一种长链非编码RNAlncRNA‑ADDNR、干扰序列及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种长链非编码RNA lncRNA‑ADDNR、干扰序列及其应用，所述的lncRNA‑ADDNR的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术首先通过RT‑PCR证实了lncRNA‑ADDNR的客观存在，其次利用荧光定量PCR证实lncRNA‑ADDNR在前脂肪细胞中的表达量明显高于成熟脂肪细胞。本发明专利技术针对lncRNA‑ADDNR序列，合成抑制其表达的siRNA序列，将其转染到前脂肪细胞，人为抑制前脂肪细胞中lncRNA‑ADDNR的表达。结果证实，siRNA序列的转染可以显著降低lncRNA‑ADDNR的表达量，lncRNA‑ADDNR的表达量的降低，能够促进前脂肪细胞促分化相关因子的表达，最终达到促进脂肪沉积的作用，表明该lncRNA‑ADDNR在脂质代谢中发挥重要作用，可以作为治疗肥胖的新的分子标记和药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR、干扰序列及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种长链非编码RNA及其应用，具体涉及一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR、干扰序列si-lncRNA-ADDNR及其应用。
技术介绍
肥胖症是一种由多种因素引起的慢性代谢性疾病，以体内脂肪细胞的体积和细胞数增加致体脂占体重的百分比异常增高并在某些局部过多沉积脂肪为特点。肥胖不仅对人的生活、工作带来很多不便，同时大量肥胖相关疾病严重影响人类健康，例如冠心病、高血压、动脉粥样硬化、糖尿病，甚至乳腺癌、子宫内膜癌等。随着生活水平的提高，生活便利化和智能化使得人们的活动量越来越少，再加上饮食摄入高能量食物增加，肥胖患者所占比例逐年升高，同时患者年龄逐渐降低。所以研究脂肪代谢的分子机制，为治疗肥胖疾病寻找有效的分子靶点具有重要意义。长链非编码RNA(longnon-codingRNA)是一类只转录不翻译的RNA分子，近期研究证明其参与细胞分化、凋亡、免疫应答、生长发育、糖脂代谢、炎症以及肿瘤等多种生命过程。NR2F2(nuclearreceptorsubfamily2,groupF,member2)基因又叫COUP-TFII(chickenovalbuminupstreampromotertranscriptionfactors)，在哺乳动物中高度保守，在发育过程中具有重要调控作用，NR2F2通过调控成脂分化关键基因PPARalpha参与脂质代谢。通过检索Ensemble数据库(http://asia.ensembl.org/index.html)，发现一个lncRNA(命名为lncRNA-ADDNR)与该基因部分区域反向互补，且互补区域包含RNA聚合酶II等多个蛋白结合位点，提示该lncRNA具有重要作用，但是目前尚无关于该lncRNA功能的报道。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种显著抑制成脂分化的长链非编码RNAlncRNA-ADDNR及其应用。本专利技术的长链非编码RNAlncRNA-ADDNR核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，是与脂肪分化密切相关的长链非编码RNA。为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR，所述的lncRNA-ADDNR的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR的干扰序列si-lncRNA-ADDNR，所述的si-lncRNA-ADDNR为混合物，其核苷酸序列如SEQIDNO：8～SEQIDNO：13所示。一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR在调节成脂分化方面的作用。一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR在抑制成脂分化方面的作用。一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR在制备治疗肥胖产品方面的应用。所述的lncRNA-ADDNR的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。所述的长链非编码RNAlncRNA-ADDNR的干扰序列为si-lncRNA-ADDNR，所述的si-lncRNA-ADDNR为混合物，其核苷酸序列如SEQIDNO：8～SEQIDNO：13所示。所述的干扰序列si-lncRNA-ADDNR在调控长链非编码RNAlncRNA-ADDNR表达量方面的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术首先通过RT-PCR证实了lncRNA-ADDNR的客观存在，其次利用荧光定量PCR证实lncRNA-ADDNR在前脂肪细胞中的表达量明显高于成熟脂肪细胞。为进一步研究lncRNA-ADDNR表达量降低对脂肪细胞成脂分化以及脂肪沉积的影响，从而探讨lncRNA-ADDNR在脂质代谢中的作用，本专利技术针对lncRNA-ADDNR序列，合成抑制其表达的siRNA序列，将其转染到前脂肪细胞，人为抑制前脂肪细胞中lncRNA-ADDNR的表达。结果证实，siRNA序列的转染可以显著降低lncRNA-ADDNR的表达量，lncRNA-ADDNR的表达量的降低，能够促进前脂肪细胞促分化相关因子的表达，最终达到促进脂肪沉积的作用，表明该lncRNA-ADDNR在脂质代谢中发挥重要作用，可以作为治疗肥胖的新的分子标记和药物靶点。附图说明图1为lncRNA-ADDNR的PCR扩增结果。左泳道为DNAmarker，DNA分子量标准为DL2000，从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp，100bp，右泳道为lncRNA-ADDNR的PCR扩增片段为506bp。图2为lncRNA-ADDNR在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中的表达量变化趋势。D0，D2，D4表示成脂分化的第0天、第2天和第4天。表达量使用平均值±标准误表示，**表示差异极显著。图3为在3T3-L1前脂肪细胞中si-lncRNA-ADDNR的干扰效率。PT48h，D0，D4分别表示转染si-lncRNA-ADDNR后第48h、诱导分化当天和第四天。si-lncRNA-ADDNR代表转染si-lncRNA-ADDNR组，si-NC代表对照组。表达量使用平均值±标准误表示，**表示差异极显著。图4为转染si-lncRNA-ADDNR后48h对成脂分化相关基因的影响。表达量使用平均值±标准误表示，*表示差异显示，**表示差异极显著。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法，或按照制造厂商所建议的条件与实施步骤。实施例1、lncRNA-ADDNR的验证1、材料细胞：小鼠前脂肪细胞3T3-L1(GNM25)，购自中国科学院细胞库/干细胞库。试剂：DMEM、PBS、青链霉素、新生牛血清和胎牛血清购自Gibco公司。Reagent购自Invitrogen公司。反转录试剂盒RTreagentKit(PerfectRealTime)购自购自TaKaRa公司。PCR扩增所用的2×TaqPCRMastermix和电泳所用DL2000均购自天根生化科技(北京)有限公司。2、方法2.1、前脂肪细胞总RNA的提取收集前脂肪细胞3T3-L1(GNM25)于1.5mLEppendorf管，去除培养基，加入1mLReagent混匀，置于室温10min，使核蛋白复合物完全分离。此时，可以直接进行RNA提取，也可以冻存于-40℃，保存备用。加入0.2mL氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15s，室温放置3min，4℃、12000r/m离心15min，将上层无色水相转移至新的1.5mLEppendorf管，加入0.5mL异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温放置10min。4℃、12000r/m离心15min，弃去上清。用1mL75％乙醇洗涤RNA沉淀，4℃、12000r/m离心10min，去上清。空气干燥10min，用无RNA酶的ddH2O溶解RNA，可置于55～60℃温育10min，促进RNA溶解。使用Nanodrop2000测定RNA浓度，提取的RNA可置于-70℃保存。2.2、引物设计根据lncRNA-ADDNR转录本的序列(SEQIDNO：1)，通过PrimerPremier5软件设计lncRNA-ADDNR扩增引物，具体如下：上游引物：5’-TGTTG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长链非编码RNA lncRNA‑ADDNR，其特征在于，所述的lncRNA‑ADDNR的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR，其特征在于，所述的lncRNA-ADDNR的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR的干扰序列si-lncRNA-ADDNR，其特征在于，所述的si-lncRNA-ADDNR为混合物，其核苷酸序列如SEQIDNO：8～SEQIDNO：13所示。3.一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR在调节成脂分化方面的作用。4.一种长链非编码RNAlncRNA-ADDNR在抑制成脂分化方面的作用。5.一种长链非编码RNAlncRNA-ADDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：王璟，滑留帅，兰亚莉，陈付英，邢宝松，丹米其·萨玛斯基，徐照学，白献晓，张必良，张家庆，陈俊峰，刘燕，
申请(专利权)人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所，广州市锐博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41