本发明专利技术涉及含有基于醋酸盐的培养缓冲液、尿素以及指示剂的幽门螺杆菌感染诊断用脲酶反应试剂盒以及利用所述试剂盒以提供用于判断是否感染幽门螺杆菌的信息的方法。当利用本发明专利技术的试剂盒时，能够以与现有试剂盒水平相比更高的灵敏度和特异性来检测存在于检体中的幽门螺杆菌，因此能够广泛应用于由幽门螺杆菌引起的疾病的早期诊断中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及幽门螺杆菌（H.pyl〇ri)诊断用试剂盒，更具体地，涉及含有基于醋酸 盐的培养缓冲液、尿素和指示剂的幽门螺杆菌感染诊断用脲酶反应试剂盒以及利用所述试 剂盒以提供用于判断是否感染幽门螺杆菌的信息的方法。
技术介绍
幽门螺杆菌（H. pylori :Helicobacter pylori)是全球约50%以上人口被感染且 因与胃癌的相关性而受关注的微生物。临床上发现于胃肠疾病患者的胃中，被认为与胃肠 疾病的相关性很大。胃病、十二指肠溃疡并非是临床分类中简单的消化器官疾病，而是由幽 门螺杆菌引起的感染性疾病，因此其临床意义重大。所述幽门螺杆菌为弯曲形革兰氏阴性， 长约3.5 iim，宽约0.5-1. Oil m，具有一端带鞘（sheath)的四至六个单极鞭毛，鞭毛根部具 有膨胀部，其为微需氧性（microaerophilic)，呈过氧化氢酶（catalase)阴性。不同于其 他细菌，其特点为，含有脲酶（urease)，因此，分解胃里的尿素而产生氨。最适宜的氧分压 为2-8%，只有在37°C的10%的二氧化碳的条件下培养三至五天以上，才能观察到小菌落。 此外，在大气环境中，在室温条件下6小时以内全部死亡，因此很难培养，从而难以用传统 的细菌学方法进行研究。此外，幽门螺杆菌是基因多样性的细菌。当用Hindlll酶切（限 制性内切酶分析（REA :restriction_enzyme analysis))时，在幽门螺杆菌分离菌株之间， 无法观察到相同的REA现象。据说，即使用Notl酶切DNA后通过脉冲场凝胶电泳分析法 (pulse-field gel electrophoresis)进行分析，带（band)型相同的菌株也很罕见。两个 以不同方法培养的菌体的基因碱基序列，在1500个基因中只有约60%具有预期的功能，约 20%具有不被认知的同质基因，而剩余的则不具有目前已确定的相同基因。如此，在幽门螺 杆菌菌株之间，基因组的基因序列不同现象，说明幽门螺杆菌是超越目前细菌菌种概念的 多样性物种。这种基因多样性和菌株培养的难度，成为在幽门螺杆菌的菌分离鉴定中灵敏 度低的原因，而幽门螺杆菌的上述菌株现象，促使提高鉴定幽门螺杆菌的基因水平的必要 性。此外，在临床上，还存在很多待解决的有关幽门螺杆菌传染性异议的问题。与西方国家 不同，我国患有胃肠疾病的人很多，正常人群中的带菌率为60%至70%，胃炎患者中的带 菌率为64%至95%，胃溃疡患者中的带菌率为75%至96%，十二指肠溃疡患者中的带菌率 为79%至90%，胃癌患者中的带菌率为40%至60%。目前还不清楚整体呈现较高带菌率 但引起胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等分别不同疾病的原因。在这种背景下，根据临床 检体，也有可能提出幽门螺杆菌的遗传变异是否是其原因等疑问。 就我国而言，成人中约80%感染了幽门螺杆菌，世界卫生组织（World Health Organization，以下称WHO)将幽门螺杆菌分类为第I类致癌因子，其与疾病的关系非常密 切，但实际很难将其在胃里完全地杀灭。此外，专家认为，由于幽门螺杆菌的菌株之间的变 异非常复杂，近期很难期待幽门螺杆菌疫苗。在这种情况下，为了最大限度地提高治疗效 果，迫切需要更加准确、快速诊断幽门螺杆菌的方法以及根据该诊断方法尽快治疗。目前已知的幽门螺杆菌感染诊断方法分为侵入性诊断方法和非侵入性诊断方法， 侵入性诊断方法是指使用内视镜采集组织进行检查的方法，非侵入性诊断方法是指不使用 内视镜的方法。所述侵入性诊断方法有组织病理诊断法、快速尿素酶试验法（Rapid Urease Test)等，非侵入性诊断方法有血清学诊断法、尿素呼气试验法（UBT:Urease Breath Test) 等。特别是，快速尿素酶试验法是通过检测由幽门螺杆菌大量分泌的脲酶（urease)的活性 以诊断是否感染断幽门螺杆菌的方法。这种快速尿素酶试验法能够直接确认是否感染断幽 门螺杆菌，其诊断的准确率高，因此正在积极地研究用于有效地实施这种诊断的装置以及 方法。 例如，美国专利第4748113号公开了含有脲、抗菌剂、指示剂以及反应水的胃肠疾 病诊断用组合物。韩国特许公开第2000-0033013号公开了含有反应缓冲液、尿素以及指示 剂的幽门螺杆菌诊断用脲酶反应检测试剂盒。但是，美国专利第4748113号的技术，其被杂 菌污染的可能性高，而且只能检测检体中含有的脲酶活性，并且容易变性。韩国特许公开第 2000-0033013号的技术，其不易操作液状反应缓冲液，而且由于尿素浓度低，因此显色反应 缓慢。 在这种背景下，专利技术人以提供能够最大限度地降低杂菌污染且容易操作的幽门螺 杆菌感染诊断用试剂盒为目的进行研究结果发现，当使用含有基于醋酸盐的缓冲液、适当 浓度的尿素以及具有能够确认是否感染幽门螺杆菌的变色范围的指示剂的固体状脲酶反 应试剂盒时，具有高特异性和高灵敏度，从而能够诊断是否感染幽门螺杆菌，由此完成了本 专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一目的在于，提供一种固体状的幽门螺杆菌感染诊断用脲酶反应试剂 盒。 本专利技术的另一目的在于，提供一种通过使用所述试剂盒以提供判断是否感染幽门 螺杆菌的信息的方法。 作为用于实现上述目的的一实施方式，本专利技术提供一种幽门螺杆菌（H. pylori) 感染诊断用脲酶反应试剂盒，其含有培养缓冲液、尿素以及可检测PH4. 5-6. 0范围内的pH 变化的指示剂。 本专利技术中的术语"培养缓冲液（culture buffer media) "是指，能够最佳地显示出 由幽门螺杆菌分泌产生的脲酶活性，且能够提供最适合增值幽门螺杆菌的环境的缓冲液。 用于检测检体中含有的幽门螺杆菌的现有的试剂盒，存在灵敏度低的缺点，这是由于，当检 体中含有微量的幽门螺杆菌时，所述幽门螺杆菌分泌产生的脲酶的量也非常少，从而无法 准确地检测脲酶活性。为了克服这种现有试剂盒的缺点，专利技术人通过营造能够使幽门螺杆 菌增殖的环境，使检体中含有的幽门螺杆菌增殖，从而增加由此分泌产生的脲酶量，同时， 为了便于诊断，营造出能够最佳地显示脲酶活性的环境。专利技术人对能够营造出满足上述两 种条件的环境的缓冲液进行研究结果发现，当使用基于醋酸盐的缓冲液时，能够有效地使 幽门螺杆菌增殖的同时，能够最佳地显示出脲酶活性。此时，所述基于醋酸盐的缓冲液的缓 冲pH范围，只要能够营造出幽门螺杆菌的增殖环境且营造出能够显示脲酶活性的环境，则 并非限定于此，但是优选能够有效地使幽门螺杆菌增殖的PH2. 5至3. 0的范围内显示缓冲 效果的缓冲液。在所述pH范围内，幽门螺杆菌能够有效地增殖，且能够显示出脲酶的最佳 活性，除此之外，能够抑制其他杂菌生长。 本专利技术中的术语"尿素（urea) "是指，化学式为C0(NH2)2的无色结晶物质，其分子 量为60. 047,熔点为132. 7°C (latm)，比重为1. 335,是所有哺乳动物和部分鱼类的蛋白质 代谢最终分解产物，即有机化合物。一般，在体内蛋白质分解产生氨，由于所述氨具有较强 的毒性，长期滞留在体内则产生不利影响，因此肝通过鸟氨酸循环，将氨转化为具有弱毒性 的尿素，并将其暂时储存在排泄器官之后排出至体外。在本专利技术中，所本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种幽门螺杆菌感染诊断用脲酶反应试剂盒，其含有培养缓冲液、尿素以及可检测pH4.5‑6.0范围内的pH变化的指示剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：芮相秀，李垠柱，金镇首，李敬灿，
申请(专利权)人：亚山制药株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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