【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫制剂，尤其涉及一种核酸基cgas-sting免疫佐剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、肿瘤疫苗是通过激活机体特异性抗肿瘤免疫反应的新型治疗手段，其主要由抗原和佐剂构成。免疫佐剂是一种通过激活机体天然免疫系统，调控机体免疫应答进而帮助机体抵御疾病的药剂，其可由天然或合成类的小分子和/或材料组成。免疫佐剂根据其受体的不同，可分为toll样受体佐剂，干扰素基因刺激蛋白(stimμlator of interferon geneprotein，sting)佐剂，nod样受体佐剂，rig-i样受体佐剂和c型凝集素受体佐剂。sting信号通路是近些年来发现的参与机体抗病毒免疫的关键信号通路，不同于大部分的toll样受体，cgas-sting信号通路不仅在免疫细胞中表达，还在许多正常细胞(如内皮细胞)以及癌细胞中均能够表达，因此具有更强激活机体免疫的能力；并且，最近的一些研究显示，cgas-sting的激活还能够有效促进树突状细胞对抗原的交叉呈递。这些优势使得cgas-sting佐剂在近些年广受关注。
2、目前，新型cgas-sting佐剂的开发主要围绕两个方向在进行。一方面是开发新型小分子，主要是通过高通量筛选与sting具有更高特异性、更强结合的小分子和通过化学修饰已有的sting激动小分子进行，如通过硫代修饰cgamp的磷酯键可以增加其抗酶解能力。其中的一些小分子如adu-s100，dmxaa已经进入过临床研究。另一方面，为了增加小分子的利用度，许多研究人员在探索新型载体以促进cgas-sting佐剂的胞
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种由无机材料和核酸制备得到的cgas-sting免疫佐剂，简单易合成、便于量产、稳定性高、能高效激活cgas-sting信号通路，可应用于各类疾病的治疗中。
2、本专利技术的第一个目的是提供一种核酸基cgas-sting免疫佐剂，所述核酸基cgas-sting免疫佐剂包括核酸和无机材料；其中，所述无机材料和核酸复合形成纳米或微米颗粒，该纳米或微米颗粒可酸响应性分解并释放其中的核酸。
3、现有的sting免疫佐剂大多是通过sting报告细胞筛选出来的小分子激动剂，而由于种属间甚至个体间存在的sting蛋白表达差异，其在临床试验时只在一部分人中起效。而本专利技术制备的核酸基cgas-sting免疫佐剂基于cgas通路开发，cgas通路作为生物进化来抵御dna病毒的一个保护机制，是生物间共同存在的，不存在上述问题，更有利于临床转化，在肿瘤等疾病的临床免疫治疗中也有望发挥重要作用。同时，小分子激动剂的结合位点有限，可编程性不高，难以进一步改性。但是本专利技术采用核酸，由于其本身位点多，是天然的生物大分子，可编程性极高，可以通过共价键、非共价键等偶联其他物质或进行结构优化，因此整个颗粒也可以进行编程，大大拓展了下游应用。另外，由于直接包载颗粒太大(>2μm)，细胞内吞效率低，刺激效果差，本专利技术提供的复合形成的佐剂颗粒相比于直接包载所得到的颗粒尺寸更为均一，形貌更可控，更易被细胞摄取，刺激效果更好。
4、本专利技术提供的核酸基cgas-sting免疫佐剂的递送机理是，复合形成的佐剂颗粒被细胞内吞后，佐剂颗粒中的无机材料在溶酶体酸性条件下分解，通过质子海绵效应将核酸释放到细胞内，刺激cgas-sting信号通路，引起下游ifn-b分泌以及cxcl-10等趋化因子分泌，上调树突状细胞表面共刺激分子的表达，从而启动天然免疫和适应性免疫应答，实现抑制肿瘤生长的效果。
5、进一步地，所述核酸可为天然提取的核酸或人工合成的核酸中的一种或多种。
6、进一步地，所述核酸含有不少于5nt、不少于10nt、不少于50nt、不少于100nt、不少于200nt、不少于300nt、不少于500nt、不少于1000nt的序列长度，分子量不小于6000da。
7、进一步地，所述天然提取的核酸包括但不限于肿瘤dna、肝脏dna、脾脏dna、小牛胸腺dna、小麦dna、鲱鱼dna、鲑鱼dna、细菌dna、真菌dna、病毒dna、质粒、细菌rna、真菌rna、病毒rna中的一种或多种。
8、进一步地，所述人工合成的核酸选自聚(脱氧鸟嘌呤-脱氧胞苷)酸钠盐、聚(脱氧鸟嘌呤-脱氧胞苷)酸钠盐、cpg、聚肌苷酸胞苷酸、poly i、poly c，dna折纸中的一种或多种。
9、进一步地，所述的核酸链可进行链间硫代修饰、5’端或3’端巯基修饰、生物素修饰、聚乙二醇修饰、二苯并环辛炔修饰、醛基修饰、胆固醇修饰、染料修饰、马来酰亚胺修饰中的一种或多种。
10、进一步地，所述无机材料选自碳酸钙、碳酸锰、碳酸镁、碳酸铝、碳酸钴、碳酸锌、碳酸铁、碳酸锡、磷酸钙、磷酸锰、磷酸镁、磷酸铝、磷酸钴、磷酸铁、磷酸锌、磷酸锡、焦磷酸钙、焦磷酸锰、焦磷酸镁、焦磷酸铝、焦磷酸钴、焦磷酸铁、焦磷酸锌、焦磷酸锡、三聚磷酸钙、三聚磷酸锰、三聚磷酸镁、三聚磷酸铝、三聚磷酸钴、三聚磷酸铁、三聚磷酸锌、三聚磷酸锡、六聚磷酸钙、六聚磷酸锰、六聚磷酸镁、六聚磷酸铝、六聚磷酸钴、六聚磷酸铁、六聚磷酸锌、六聚磷酸锡、膦酸钙、膦酸锰、膦酸镁、膦酸铝、膦酸钴、膦酸铁、膦酸锌、膦酸锡、磷酸氢钙、磷酸氢锰、氢氧化钙、氢氧化锰、氢氧化镁、氢氧化铝、氢氧化钴、氢氧化锌、氢化钙和二氧化锰中的一种或多种。
11、进一步地，所述复合为将核酸、含有所述无机材料中金属阳离子的溶液、含有所述无机材料中阴离子的溶液混合反应。
12、进一步地，所述核酸基cgas-sting免疫佐剂的粒径为10-10000nm。
13、进一步地，所述核酸基cgas-sting免疫佐剂在无菌水中可以长期稳定存在，或根据实际需要制成冻干剂型或进行除菌操作等。本专利技术制备的核酸基cgas-sting佐剂，可在无菌水或生理溶液长期储存，无需低温。实验中发现其储存1年后仍然保持原有形貌和刺激效果。另外，其可直接通过高压蒸汽进行灭菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸基cGAS-STING免疫佐剂，其特征在于：所述核酸基cGAS-STING免疫佐剂包括核酸和无机材料；其中，所述无机材料和核酸复合形成纳米或微米颗粒，所述核酸基cGAS-STING免疫佐剂可酸响应性分解并释放所述核酸。
2.根据权利要求1所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂，其特征在于：所述无机材料选自碳酸钙、碳酸锰、碳酸镁、碳酸铝、碳酸钴、碳酸锌、碳酸铁、碳酸锡、磷酸钙、磷酸锰、磷酸镁、磷酸铝、磷酸钴、磷酸铁、磷酸锌、磷酸锡、焦磷酸钙、焦磷酸锰、焦磷酸镁、焦磷酸铝、焦磷酸钴、焦磷酸铁、焦磷酸锌、焦磷酸锡、三聚磷酸钙、三聚磷酸锰、三聚磷酸镁、三聚磷酸铝、三聚磷酸钴、三聚磷酸铁、三聚磷酸锌、三聚磷酸锡、六聚磷酸钙、六聚磷酸锰、六聚磷酸镁、六聚磷酸铝、六聚磷酸钴、六聚磷酸铁、六聚磷酸锌、六聚磷酸锡、膦酸钙、膦酸锰、膦酸镁、膦酸铝、膦酸钴、膦酸铁、膦酸锌、膦酸锡、磷酸氢钙、磷酸氢锰、氢氧化钙、氢氧化锰、氢氧化镁、氢氧化铝、氢氧化钴、氢氧化锌、氢化钙和二氧化锰中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂，其特征在于：所述纳米或微米颗粒修饰有多酚或阳离子聚合物。
5.根据权利要求4所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂，其特征在于：所述多酚选自单宁酸、没食子酸、多巴胺、聚多巴胺、表没食子儿茶素没食子酸酯中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂，其特征在于：所述阳离子聚合物选自壳聚糖、聚赖氨酸、阳离子脂质体、聚乙烯亚胺、聚精氨酸中的一种或多种。
7.权利要求1-6任一项所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将核酸与含所述无机材料中金属阳离子的溶液、含所述无机材料中阴离子的溶液混合，复合得到所述核酸基cGAS-STING免疫佐剂。
8.一种核酸基无机材料在制备cGAS-STING佐剂中的应用，其特征在于：所述核酸基无机材料由无机材料和核酸复合形成纳米或微米颗粒得到，核酸基无机材料可酸响应性分解并释放所述核酸。
9.权利要求1-6任一项所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂在制备肿瘤治疗制剂中的应用。
10.一种多功能佐剂，其特征在于：所述多功能佐剂包括第一佐剂和第二佐剂，所述第一佐剂选自权利要求4-6任一项所述的核酸基cGAS-STING免疫佐剂，所述第二佐剂选自R837、R848、聚肌苷酸胞苷酸、CpG、脂多糖、单磷酰脂质体A中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种核酸基cgas-sting免疫佐剂，其特征在于：所述核酸基cgas-sting免疫佐剂包括核酸和无机材料；其中，所述无机材料和核酸复合形成纳米或微米颗粒，所述核酸基cgas-sting免疫佐剂可酸响应性分解并释放所述核酸。
2.根据权利要求1所述的核酸基cgas-sting免疫佐剂，其特征在于：所述无机材料选自碳酸钙、碳酸锰、碳酸镁、碳酸铝、碳酸钴、碳酸锌、碳酸铁、碳酸锡、磷酸钙、磷酸锰、磷酸镁、磷酸铝、磷酸钴、磷酸铁、磷酸锌、磷酸锡、焦磷酸钙、焦磷酸锰、焦磷酸镁、焦磷酸铝、焦磷酸钴、焦磷酸铁、焦磷酸锌、焦磷酸锡、三聚磷酸钙、三聚磷酸锰、三聚磷酸镁、三聚磷酸铝、三聚磷酸钴、三聚磷酸铁、三聚磷酸锌、三聚磷酸锡、六聚磷酸钙、六聚磷酸锰、六聚磷酸镁、六聚磷酸铝、六聚磷酸钴、六聚磷酸铁、六聚磷酸锌、六聚磷酸锡、膦酸钙、膦酸锰、膦酸镁、膦酸铝、膦酸钴、膦酸铁、膦酸锌、膦酸锡、磷酸氢钙、磷酸氢锰、氢氧化钙、氢氧化锰、氢氧化镁、氢氧化铝、氢氧化钴、氢氧化锌、氢化钙和二氧化锰中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的核酸基cgas-sting免疫佐剂，其特征在于：所述核酸基cgas-sting免疫佐剂的粒径为10-10000nm。
4.根据权利要求1所述的核酸基cgas-sting免疫佐剂，其特征在于：所述纳米或微米颗粒修饰有...
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