长链非编码RNA RMST的应用方法技术

本发明专利技术公开了一种长链非编码RNA(long no-coding RNA，LncRNA)RMST的应用方法，即用于制备胶质瘤患者的预后制剂，特别是制备出实时荧光定量分析法预测胶质瘤患者预后的试剂盒。通过研究证实LncRNA RMST在胶质瘤组织中表达上调，高表达LncRNA RMST的胶质瘤患者比低表达LncRNA RMST的胶质瘤患者预后差，因此，将Lnc RNA RMST的表达用于胶质瘤患者的预后预测，可以为胶质瘤患者的预后提供强有力的分子生物学依据，具有深远的临床意义和推广性。

【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNARMST的应用方法
本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及LncRNARMST在制备胶质瘤患者预后试剂中的应用方法。
技术介绍
胶质瘤起源于外胚层，约占神经系统肿瘤的40.49％，是最常见的肿瘤之一，可以在任何年龄的人群中发病，具有很强的增殖能力和血管生成能力，很容易在颅内发生侵袭和转移。虽然其发病率仅占成人肿瘤的2％，但病死率却占所有肿瘤相关死亡的10％。尽管一些治疗方法包括手术治疗、放疗及化疗有很大进展,但是胶质瘤患者特别是恶性胶质瘤的预后仍然很差。目前，对胶质瘤的预后判定没有参考标准，也没有特异性的指标，远远不能适应对人胶质瘤进行预后判定的需求。因此，对人胶质瘤进行预后判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为神经外科领域亟待解决的重要课题。lncRNA是一类转录本长度大于200bp的非编码RNA，具有相对较长的核苷酸链，其分子内部具有特定的二级空间结构，能提供与蛋白质结合的多个位点，或与DNA、RNA之间通过碱基互补配对原则发生特异性、动态性相互作用。研究表明，lncRNA可作为人类基因组中一类非常重要的表观遗传调控因子，通过表观遗传、转录调控以及转录后调控等多种机制调控DNA甲基化、组蛋白修饰或染色质重构使基因沉默或激活。近年来，lncRNA作为一类重要的调控分子及其在临床诊断、化疗敏感性和预后评价等方面的应用价值，已经逐渐得到研究者的重视。有研究表明HOTAIR在原发乳腺肿瘤和转移瘤中的表达都会增加，原发肿瘤中HOTAIR的表达水平可以用来有效预测癌转移和死亡。lncRNAPCA3在前列腺癌中高度过表达，这种lncRNA是在尿液中发现的，相当便于临床检测。lncRNA-LALR1通过激活Wnt/β-catenin信号，加速了细胞周期进程，促进了肝细胞增殖。采用药物靶干预lncRNA-LALR1诱导肝脏再生，有可能有益于肝衰竭和肝移植治疗。由此可见，lncRNA作为诊断、预后和治疗的分子标志物具有巨大潜力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种LncRNARMST的应用方法，即LncRNARMST(rhabdomyosarcoma2associatedtranscript)定位于染色体12q23.1，GeneBank登录号：NR-024037能作为胶质瘤预后的判断标准，用于制备胶质瘤患者的预后制剂，更进一步能够提供一种性价比高，易于推广应用的胶质瘤预后预测试剂盒。长链非编码RNARMST的应用方法，所述的长链非编码RNARMST用于制备胶质瘤患者的预后制剂，该长链非编码RNARMST的序列见SEQNO:1。用于制备胶质瘤患者的预后制剂具体包括实时荧光定量PCR检测试剂。所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括进行实时荧光定量PCR的特异性引物：LncRNARMST正向引物：5′-AACTCCGTGTCCCTTGTG-3′，LncRNARMST反向引物：5′-GGCAGTGGGTGACTGATC-3′。所述的实时荧光定量PCR检测试剂为试剂盒，该试剂盒包括：(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；(2)以总RNA为模板将LncRNARMST逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及LncRNARMST所用随机引物；(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括LncRNARMST实时荧光定量PCR特异性引物、U6snRNA内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水；LncRNARMST实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物5′-AACTCCGTGTCCCTTGTG-3′，反向引物5′-GGCAGTGGGTGACTGATC-3′，U6snRNA内参特异性PCR引物：正向引物为5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′，反向引物为5′-GGAACGCTTCACGAATTTG-3′。在前期研究工作中，申请人通过DIANA-LncBase软件分析与miR-101竞争性结合MRE序列的LncRNA时，发现了LncRNARMST。申请人在胶质瘤组织中提取RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR分析LncRNARMST的表达，发现：LncRNARMST在胶质瘤中表达上调，与正常人脑组织中的表达差异显著。且LncRNARMST表达水平不同的胶质瘤患者中预后存在明显差异，经Kaplan-Meier生存分析发现LncRNARMST高表达的胶质瘤患者生存率明显低于低表达的患者；多因素Cox比例风险模型的预后分析发现LncRNARMST的相对危险度>1，表明LncRNARMST高表达的患者预后较低表达的患者预后差，所以LncRNARMST的高表达是胶质瘤患者预后风险预测的独立危险因素。据此，申请人提出利用LncRNARMST制备用于胶质瘤患者预后的制剂。将LncRNARMST用于胶质瘤患者预后的检测方法：(1)收集待测个体术后切除的胶质瘤组织，抽提总RNA；(2)以总RNA为模板将RMST逆转录为cDNA；(3)用RMST特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增，获得相对表达量2ΔΔCT，当2ΔΔCT>1.87时提示RMST为高表达。利用本专利技术的检测制剂可以检测LncRNARMST在胶质瘤患者中的表达水平，为胶质瘤患者预后预测提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广性。附图说明图1为实时荧光定量PCR分析LncRNARMST在胶质瘤组织与正常脑组织中的表达差异；图2为LncRNARMST与37例胶质瘤患者预后的关系。具体实施方式以下结合实施例旨在进一步说明本专利技术，而非限制本专利技术。在前期研究工作中，申请人通过DIANA-LncBase软件分析与miR-101竞争性结合MRE序列的LncRNA时，发现了LncRNARMST。申请人在胶质瘤组织中提取RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR分析LncRNARMST的表达，发现：LncRNARMST在胶质瘤组织中表达上调，与正常人脑组织中的表达差异显著(P＝0.0282)(图1)。且LncRNARMST表达水平不同的胶质瘤患者中预后存在明显差异，经Kaplan-Meier生存分析发现LncRNARMST高表达的胶质瘤患者生存率明显低于低表达的患者(P＝0.0035)(图2)，多因素Cox比例风险模型的预后分析发现LncRNARMST的相对危险度>1(RR＝1.177)，表明LncRNARMST高表达的患者预后较低表达的患者预后差，LncRNARMST的高表达是胶质瘤患者预后风险预测的独立危险因素。实施例1制备LncRNARMST用于胶质瘤患者预后的试剂盒(50次反应)1.RNA稳定溶液50ml2.异丙醇100ml3.三氯甲烷100ml4.Trizol50ml5.无酶水10ml6.1μM随机逆转录引物50ul7.5×逆转录缓冲液200ml8.10mM三磷酸碱基脱氧核苷酸100ul9.40U/μlRNA酶抑制剂500ul10.200U/μlMMLV逆转录酶50ul11.PremixExTaq50ul12.10μMLncRNARMST特异性引物30ul正向引物5′-AACTCC本文档来自技高网...

【技术保护点】
长链非编码RNA RMST的应用方法，其特征在于，所述的长链非编码RNA RMST用于制备胶质瘤患者的预后制剂，该长链非编码RNA RMST的序列见SEQ NO:1。

【技术特征摘要】
1.检测长链非编码RNARMST表达量的试剂在制备胶质瘤患者的预后制剂中的用途，该长链非编码RNARMST的序列如SEQNO:1所示；检测长链非编码RNARMST表达量的试剂为实时荧光定量PCR检测试剂；所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括进行实时荧光定量PCR的特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：武明花，刘长红，余志斌，徐刚，李桂源，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43