ＬＴＢＰ－２在制备检测心力衰竭试剂盒中的应用及含有该蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术提出了一种ＬＴＢＰ２的新用途。本发明专利技术经实验验证ＬＴＢＰ２可以用于检测各种心肌病导致的心力衰竭，并且纵向和横向比较ＬＴＢＰ２在心衰中的生物标记物的地位，本发明专利技术的这种用血清快速准确检测ＬＴＢＰ－２来评估终末期心脏病的方法具有极大的临床意义和推广意义。在ＡＲＶＣ所致心衰组ＬＴＢＰ２表达差异显著，上调７．７倍。本发明专利技术ＬＴＢＰ２制备的检测心力衰竭的试剂盒优势：有敏感度和特异性高，血清稀释比例高，现有技术也有用血清学检测的，但是敏感性等不甚理想，与现有检测心衰的方法相比较，成本低、效率高、使用方便等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种辅助性转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)的新用途，具体地说是 一种利用辅助性转化生长因子结合蛋白2在制备检测心力衰竭试剂盒中的应用。
技术介绍
TGF-P最初由鼠类肉瘤中分离出来，可以增强表皮生长因子(EGF)对非肿瘤成纤 维细胞的转化和增殖活性。人体几乎每种细胞都可以产生TGF-I3 ，生理情况下TGF-P可以 调节细胞的增殖、分化、参与胚胎发育、免疫调节等过程，在许多疾病状态下，TGF-I3产生增 多，如肿瘤、纤维化疾病及遗传性出血性毛细血管扩张。研究表明肿瘤细胞及其基质细胞产 生大量TGF-P，增加新生血管形成，抑制免疫，促进肿瘤转移侵犯其他器官。TGF-13与心血 管疾病也有密切联系。 成熟的TGF-P是由两个结构相同或相近的、分子量12.5kDa的亚单位通过二硫 键形成的二聚体，但从细胞中分泌出来时，是以无活性的复合体L-TGF-I3形式存在的。这 种无活性的复合体又有两种形式由成熟TGF-I3通过其N-末端与LAP非共价结合，LAP 又与辅助性转化生长因子结合蛋白(LTBPs)共价结合，形成LTBPs-LAP-TGF-P复合物，称 为LL-TGF-P ;另一种形式仅由成熟TGF-P通过其N_末端与LAP非共价结合形成，称为 SL-TGF-P 。 L-TGF-P复合体通过LTBP结合到细胞外基质(ECM)中，以无活性的形式贮存下 来。而L-TGF-P的激活是蛋白酶依赖性的，血小板反应蛋白l和纤溶酶可以切断LAP与成 熟TGF-P间的非共价结合，使成熟TGF-I3从L-TGF-P复合体中释放出来，与其受体结合， 发挥生物学作用。 辅助性转化生长因子结合蛋白(LTBPs)是一类细胞外基质糖蛋白，主要包括4个 亚型LTBP-1、LTBP-2、LTBP-3、LTBP-4，属于LTBPs/f ibrillins超家族，蛋白质结构中含有2 种不同的富含半胱氨酸的重复序列，EGF样6-半胱氨酸重复序列和8-半胱氨酸重复序列， 大部分LTBP可与SL-TGF- P结合，辅助L-TGF- P的分泌和在ECM中贮存。EGF样序列介导 了多种非共价结合作用，而8-半胱氨酸重复序列介导了蛋白与蛋白间的共价结合作用。 LTBP-2基因定位于14q24，分子量240KDa。肺部是LTBP-2表达最多的部位，其他 如肝、脾、骨骼肌、胚胎和心脏中也有少量表达。LTBP-2含有20个EGF样序列(其中16个 可与Ca2+结合)和4个8-半胱氨酸重复序列(N-端第1个为杂交序列)。LTBP-2氨基末 端的2个EGF样序列与其他EGF样序列不同，氨基末端的第1个8-半胱氨酸重复序列缺少 1个半胱氨酸残基，与另外3个8-半胱氨酸重复序列有差别。与其他LTBPs不同，LTBP-2的 第3个8-半胱氨酸重复序列中缺少能与LAP结合所必需的共同序列，以致不能与L-TGF- P 共价结合。与TGF-P结合的8-半胱氨酸重复序列内有特殊的基序，LTBP-2和fibrillins 与其无结合能力，但将此特殊基序插入LTBP-2的第3个8-半胱氨酸序列中，将使LTBP-2 获得与SL-TGF-13的结合能力。LTBP2可与LTBP1竞争与fibrillins的结合从而负性调节3LTBP1与微纤维的结合。另外，在LTBP2的N末端有整联蛋白识别的序列RGD，证实它参与 了细胞粘附作用。 LTBP-2的功能包括参与TGF- P的组装、分泌和活化；促进TGF- P在ECM中贮存； 参与细胞粘附作用等。 心力衰竭是由于初始的心肌损害和应力作用包括收縮期或舒张期心室负荷过重 和(或)心肌细胞数量和质量的变化，引起心室和(或)心房肥大和扩大继以心室舒縮功 能低下，逐渐发展而成。是一种世界范围内的严重疾病，它不是一个独立的疾病，是由多种 因素导致，其分子机制并不清楚，可能与相关的基因和蛋白质等表达异常有关。基因是决 定心血管疾病表型的重要物质，基因芯片技术普遍用于检测心衰中基因表达的改变，为研 究心衰内在的分子机制提供了一个很好的技术平台。(Global gene e邓ression in the failingmyocardium. Circulation,2009，73(9) :1568-76.) 基因芯片技术在1991年的Science杂志上被首次提出，其高通量，并行检测的特 点适应了分析人类基因组计划提供的海量的基因序列信息的需要，可以说，人类基因组计 划是基因芯片技术发展的原因，而对深入研究基因突变和基因表达的有效方法的需要又是 促进基因芯片技术发展的动力。最近发展起来的技术利用检测基因序列来识别基因相对应 的蛋白质并阐述其功能，这也是功能基因组学的目的所在。DNA芯片与其他技术相比，因其 相对容易操作和应用以及实用性而发挥主导作用，它可在基因水平及转录水平同时分析来 源于病理或正常组织的上千个基因，识别特定疾病的新的标记物，包括用于早期诊断和预 防的生物标记物。(DNA arrays-technological aspects and applications. BullCancer， 2001 ;88(3) :243-52)。根据固定在芯片载体上的核酸分子不同，基因芯片可以分为cDNA芯 片和寡核苷酸芯片等。 基因芯片技术的基本原理基因芯片系统由基因芯片、芯片处理器、芯片阅读器和 芯片分析软件4部分组成。其基本原理是指按照预定位置固定在固相载体上很小面积内的 千万个核酸分子(靶)所组成的微点阵阵列在一定条件下与来自样品的序列互补的核酸片 段(探针)杂交，样品中的核酸片段进行不同的荧光标记，在专用的芯片阅读仪上就可以检 领倒杂交信号，芯片分析软件进行分析。(Gene expression profiling by DNA microarray technology. Crit. Rev. OralBiol. Med. 2002， 13 ;35) 基因芯片技术的主要特点基因芯片技术上的特点是具有高度可行性、多样性、微 型化和自动化四大特点。高度并行性有利于基因芯片所示图谱的快速对照和阅读，工作效 率大大提高；多样性提供了样品的多指标测定；微型化能大大节约所需样品和试剂用量， 降低成本；自动化既减少了人力投入又保证了质量。同时，基因芯片还具有操作方便、信息 综合处理能力强、结果可靠和仪器配套齐全等优势。 目前，我们还没有单一的一个标记或多个标记的组合来解决心衰相关的诸多问 题。即使文献中常报道的心衰BNP标记也未能满足一个理想标记的要求，另一方面， 一些现 有的生物标记在心衰中的作用被忽视了。 (Genetic Markers,Progress and Potential for Cardiovascular Disease. Gary H. Gibbons, MD， etc, Circulation. 2004 ;109: IV-47-IV-58.)
技术实现思路
本专利技术的目的在于提出一种辅助性转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)的新用途， 并且提出一种含有该蛋白的可以高效准确的检测心力衰竭疾病的试剂盒。 本专利技术的专利技术思路为本专利技术专利技术人使用基因芯片的方法找到新型心衰生物标 记。LTBP-2含有20个EGF样序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＬＴＢＰ－２在制备检测心力衰竭试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏英杰，胡盛寿，白媛媛，张晓玲，张浩，郑哲，张芃，黄洁，
申请(专利权)人：中国医学科学院阜外心血管病医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]