限制的(NKT样)。1型iNKT细胞表达独特地重排的、高度保守的半不变TCR-α链(人类中的Vα24-Jα18和小鼠中的Vα14-Jα18)，所述链优先与特异性TCR-β链(人类中的Vβ11或小鼠中的Vβ8.2、Vβ7和Vβ2)配对。其在整个动物系统发生中是高度保守的。这与大多数T细胞亚群形成对照，所述亚群对于其T细胞受体(TCR)具有多样的序列。iNKT细胞的不变TCR与抗原呈现细胞表面上的MHC-I样蛋白CD1d上呈现的糖脂抗原反应。iNKT细胞的标志是其快速产生包括IL-4和IFNγ的细胞因子混合物的能力，所述细胞因子分别是否则由T辅助型I(Th1)和Th2细胞产生的特征细胞因子。不变NKT细胞有时被称为“经典NKT细胞”。iNKT细胞的一独特特征在于，其识别CD1d上呈现的海绵衍生的糖脂α-半乳糖基-神经酰胺(α-GalCer)。这已经被用以通过流动式细胞测量术通过使用负载α-GalCer的CD1d四聚体监测小鼠、非人类灵长类动物(NHP)和人类iNKT细胞。结合到人类iTCR的不变环的小鼠单克隆抗体6B11也已经被用以监测人类和NHPiNKT细胞。iNKT细胞代表了人类和非人类周边血液中的总T细胞群体中的极小子集。其相对数目在正常个体之间可以有超过一百倍的变化，代表着人类中CD3+细胞的从0.01％到超过1％的任何值，其中范围的下限代表大多数人类。常规T细胞需要暴露于外来抗原以便成熟并且获取记忆表型。通过病理性事件或通过药物介入而耗尽的无性系扩增的常规记忆T细胞群体仅可以当具有相同重排的TCR的新胸腺移出细胞暴露于与初始损伤类似或相同的外来或病原性抗原时恢复。T细胞的所述耗尽可以在既定个体的免疫组库内产生“孔洞”。不同于常规T细胞，iNKT细胞具有连续再生能力。在人类中，研究骨髓移植之后的iNKT细胞再生。在用于消融疗法的周边血液干细胞移植救护之后一个月已经观测到iNKT细胞数目完全恢复到基线。因此，iNKT细胞耗尽疗法可能比耗尽其它T细胞的风险更小。类似于其它T细胞，iNKT细胞在胸腺中发育。对小鼠的研究显示，不同于常规T细胞，iNKT细胞在其自然发育期间通过识别CD1d分子上呈现的迄今未知的内源性抗原并且不需要事先暴露于外来或病原性抗原而获取记忆表型。归因于其记忆表型，其可以在周边免疫区室内响应于暴露于由抗原呈现细胞(APC)呈现的外来或内源性糖脂抗原而快速活化并且扩增。iNKT细胞共有免疫系统的先天性和应变性组的特征，并且因此通过调节T和B细胞反应以及先天性免疫性而起独特作用(1)。iNKT细胞是快速出现的，这是先天性免疫系统的特征。其还展示应变性免疫系统的特征，因为其共有其它T细胞的性质，例如抗原特异性反应。因此，其充当两种系统之间的桥梁，其中其可以起促发炎和免疫调节作用以分别增强或减弱出现免疫反应(2)。iNKT细胞的性质已经引起对操纵iNKT细胞功能作为疾病治疗的研究(3、4、5、6)。众多研究已经显示，iNKT细胞可以调节Th1与Th2反应之间的平衡。假定这些细胞在对病原体的反应、对癌症的免疫监督和对自体免疫性的调节中起一定作用。对于大多数这些病况来说，iNKT细胞缺陷仅已经得到部分表征，并且在一些情况下，已经通过矛盾研究而有争议。人类研究尤其受两种重要限制因素约束。首先，大多数人类研究已经使用鉴别iNKT细胞的次最优方法。第二，大多数人类研究仅是定性的，并且存在极少关于调节iNKT细胞数目、比率或功能的功能结果的人类数据。iNKT细胞功能关于其对哮喘的潜在作用已经受到大量关注。通过基因消融iNKT细胞或通过药物阻断来抑制iNKT细胞功能阻断了小鼠的气道高反应性(AHR)出现(7、8)。这在卵白蛋白和臭氧诱发的AHR的情况下都可见(9)。iNKT细胞在暴露于卵白蛋白或臭氧之后在野生型小鼠的肺中有所增加。在通过基因剔除编码不变T细胞受体的一部分的基因而基因不含iNKT细胞功能的小鼠中，授受性转移iNKT细胞恢复了过敏原诱发AHR的能力(9)。相反地，用强力iNKT细胞激动剂α-GalCer活化气道中的iNKT细胞在小鼠和非人类灵长类动物中都诱发了不可与AHR区分的反应(10、11)。基因不含iNKT细胞的小鼠还对在COPD的慢性仙台病毒(Sendaivirus)模型中的气道中出现病理性变化具有抗性(12)。类似于来自鼠类模型的结果，在人类中，iNKT细胞不存在于健康个体的肺中，但其存在于患有轻度到中度哮喘的患者的肺中，并且其在过敏原或病毒挑战之后进一步增加(3、13、14)。iNKT细胞水平在患有哮喘的患者的BAL液与周边血液之间似乎存在极少或不存在相关性。现有技术尚未确定iNKT细胞是否与哮喘有因果关联或是哮喘的结果，或旨在阻断iNKT细胞功能的疗法是否可以是用于哮喘的治疗。识别人类不变T细胞受体的小鼠单克隆抗体6B11是美国公开申请案第2007/0160600本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗以抑制免疫反应的方法，其包含向需要治疗的个体以有效抑制所述个体的iNKT细胞功能的量投与选择性结合iNKT细胞的裸阻断抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.10.27 US 61/552,3371.一种组合物，其包含选择性结合iNKT细胞上的表位的经分离人类化抗体，其中(i)所述抗体具有具备SEQIDNo.27的序列的重链和具备SEQIDNo.29的序列的轻链，或者(ii)所述抗体具有具备SEQIDNo.28的序列的重链和具备SEQIDNo.29的序列的轻链。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体具有具备SEQIDNo.27的序列的重链和...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿列姆塞盖德·特鲁内，弗兰西斯·约瑟夫·卡尔，蒂莫西·戴维·琼斯，詹姆斯·P·格雷格森，
申请(专利权)人：NKT治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US