用于诊断T1DM的方法和试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种诊断有需要的受试者中的１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）的方法。该方法包括确定受试者的生物样品中抗ＣＣＬ３抗体的存在和／或水平，其中存在或水平超过预定阈值表明Ｔ１ＤＭ，从而诊断受试者中的Ｔ１ＤＭ。还提供用于诊断Ｔ１ＤＭ的试剂盒和用于监测抗糖尿病治疗的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于诊断T1DM的新方法和试剂盒。糖尿病是一组慢性代谢性疾病，其特征在于高血糖(葡萄糖)水 平，这是由于胰岛素分泌或者胰岛素作用或者二者的缺陷所致。如果 不进行治疗，那么糖尿病可能会造成严重的健康并发症，包括肾衰竭、 心脏病、中风和失明。大约一千五百万美国人(人口的大约8%)患 有糖尿病。从经济学的角度而言，据估计，在美国在1997年，糖尿 病的总的年经济成本为980亿美元。1型糖尿病(T1DM)，也被称作青少年糖尿病或胰岛素依赖型 糖尿病，始于儿童期或青春期且最常见于8-12岁的年龄。在美国，大 约5 %至10 %的诊断糖尿病是T1DM。T1DM是胰岛中分泌胰岛素的(3细胞的器官特异性自身免疫破坏 的结果，其导致身体不产生胰岛素。已清楚T1DM是T细胞所介导的 多因素自身免疫性疾病，其中(3细胞破坏需要CD4+和CD8+T细胞和 巨噬细胞。促炎介质和黏附分子参与引导这些自身反应性白细胞侵入 和累积到胰岛内。T1DM的特定亚群被称作成人隐匿性自身免疫性糖尿病。这种医学病症与胰岛自身抗体相关联，类似于 1型糖尿病，但是由于其迟发性，常常被误诊为2型糖尿病(T2DM)。在早期，LADA典型地呈现为非肥胖2型糖尿病表型(患者较瘦 或为正常重量)。令人遗憾的是，在其生理表现中，LADA更像青少 年(1型)糖尿病且与胰岛素依赖型疾病具有代谢紊乱、遗传学和自 身免疫特点等共同特征。T1DM的当前诊断是基于检测谷氨酸脱羧酶(GAD)、胰岛细胞 抗原(ICA)512/IA-2和胰岛素的自身抗体。令人遗憾的是，这些测试 的敏感性不足以覆盖所有的T1DM患者。在发病时，使用抗GAD、 1A-2A和抗胰岛素(IAA)抗体的组合提供>85 %的敏感性。只使用抗 GAD的敏感性为70-80%,只使用1A-2A的敏感性为50-70%,以及 只使用抗胰岛素(IAA)的敏感性为30-50%,且这些范围中的变化反 映研究之间的种群差异(Clive等人，Autoimmunity reviews, 5:424-428， 2006; Polly等人，Diabetes Care, 24:398， 2001 );因此这些测试并不提 供充分的诊断准确性和可靠性。而且，在糖尿病诊断之后，患者并不显示对胰岛素或ICA512显 著的抗体滴度，且只是有限数量的患者显示对GAD的抗体滴度。因 此，成人自身免疫糖尿病的诊断并不容易且通常在用口服降血糖药物 对患者进行治疗失败后才会考虑(在糖尿病诊断后的若干年)。在此 情况下，仅小部分患者具有抗GAD抗体的阳性滴度。如上文所述，LADA患者常常被基于诊断时他们的年龄而错误地 诊断为2型糖尿病且目前可用的诊断工具包括自身抗体产生和C肽水 平的工具(其给出胰腺所产生的胰岛素水平的表示)。这种误诊常常 会导致错误的治疗方案(在发病时给予磺酰脲或其它糖尿病药丸，而 不是口服胰岛素)。应注意的是，尽管LADA患者可能会对口服糖尿 病药物和生活方式改变产生反应，但他们的(3细胞继续遭到破坏且应 密切地监测LADA患者。因此，能够正确地诊断1型糖尿病(包括 LADA)以便给予正确治疗是非常重要的。趋化因子是介导自身免疫性疾病的促炎蛋白质。这种作用使得这 些蛋白质为疗法的有效靶位。在小鼠实验模型中，在T1DM期间，发 现趋化因子CCL2 (MCP-I) 、 CCL3(MIP- la)和CCL4 (MIP- ip)在发 炎的胰腺中表达。此外，发现CCL3和CCL4在有T1DM风险(家族史)的个体中 上调，其展示了高水平的T1DM特异性自身抗体(ICA、 GAD和IA-2自身抗体)。重要的是，在之前研究中并未确定CCL3的自身抗体的存在，而且 CCL3的自身抗体也没有被建议为潜在的诊断工具。因此，广泛地认识到需要不具有上述局限性的用于诊断T1DM糖 尿病的方法和试剂盒，而且开发出这种方法和试剂盒对于诊断T1DM 糖尿病非常有利。专利技术概要根据本专利技术的一个方面，提供一种用于诊断有需要的受试者中的 1型糖尿病(T1DM)的方法，该方法包括确定受试者的生物样品中 CCL3抗体的存在或水平，其中存在或水平超过预定阈值表明为 T1DM，从而诊断受试者患有T1DM。根据本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断T1DM的试剂盒，该 试剂盒包括包装材料和用于确定受试者的生物样品中的抗CCL3抗体 的至少一种试剂。根据本专利技术的又一方面，提供一种用于监测有需要的受试者的抗 糖尿病治疗的方法，该方法包括使受试者经受抗糖尿病治疗；以及确 定受试者的生物样品中抗CCL3抗体的存在和/或水平，其中在受试者 经受抗糖尿病治疗后生物样品中抗CCL3抗体水平的改变表明疗效。根据下文所述的本专利技术的优选实施方案的另外的特点，在使受试 者经受抗糖尿病治疗的步骤之后和任选地在使受试者经受抗糖尿病 治疗的步骤之前，确定抗CCL3抗体的存在和/或水平。根据所述优选实施方案的另外的特点，抗糖尿病治疗包含选自胰 岛素、胰高血糖素、葡萄糖、双胍类药物、铬、人参、镁和钒的药物。根据所述优选实施方案的另外的特点，抗糖尿病治疗选自胰腺移 植、胰岛细胞移植以及生活方式方案。根据所述优选的实施方案的另外的特点，在体外确定抗CCL3抗体的存在或水平。根据所述优选实施方案的另外的特点，T1DM包含成人隐匿性自 身免疫性糖尿病(LADA)。根据所述优选实施方案的另外的特点，在引发对T1DM疾病状态 特异的自身抗体之前确定抗CCL3抗体的存在或水平。根据在所述优选的实施方案的另外的特点，该方法包含确定对 T1DM疾病状态特异的自身抗体的存在或水平。根据所述优选实施方案的另外的特点，试剂盒还包含用于确定对 T1DM疾病状态特异的自身抗体的存在或水平的至少一种试剂。根据所述优选实施方案的另外的特点，对T1DM疾病状态特异的 自身抗体对于选自谷氨酸脱羧酶(GAD)、胰岛细胞抗原(ICA) 512/IA-2和胰岛素的抗原是特异的。根据所述优选实施方案的另外的特点，阈值包含log2Ab 10 - 15 的抗CCL3滴度。根据所述优选实施方案的其它的特点，试剂盒包含如下的说明 其中log2Ab 10 - 15的抗CCL3滴度表明T1DM。根据所述优选实施方案的另外的特点，通过ELISA来确定抗 CCL3抗体的存在和/或水平。本专利技术通过提供用于诊断T1DM的新方法和试剂盒来成功地解 决目前已知配置的缺点。除非另有不同定义，本文所用的所有科技术语具有与本专利技术所属 的领域的技术人员一般理解的意义。在下文中描述了适合的方法和材 料，但与本文所描述的这些方法或材料类似或等效的方法和材料也可 用于本专利技术的实践或测试。在有沖突的情况下，以专利专利技术书，包括 定义，为主。此外，材料、方法和实施例仅是说明性的且并无限制意 义。附图简述参看附图，仅以举例说明的方式在本文中描述了本专利技术。现具体 地参看特定附图，应强调的是，所示特定方面是举例说明且仅用于说 明性讨论本专利技术的优选实施方案的目的，且呈现这些特定方面是为了 提供最适用于和易于理解本专利技术的原理和概念方面的内容。在这点 上，只是给出了本专利技术的基本理解所必要的本专利技术的详细的结构细 节，且结合附图的描述使得本领域技术人员清楚地理解在实践中本专利技术的若干形本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断有需要的受试者中的１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）的方法，所述方法包括：确定所述受试者的生物样品中抗ＣＣＬ３抗体的存在和／或水平，其中所述存在或水平超过预定阈值表明Ｔ１ＤＭ，从而诊断所述受试者中的Ｔ１ＤＭ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：N卡林，N谢哈德，G威尔鲍姆，
申请(专利权)人：拉帕波特家族医学科学研究所，拉姆巴姆医学中心研究基金会，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]