采用内部校正系统的诊断性试验试剂盒技术方案

本发明专利技术公开了一种采用侧流测定设备和多种测定试剂来检测测试样品中的测试分析物的诊断性试验试剂盒。所述测定试剂包括能够生成指示测试样品中测试分析物的存在或数量的检测信号的检测探针。为了进一步提高检测精度，还使用了能够生成指示校正分析物的存在或数量的校正信号的校正探针。可以利用校正信号来校正检测信号。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】采用内部校正系统的诊断性试验试剂盒 本申请是2006年1月19日申请的PCT国际申请PCT/US2006/002252于2007年 9月27日进入中国国家阶段的、申请号为200680010107. 8且专利技术名称为"采用内部校正系 统的诊断性试验试剂盒"的专利技术专利申请的分案申请。 发巧背景 测定中普遍采用了各种分析程序和设备，用W确定测试样品中可能存在的分析物 是否存在和/或浓度。例如，免疫测定法利用免疫系统机制，其中为响应作为有机体病原性 或外源性抗原的存在而产生了抗体。运些抗体和抗原，即免疫反应物能够彼此结合，由此引 起能够用来确定生物样品中特定抗原的存在或浓度的高度特异性反应机制。 有数种公知的免疫测定法，运些方法利用由可检测的成分标记的免疫反应物，从 而能够对分析物进行分析检测。例如，"夹屯、型"测定形式一般设及使测试样品与检测探针 混合，运些探针与对分析物具有特异性的结合成员（例如抗体）缀合，从而在分析物与缀合 探针之间形成配合物。然后使运些配合物与固定在检测区内的受体材料（例如抗体）相接 触。分析物/探针缀合配合物与固定的受体材料之间发生结合，从而将可检测出来W指示 分析物存在的"夹屯、"配合物定位。运项技术可用于获得定量或半定量的结果。运些夹屯、 型测定的一些实例在GriAb等人的U.S. 4, 168, 146和Tom等人的U.S. 4, 366, 241中有所 描述。另一种技术是"竞争型"测定。在竞争性测定中，标记探针通常是与分析物相同或类 似的分子缀合。因此，标记探针与目标分析物竞争存在的受体材料。竞争性测定法通常用 于检测诸如半抗原之类的分析物，每种半抗原是单价的并且仅能够结合一个抗体分子。竞 争性免疫测定设备的实例在Deutsch等人的U.S. 4, 235, 601、Liotta的U.S. 4, 442, 204和 Buechler等人的U.S. 5, 208, 535中有所记载。 阳0化]运些测定法中的许多都依赖于校正来提供有效和有意义的结果，特别是对于半定 量和定量检测而言。在外部校正系统中，通常从含有一组已知量分析物的标准样品获得标 准曲线，然后将从样品获得的结果与标准曲线进行比较，W便求出样品中分析物的存在和/ 或数量。外部校正方法相对容易设计和实施简便。然而，其经常受到环境和批次差异的影 响，因此是不可靠的。 W06] 因而开发出一些内部校正系统来克服运些问题。例如，Selmer等人的U.S. 5, 387, 503中记载了一种内部校正技术，其设及混合已知体积的样品和预定量的校正 分析物，并将所述混合物与固相载体相接触。所述固相载体含有能够在第一离散区域选择 性地结合测试分析物的试剂和能够在第二离散区域选择性地结合校正分析物的试剂。同样 将针对测试分析物的标记试剂和针对校正分析物的类似标记试剂的混合物施加于所述固 相载体。通过比较分别与测试分析物和校正分析物相结合的标记试剂水平，确定样品中测 试分析物的量。遗憾的是，运种内部校正技术不易结合到侧流（lateralflow)设备中，运 种侧流设备设及利用色谱法对分析物进行非均相分离。此外，其对预混合测定试剂的需要 很繁琐和过于复杂，特别是对于最终使用者并非受训过的医务专家或技术人员的采样现场 即时分析（point-of-care)应用而言。 因此，目前需要一种准确而相对廉价、简单并易于使用的用于侧流测定的精确内 部校正系统。
技术实现思路
根据本专利技术的一种实施方案，公开了一种用于检测测试样品中测试分析物的存在 或数量的诊断性试验试剂盒（diagnostictestkit)。运种诊断性试验试剂盒包括含有多 孔膜的侧流测定设备。所述多孔膜限定出检测区和校正区。第一受体材料固定在检测区内 而第二受体材料固定在校正区内。除了该侧流测定设备，所述诊断性试验试剂盒还包括多 种测定试剂，其中的一种或多种设置在所述侧流测定设备上。所述测定试剂包括校正分析 物、检测探针和校正探针。所述检测探针与第一特异性结合成员缀合，该第一特异性结合成 员经构造W优先与测试分析物、第一受体材料或其组合相结合。所述校正探针与第二特异 性结合成员缀合，该第二特异性结合成员经构造W优先与校正分析物、第二受体材料或其 组合相结合。 根据本专利技术的另一种实施方案，公开了一种利用侧流设备来定量或半定量地检测 测试分析物的方法。所述设备包括与检测探针和校正探针相连通的多孔膜，所述检测探针 与第一特异性结合成员相缀合，所述校正探针与第二特异性结合成员相缀合。所述多孔膜 还限定出检测区和校正区。该方法包括将所述侧流设备与校正分析物相接触；将所述侧流 设备与测试样品相接触；测量检测区产生的检测信号的强度；W及测量校正区产生的校正 信号的强度。测试分析物的量与用校正信号强度校正后的检测信号的强度成比例。 根据本专利技术的另一种实施方案，公开了一种利用侧流设备来定量或半定量地检测 测试分析物的方法。所述设备包括多孔膜，其与校正分析物、缀合有第一特异性结合成员的 检测探针、W及缀合有第二特异性结合成员的校正探针相连通。所述多孔膜还限定出检测 区和校正区。该方法包括将所述侧流设备与测试样品相接触；测量检测区产生的检测信号 的强度；W及测量校正区产生的校正信号的强度。测试分析物的量与用校正信号强度校正 后的检测信号的强度成比例。 W下更详细地论述本专利技术的其它特征和方面。 附图简要说巧 针对本领域的普通技术人员，本专利技术的全面和可实施的内容，包括其最佳方式，都 参照附图在说明书的剩余成员进行了更加具体的阐述，其中： 图1是本专利技术的侧流测定设备的一个实施方案的透视图； 图2是可W根据本专利技术使用的夹屯、测定形式的一个实施方案的示意图； 图3是可W根据本专利技术使用的间接测定形式的一个实施方案的示意图；W及 图4是可W根据本专利技术使用的竞争性测定形式的一个实施方案的示意图。 附图标记在本说明书和附图中的重复使用意味着其代表本专利技术的相同或类似特 征或元件。 代表忡连施方案详沐 定女 正如本文所用的，术语"分析物"通常是指待检测的物质。例如，分析物可包括抗 原性物质、半抗原、抗体W及运些物质的组合。分析物包括但不限于毒素、有机化合物、蛋 白质、肤、微生物、氨基酸、核酸、激素、类固醇、维生素、药物（包括那些为了治疗目的而施 用的药物和那些为了违法目的而施用的药物）、药物中间体或副产物、细菌、病毒颗粒w及 任何上述物质的代谢物或抗体。一些分析物的具体实例包括铁蛋白；肌酸激酶MB(CK-MB);地高辛；苯妥英；苯己比妥；卡马西平；万古霉素；庆大霉素；茶碱；丙戊酸；奎尼 定；促黄体生成激素（LH);促卵泡激素（FSH);雌二醇、黄体酬；C-反应蛋白；脂笼蛋白 (lipocalins) ;1姐抗体；细胞因子；维生素B2微球蛋白；糖化血红蛋白（Gly.化）；氨化可 的松；毛地黄毒巧；N-乙酷普鲁卡因酷胺（NAPA);普鲁卡因酷胺；风疹抗体，例如风疹一 IgG和风疹IgM;弓形体病抗体，例如弓形体病IgGaoxo-IgG)和弓形体病IgMaoxo-IgM);睾酬；水杨酸盐；对乙酷氨基酪；乙肝病毒表面抗原（皿sAg);乙肝核屯、抗原的抗体， 例如抗一乙肝核屯、抗原IgG和IgM(抗一皿C);人免疫缺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测测试样品中测试分析物的存在或数量的诊断性试验试剂盒，所述诊断性试验试剂盒包括：含有多孔膜的侧流测定设备，所述多孔膜限定出检测区和校正区，其中第一受体材料固定在检测区内而第二受体材料固定在校正区内；多种测定试剂，其中所述测定试剂包括设置在所述侧流设备上的校正分析物，所述测定试剂还包括设置在侧流设备上的检测区上游的检测探针和设置在侧流设备上的校正区上游的校正探针，所述检测探针与第一特异性结合成员缀合，该第一特异性结合成员经构造以优先与测试分析物结合以形成夹心配合物，所述校正探针与第二特异性结合成员缀合，该第二特异性结合成员经构造以优先与校正分析物结合以形成夹心配合物；其中所述测试分析物和校正分析物均为五聚环蛋白；所述检测探针和校正探针在测试样品应用之前设置在测定设备上，并且所述校正分析物在检测探针和校正探针的上游应用，其中所述检测区能够产生检测信号并且所述校正区能够产生校正信号，通过校正信号的强度校正的所述检测信号的强度与测试样品中测试分析物的浓度直接成正比。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：宋旭东，C·O·奇德贝卢埃泽，R·M·M·凯洛，
申请(专利权)人：金伯利克拉克环球有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US