用于急性冠脉综合征早期诊断的循环miRNAs及其应用制造技术

本发明专利技术提供了用于急性冠脉综合征早期诊断的循环miRNAs(即microRNAs)及其应用。所述循环miRNAs包括miR-3149和/或miR-122，进一步包括miR-2861，更进一步包括miR-140-3p和/或miR-720，这些循环miRNAs可作为标志物用于急性冠脉综合征的早期诊断。

【技术实现步骤摘要】
用于急性冠脉综合征早期诊断的循环miRNAs及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于急性冠脉综合征早期诊断的循环miRNAs及相关应用。
技术介绍
急性冠脉综合征(ACS)包括急性心肌梗死(AMI)和不稳定性心绞痛(UA)，是最凶险的心血管疾病，也是导致世界范围内心血管病死亡率和发病率的主要原因。近年，我国急性冠脉综合征(ACS)发病率呈快速升高趋势。中国多省市队列研究(CMCS)显示，与上世纪90年代初北京地区心血管病人群监测(MONICA)研究相比，我国ACS发病率升高近1倍，达114例/10万·人年。全国每年死于心血管病的患者有350万，因急性冠脉综合征(ACS)死亡的人数为70万，是我国每年车祸死亡总人数的7倍。在美国每年有近200万的患者发作急性冠脉综合征(ACS)，其中有80万为AMI，在AMI中有近213,000的患者死亡，近1/2的患者在症状出现后1小时以内、赶至医院前死亡。指南推荐，在ACS发生后最好在3h内进行血运重建，以挽救缺血心肌，预防心脏衰竭，最终降低死亡率(HammCW,BassandJP,AgewallS,etal.Escguidelinesforthemanagementofacutecoronarysyndromesinpatientspresentingwithoutpersistentst-segmentelevation:Thetaskforceforthemanagementofacutecoronarysyndromes(acs)inpatientspresentingwithoutpersistentst-segmentelevationoftheeuropeansocietyofcardiology(esc).EurHeartJ.2011；32:2999-3054)。因此，ACS患者的早期准确诊断，是及时进行缺血心肌再灌注治疗的保证，对改善患者预后有重要意义。目前对急性冠脉综合征的诊断，是基于典型症状、心电图和心肌钙蛋白(cTnI和cTnT)做出的，但这些诊断标准都各有其局限和不足。急性冠脉综合征的典型症状包括长时间胸痛、呼吸急促和恶心，但是在老年患者、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者及糖尿病患者中，症状常不典型或缺乏症状。另外，左束支传导阻滞、心脏起搏器、慢性缺血型心肌病或陈旧性心梗都可能造成急性冠脉综合征心电图的不典型改变。特别是，被认为急性冠脉综合征诊断金标准的生物学标志物心肌钙蛋白cTnI，并不能区别不稳定性心绞痛和稳定性心绞痛患者，而且由于心肌钙蛋白在肺栓塞和肾衰等多种疾病状态下也会发生改变，使其诊断价值大打折扣；并且心肌钙蛋白水平升高，仅能提示心肌损伤，而不能说明损伤机制；心肌钙蛋白要在冠状动脉阻塞6-12小时后才能检测出，即便是高敏肌钙蛋白也要在心肌梗死发生3小时后才能检测出。因此，寻找新的、敏感、特异生物标志物，对ACS的早期诊断，具有重大意义。microRNA(简称miRNA)参与动脉粥样硬化发展、斑块破裂、血小板活化和凝集、以及冠状动脉闭塞后心肌细胞死亡过程。很多miRNAs的表达具有组织特异性，并可进入包括血浆和尿液在内的体液中，有望成为急性冠脉综合征的潜在生物学标志物。近期研究表明，有些miRNAs，如miR-1、miR-133a、miR-208、miR-208a、miR-208b、miR-499和miR-499-5p，在急性心肌梗死时选择性和/或高表达，被认为是心肌损伤的生物学标志物。然而，这些miRNAs中，最早的也要在急性心肌梗死症状出现后4小时才能检出，使得这些miRNAs难以作为急性冠脉综合征的早期诊断生物学标志物。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于寻找能够用于急性冠脉综合征早期诊断的敏感、特异性生物学标志物，并提供其相关应用。本案专利技术人通过一系列的研究证明，miR-122、miR-3149特别是二者组合可用于急性冠脉综合征的早期诊断。在此基础上，还可以进一步结合miR-140-3p、miR-720和/或miR-2861。研究表明，急性冠脉综合征患者的循环miR-122、miR-140-3p、miR-720、miR-2861和miR-3149比非急性冠脉综合征患者显著上调，ROC曲线下面积AUC分别是0.838、0.818、0.865、0.852和0.670，特别是同时用miR-122、miR-2861和miR-3149诊断急性冠脉综合征时，AUC甚至可达0.925。猪急性心肌梗死模型动物实验表明，冠状动脉结扎后180-240分钟，血浆miR-122水平上调，30-240分钟后，循环的miR-3149表达也上调，而血浆cTnI水平在急性心肌梗死发生240分钟时与假手术组间仍无表达差异。据此，一方面，本专利技术提供了循环miRNAs作为急性冠脉综合征的早期诊断的标志物的应用，其中，所述循环miRNAs包括miR-3149和/或miR-122。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的可作为急性冠脉综合征的早期诊断的标志物中，所述循环miRNAs还包括miR-2861。更进一步的，本专利技术的可作为急性冠脉综合征的早期诊断的标志物中，所述循环miRNAs还包括miR-140-3p和/或miR-720。另一方面，本专利技术还提供了检测循环miRNAs的表达水平的试剂在制备用于急性冠脉综合征的早期诊断的组合物中的应用，其中，所述检测循环miRNAs的表达水平的试剂包括检测miR-3149和/或miR-122的表达水平的试剂。根据本专利技术的具体实施方案，所述检测循环miRNAs的表达水平的试剂还包括检测miR-2861的表达水平的试剂。更进一步的，所述检测循环miRNAs的表达水平的试剂还包括检测miR-140-3p和/或miR-720的表达水平的试剂。可以应用所属领域中任何可行的方法检测所述miRNAs的表达水平。例如，可采用以下任意一种方法检测所述miRNAs的表达水平：Nothernblot方法：即首先通过电泳将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后与特定miRNA补配对的探针杂交来检测目的miRNA。具体步骤为：首先提取总RNA，然后RNA样本经过电泳依据分子量的大小被分离，再将胶上的RNA分子被转移到膜上并以烘烤或者紫外交联的方法加以固定，应用生物素、放射性同位素标记的探针与膜上的RNA、杂交，经信号显示后表明待测miRNA表达。实时荧光定量PCR(实时定量RT-PCR或qPCR)以及qPCRArray(即将检测不同基因表达的反应体系排列于同一反应板上进行同时检测)：即将RNA逆转录成cDNA后，再应用实时荧光定量PCR方法(qPCR)对miRNAs表达进行检测的方法。具体步骤为：提取总RNA后，应用茎环法或末端加尾法等方法逆转录成cDNA，再通过qPCR(如Taqman探针法、SybrGreen染料法等)进行实时荧光定量PCR。应用比较Ct法，计算miRNAs与内参基因的相对表达量。miRNA芯片技术：分离纯化的miRNAs经过逆转录及第二链cDNA合成(有些需要预扩增)进行标记后，与芯片上的miRNA探针杂交，通过对信号的采集及数据分析，确定miRNA表达谱及表达量的方法。高通量测序法：提取总RNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
循环miRNAs作为急性冠脉综合征的早期诊断的标志物的应用，其中，所述循环miRNAs包括miR‑3149和/或miR‑122。

【技术特征摘要】
1.检测循环miRNAs的表达水平的试剂在制备用于急性冠脉综合征的早期诊断的组合物中的应用，其中，所述检测循环miRNAs的表达水平的试剂包括检测miR-3149、miR-122和miR-2861的表达水平的试剂。2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述检测循环miRNAs的表达水平的试剂还包括检测miR-140-3p和/或miR-720的表达水平的试剂。3.根据权利要求1所述的应用，其中，检测循环miRNAs的表达水平的试剂包括：采用Nothernblot方法检测循环miRNAs的表达水平的试剂，采用qPCR或qPCRArray技术检测循环miRNAs的表达水平的试剂，采用miRNA芯片技术检测循环miRNAs的表达水平的试剂，或者采用高通量测序法检测循环miRNAs的表达水平的试剂。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾东风，李向东，王来元，杨跃进，黄建凤，李宏帆，
申请(专利权)人：中国医学科学院阜外心血管病医院，
类型：发明
国别省市：北京;11