本发明专利技术涉及分子生物学、病毒学、免疫学和医学领域。本发明专利技术提供一种包含ＲＮＡ噬菌体的病毒样颗粒（ＶＬＰ）和至少一种抗原的组合物，其中所述ＶＬＰ是在宿主中重组产生的，并且其中所述ＶＬＰ所包含的具有二级结构的宿主ＲＮＡ的量最多为所述ＶＬＰ原来所包含的具有二级结构的宿主ＲＮＡ量的２０％；并且其中所述ＶＬＰ和至少一种抗原彼此连接。而且，本发明专利技术的组合物特别可用于有效诱导针对特定环境内的抗原的强抗体应答，同时降低或消除不希望的Ｔ细胞应答。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
专利
本专利技术涉及分子生物学、病毒学、免疫学和医学领域。本专利技术提供一种包含RNA噬菌体的病毒样颗粒(VLP)和至少一种抗原的组合物，其中所述VLP是在宿主中重组产生的，并且其中所述VLP所包含的具有二级结构的宿主RNA的量最多为所述VLP原来所包含的具有二级结构的宿主RNA量的20％；并且其中所述VLP和所述至少一种抗原彼此连接。本专利技术也提供制备本专利技术的组合物的方法。本专利技术的组合物可以用于制备治疗疾病、障碍和病症的疫苗。而且，本专利技术的组合物特别可用于有效诱导针对特定环境内的抗原的强抗体应答，同时降低或消除不希望的T细胞应答。相关技术已经描述了与抗原连接的RNA-噬菌体的病毒样颗粒(VLP)是有用的疫苗组合物。WO 02/056905描述了VLP-抗原偶联物作为疫苗用于治疗传染病，预防或治疗癌症，以及有效地诱导自身特异性免疫应答。而且，在自身特异性免疫应答的诱导的内容中，已经公开了具体的VLP-抗原偶联物，例如，用于治疗变态反应(WO 03/040164)或骨病(WO03/039225)，或者用于治疗和预防与肾素活化的血管紧张肽系统有关的病症(WO 03/031466)。根据抗原的性质和有关疾病，疫苗引起的某些类型的免疫应答通常比另外一些更加期望。例如，尽管通常希望诱导针对肿瘤细胞或病毒感染的强细胞毒性T细胞(CTL)应答，但是这种应答，特别是对于含有自身抗原的疫苗来说，可能会导致严重的副作用，如自身特异性T细胞的诱导(Orgogozo，J.M.等人，Neurology 61，46-54(2003)；Hock，C.等人，Natural Med.8，1270-75(2002)；Hock C.等人，Neuron 38，547-554，(2003))。抗原特异性T细胞的活化主要依赖于T细胞与诸如树突细胞、B细胞和巨噬细胞的抗原呈递细胞(APC)之间的交叉应答(cross-talk)，APC在MHC分子环境中呈递T细胞抗原。导致APC活化的一种途径是Th细胞上的CD40L与树突细胞上的CD40的相互作用(Foy，T.M，等人，Annu.Rev.Immunol.14591(1996))。令人感兴趣的是，这种CD40L-介导的树突细胞成熟似乎负责对CTL应答的辅助效应。实际上，最近表明，Th细胞引起的CD40触发使树突细胞能够启动CTL应答(Ridge，J.P，等人，Nature 393474(1998)；Bennett，S.R.M，等人，Nature 393478(1998)；Schoenenberger，S.P，等人，Nature 393480(1998))。导致APC活化的另外一种途径是通过APC表达的toll-样受体的活化。迄今为止已经鉴定了10种人toll-样受体，它们的配体表现出有限数量的与病原体有关的不变模式(Medzhitov，R.和Janeway，C.A，Jr，Cell 91295-298(1997))。这些模式的例子包括脂多糖(LPS)、富含非甲基化CG的DNA(CpG)或双链RNA，它们分别对于细菌和病毒感染具有特异性。刺激先天免疫的因子对APC的普遍活化通常可能是引发自身特异性淋巴细胞和自身免疫的原因。这种活化可导致共同刺激分子或细胞因子如IL-12或IFNα的表达提高。这一观点与以下发现一致与甲状腺提取物一起施用LPS能够克服耐受并引发自身免疫性甲状腺炎(Weigle，W.O，Adv.Immunol.30159(1980))。而且，在转基因小鼠模型上，最近发现单独施用自身肽不能引起自身免疫，除非APC被一种单独的途径活化(Garza，K.M.等人，J.Exp.Med.1912021(2000))。以下发现进一步说明了先天免疫与自身免疫病之间的联系LPS、病毒感染或APC的普遍活化延迟或防止了外周耐受的形成(Vella，A.T.等人，Immunity 2261(1995)；Ehl，S.等人，J.Exp.Med.187763(1998)；Maxwell，J.R.等人，J.Immunol.1622024(1999))。这样，先天免疫不仅可增强自身特异性淋巴细胞的活化，而且可抑制其随后的消失。现有技术中描述的并且作为抗原载体用于接种的RNA噬菌体如Qβ或AP205的病毒样颗粒已经通过在大肠杆菌中重组表达而制备。然而，通过随后从大肠杆菌裂解物中纯化而获得的VLP仍然含有包裹的大肠杆菌成分，主要是大肠杆菌RNA以及一些大肠杆菌蛋白质。许多细菌成分，特别是细菌核酸，特别是细菌DNA和细菌RNA，通过toll-样受体的活化而导致T细胞应答的刺激。如前所述，T细胞应答的活化可导致严重的副作用。而且，在疫苗内除已经证明的药学活性成分以外不希望存在诸如未鉴定的细菌成分的物质，因为这些未鉴定的细菌成分可能会引起潜在的危险或副作用。因此，在本领域中仍然需要开发新的有效的疫苗用于治疗较大范围的疾病。特别是，在本领域中仍然需要开发新的疫苗，从而最大可能性地降低或消除不利的副作用如不希望的T细胞应答的活化或刺激，同时保持最大的治疗效果。专利技术概述我们惊奇地发现本专利技术的组合物能够诱导针对疫苗中所含抗原的强免疫应答，特别是抗体应答，而同时最小化或避免了不希望的T细胞应答或其他不希望的副作用，如发热。先天免疫的刺激导致IgG2a和IgG2b型抗体的诱导，IgG2a和IgG2b在组织破坏方面比IgG1(小鼠)更强有力。我们惊奇地发现，本专利技术的组合物改变了抗体同种型分布，使之远离IgG2a和/或IgG2b或IgG1(人)。另外，我们惊奇地发现，本专利技术的组合物是有效的疫苗，它诱导针对多种抗原，特别是自身抗原的强免疫应答，这些抗原可以在治疗诸如但不限于自身免疫病、炎性疾病、肥胖症和药物成瘾的多种疾病中作为靶标使用。因此，在第一方面，本专利技术提供一种组合物，包含(a)一种病毒样颗粒(VLP)，其包含RNA-噬菌体的外壳蛋白、其突变体或片段，其中所述VLP具有至少一个第一附着位点，其中所述VLP是由宿主重组产生的，并且其中VLP包含的具有二级结构的宿主RNA的量为所述VLP原来所含的具有二级结构的宿主RNA的量的最多20％，优选最多10％；(b)具有至少一个第二附着位点的至少一种抗原；其中所述至少一种抗原(b)与所述VLP(a)通过所述至少一个第一附着位点和所述至少一个第二附着位点连接。优选地，本专利技术的组合物形成一种有序且重复的抗原阵列。所述至少一种抗原可以选自多肽、碳水化合物、类固醇激素、有机分子或半抗原，优选地，所述至少一种抗原是自身抗原或半抗原。在此提供了典型和优选的根据本专利技术测定RNA，优选核酸的量的方法。本专利技术的组合物和疫苗中宿主RNA，优选宿主核酸的量强烈降低，导致VLP或VLP-抗原偶联物具有强烈降低的量的Toll-样受体配体，或优选地基本不含Toll-样受体配体。Toll-样受体被认为是连接先天免疫应答和获得性免疫应答的枢纽。Toll-样受体的活化导致先天免疫系统的全面活化以及APC的活化，进一步导致抗原特异性免疫应答。因此，令人惊奇的是，包含VLP的本专利技术的组合物和疫苗，其中所述VLP含有的具有二级结构的宿主RNA的量为VLP原来所含的量的最多20％，优选最多10％，更优选地VLP基本不含宿主RNA，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物，包含：（ａ）一种病毒样颗粒（ＶＬＰ），其包含ＲＮＡ－噬菌体的外壳蛋白、其突变体或片段，其中所述ＶＬＰ具有至少一个第一附着位点，其中所述ＶＬＰ是由宿主重组产生的，并且其中所述ＶＬＰ包含的具有二级结构的所述宿主ＲＮＡ的量最多为所述ＶＬＰ原来所含的具有二级结构的宿主ＲＮＡ的量的２０％；（ｂ）具有至少一个第二附着位点的至少一种抗原；其中所述至少一种抗原（ｂ）与所述ＶＬＰ（ａ）通过所述至少一个第一附着位点和所述至少一个第二附着位点连接。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M巴克曼，P毛雷尔，E米杰林克，K普罗巴，K施瓦茨，
申请(专利权)人：赛托斯生物技术公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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