本发明专利技术涉及一种甲基苯丙胺成瘾的检测方法与补体H因子(Complement?factor，CFH)用作甲基苯丙胺(methamphetamine，METH)成瘾相关人群的基因表达产物中的应用，发明专利技术人通过大量的实验发现，CFH和α1酸性糖蛋白2(Alpha-1-acid?glycoprotein?2)，转甲状腺素蛋白(Transthyretin)，载脂蛋白L1(Apolipoprotein?L1)，和结合珠蛋白(Haptoglobin)在METH成瘾患者血清中稳定表达上调，可以作为METH成瘾相关的基因表达产物。采用免疫印迹法或酶联免疫试剂盒定量检测人血清中的CFH蛋白含量，并将人血清中CFH蛋白含量表达上调用作鉴定METH成瘾的方法中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白质的检测方法，具体涉及甲基苯丙胺成瘾的检测方法与补体H因子(Complement factor, CFH)用作甲基苯丙胺(methamphetamine, METH)成瘾相关人群的基因表达产物中的应用。
技术介绍
药物滥用和药物依赖既是全球普遍存在的公共卫生问题，又是危害严重的社会问题。药物依赖性是指由药物与机体相互作用所造成的一种精神状态，有时也包括身体状态，表现出一种强迫性要求连续或定期应用该药的行为和其它反应，目的是要去感受它的精神效应，或是为了避免停药引起的不适，包括精神依赖性和身体依赖性两方面。甲基苯丙胺(Methamphetamine, METH)俗称冰毒，属于苯丙胺类兴奋剂(amphetamine-typestimulants, ATS),其结构与苯丙胺和MDMA(摇头丸)近似,是我国规定管制的精神药品。 METH是苯丙胺类毒品的代表，曾是一种处方药，用于治疗注意力不足过动症(ADHD)、嗜睡症、极端的肥胖症，后发现它具有很强的耐受性和成瘾性，使用后会产生强烈快感或兴奋，长期使用可产生身体依赖和心理依赖，在停药后出现严重的戒断症状。METH具有药物依赖、中枢兴奋、致幻、食欲抑制及拟交感能等效应，并能够对机体各器官产生一定损伤。滥用者会处于强烈兴奋状态，可以使人有能力增加、觉醒程度提高的感觉，表现出精神振奋、清醒、机敏、思维活跃、情绪高涨、注意力集中、工作能力(特别是技巧性工作能力)提高，而药效过后会出现反应迟钝，疲劳乏力，头痛头昏，心悸气怠，焦躁激动等现象。大剂量使用METH可导致急性中毒，长期滥用可造成慢性中毒，出现被害妄想、幻觉等苯丙胺精神病，心悸、心律不齐等心血管系统表现，肠胃功能障碍、脑血管病变、窒息、肺水肿、肺衰竭、肾衰竭等，严重的还可产生惊厥、脑出血、昏迷致死等。同时，静脉注射方式滥用者可引起各种感染合并症，包括肝炎、败血症和爱滋病等。此外，METH的耐受性随长期使用而增加，长期滥用者为了达到初期使用时的欣快效应，竟可将剂量增加60倍以上，这极易引起急性中毒，可造成惊闕、昏迷甚至死亡。METH由于其强烈的兴奋作用和相对易于制作的特性，使它刚应用于临床不久就开始被滥用，成为一种高度心理成瘾的新型毒品。METH见效快、药效维持时间长，第一次使用便可能会上瘾，被称为“毒品之王”。现如今，METH的滥用和成瘾已呈现全球流行趋势。根据中国国家禁毒委员会办公室发布的《2011年中国禁毒报告》，截至2010年底，我国登记在册的吸毒人员154. 5万人，其中，以METH为首的滥用合成毒品的问题较往年更加突出，仅查获登记的就有43. 2万名，新查获11. 94万名，多数是25岁以下的青年。根据2009年国家药物滥用监测年度报告，METH是新发生药物滥用者主要滥用物质，与2005年比，METH滥用比例增长31.4%。根据联合国毒品与犯罪署发布的《2011年世界毒品报告》，2009-2010年度，苯丙胺类兴奋剂中苯丙胺类物质滥用的流行率为全球年龄介于15-64岁的人口的0. 8% ±0. 5%，这个数据高于阿片类物质(0. 65% ±0. 15% )和可卡因(0. 4% ±0. 1% )的滥用率，在所有种类毒品中的流行率仅次于大麻(3.65% ±0.85%)的滥用。该数据表明，2009年，世界范围内约有一千四百万到五千七百万的15-64岁人口滥用苯丙胺类物质，而大部分滥用人群分布在亚洲地区。METH是全球范围内最为广泛生产的一种苯丙胺类兴奋齐U，近年来在人群中的使用呈现明显上升趋势。我国METH的消费已居所有非法药品交易的前三位。由于其危害性已经逐渐超过了海洛因等阿片类毒品，成为21世纪最危险的新型毒品之一，METH的滥用和成瘾已经成为中国乃至全球亟待解决的公共卫生问题。对METH滥用和成瘾的诊断通常采用国际通用的国际疾病分类第十版(International Classification of Diseases, I CD-10)和美国精神病学协会(AmericanPsychiatric Association, APA) 2000年修订的第四版精神病诊断与统计手册(TheDiagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-IV,DSM-IV)中的苯丙胺类药物依赖诊断标准。这两种诊断标准均主要从用药行为着眼，判断目标个体或人群是否不当、使用METH或对此种药品产生了依赖，但由于用药行为的隐蔽性以及苯丙胺类物质的戒断反应不甚明显，目前还缺乏有效手段准确甄别个体是否对METH产生了依赖性，对刑事鉴定及临床诊断带来了难题。生物标记物是客观衡量和评估正常生理过程、病理过程或在治疗干预中对药物反应的一种特定指示物，与METH成瘾相关的稳定生物标记物，可以为其滥用情况的评估提供有效依据。目前，还未见补体因子H(Complement factor H，CFH)与METH之间存在关系的任何报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供补体H因子(Complement factor, CFH)用作甲基苯丙胺(methamphetamine, METH)成瘾相关人群的基因表达产物中的应用。本专利技术的目的在于提供人血清中CFH含量表达上调用于鉴定或确认METH成瘾相关人群的方法中的应用，优选所述的人血清中CFH含量选自CFH绝对含量、CFH相对含量的任一种或其组合，更优选所述的CHl相对含量为血清中CFH相对于血清总蛋白的质量百分比。本专利技术的优选技术方案中，所述方法通过检测人血清中的CFH蛋白含量，并将人血清中CFH蛋白含量表达上调用作鉴定METH成瘾的方法中的应用。本专利技术的另一目的在于提供免疫印迹法用于定量检测人血清中CFH蛋白含量的方法中的应用。本专利技术的目的在于提供一种用于双向电泳(2-DE)分析的血清样品的预处理方法，包括下述步骤I)静脉穿刺，分别抽取METH成瘾患者组和正常对照组的血液样品；2)将抽取的待测血液样品置于4°C下，3，OOOg转速离心lOmin，分离血清，再用白蛋白/IgG去除试剂盒去除血清中的白蛋白和IgG，即得。血清中高丰度的白蛋白和IgG会影响其他低丰度蛋白在双向电泳(2-DE)分析图谱中的检测，而低丰度蛋白(如CFH) —般为生物样本中重要的生物标记物或药物靶点，并与特定的病生理机制相关。本专利技术采用白蛋白/IgG去除试剂盒对血清样品进行去除白蛋白和IgG的预处理后，再进行双向电泳分析，寻找和分析差异表达蛋白后，使用生物质谱技术对差异表达蛋白进行结构确认，结果显示，CFH和a I酸性糖蛋白2 (Alpha-l-acid glycoprotein2),转甲状腺素蛋白(Transthyretin),载脂蛋白LI (Apolipoprotein LI),和结合珠蛋白(Haptoglobin)在METH成瘾患者血清中稳定表达上调，可以作为METH成瘾相关的基因表达产物。CFH为METH成瘾患者血清中的差异表达蛋白之一。再利用酶联免疫吸附法和/或免疫印迹法检测待测血清中的CFH含量，再次验证了 METH成瘾患者血清以及METH成瘾条件性位置偏爱模型大鼠血清和成瘾相关脑区(海马、腹侧被盖区)中的CHl水平表达稳定上调，从而确认本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.补体H 因子(Complement factor, CFH)用作甲基苯丙胺(methamphetamine, METH)成瘾相关人群的基因表达产物中的应用。2.人血清中Cm含量表达上调用于鉴定或确认METH成瘾相关人群的方法中的应用，优选所述的人血清中CFH含量选自CFH绝对含量、CFH相对含量的任一种或其组合，更优选所述的CFH相对含量为血清中CFH相对于血清总蛋白的质量百分比。3.免疫印迹法用于定量检测人血清中CFH蛋白含量的方法中的应用。4.一种用于双向电泳(2-DE)分析的血清样品的预处理方法，包括下述步骤 1)静脉穿刺，分别抽取METH成瘾患者组和正常对照组的血液样品； 2)将抽取的待测血液样品置于4°C下，3，OOOg转速离心lOmin，分离血清，再用白蛋白/IgG去除试剂盒去除血清中的白蛋白和IgG，即得。5.一种血清差异表达蛋白的鉴定方法，包括下述步骤 1)分别抽取METH成瘾患者组和正常对照组的血清样品，将其使用白蛋白/IgG去除试剂盒去除血清中的白蛋白和IgG，获得待测血清样品； 2)将待测血清样品采用双向电泳进行分离，包括第一向等电聚焦电泳和第二向SDS-聚丙烯酰胺电泳，得到蛋白分离凝胶； 3)将步骤2)得到的蛋白分离凝胶进行硝酸银染色，得到METH成瘾患者组和正常对照组的血清样品的双向电泳图谱； 4)将步骤3)中得到的双向电泳图谱进行比对，选取变化稳定(重复3次及以上)、分离度较好、易切取的蛋白质斑点，斑点切下后，经过脱色和酶切后，进行生物质谱分析，得到蛋白质斑点的肽质量指纹图谱； 5)将步骤4)得到的蛋白质斑点的肽质量指纹图谱在SwissProt蛋白序列数据库中检索，得到差异表达蛋白质的名称及其相关信息。这些差异高表达的蛋白是补体因子 H(Complement factor H, CFH), a I 酸性糖蛋白 2 (Alpha-l-acid glycoprotein 2),转甲状腺素蛋白(Transthyretin),载脂蛋白LI (Apolipoprotein LI),和结合珠蛋白(Haptoglobin)。6.根据权利要求5所述的鉴定方法，所述的对照样品包括空白调零对照、空白对照、标准对照的任一种，其中，空白调零对照为加入过氧化氢-四甲基联苯胺底物及终止溶液的对照样品，用于检测时调零OD值；空白对照为加入稀释液的对照样品；标准对照为加入已知浓度的CFH蛋白标...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵欣，史琬璐，蒲小平，刘志民，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：
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